检索结果-内蒙古大学图书馆

一株H4N6亚型禽流感病毒A/duck/Guangdong/W8/2011(H4N6)的全基因组测序及遗传进化分析

中国兽医科学 2013年第9期43卷 893-899页

作者：张长辉亓文宝田进李华楠黄丽红焦培荣徐成刚廖明华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广东广州510642

为了解H4N6亚型禽流感病毒A/duck/Guangdong/W8/2011(H4N6)的来源、特征及分子演化规律,对该病毒进行了全基因组序列扩增,结合GenBank中已收录的H4N6亚型流感病毒及其他相关毒株序列进行了遗传进化分析。结果显示,该病毒的HA基因裂解位... 详细信息

为了解H4N6亚型禽流感病毒A/duck/Guangdong/W8/2011(H4N6)的来源、特征及分子演化规律,对该病毒进行了全基因组序列扩增,结合GenBank中已收录的H4N6亚型流感病毒及其他相关毒株序列进行了遗传进化分析。结果显示,该病毒的HA基因裂解位点附近的氨基酸序列为PEKASR↓GLF,符合典型低致病性禽流感病毒的特征。该病毒的HA、NA、PB2、PA和M基因与我国周边国家和地区的H4N6毒株亲缘关系较近,而其PB1、NP和NS基因与国内不同亚型的禽流感毒株亲缘关系较近;同时这些周边国家和地区均是候鸟迁徙的重要栖息地,这表明A/duck/Guangdong/W8/2011(H4N6)可能是由国外H4N6毒株随候鸟迁徙传入我国,并在鸭体内与其他禽流感毒株发生基因重组形成的重组病毒。

关键词：禽流感病毒 H4N6 分离鉴定进化分析

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STM2503调控鼠伤寒沙门菌的生物被膜形成和压力适应性

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中国农业科学 2024年第16期57卷 3294-3304页

作者：王南威李莉莉陈凯风周洲平潘鹏关晋徐成刚廖明张建民华南农业大学兽医学院/人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室/农业农村部人兽共患病重点实验室/农业农村部兽用疫苗创制重点实验室/广东省动物源性人兽共患病重点实验室

【目的】通过揭示c-di-GMP通路基因STM2503调控鼠伤寒沙门菌生物被膜形成，进而影响其环境应激能力的机制，以期挖掘调控鼠伤寒沙门菌压力适应性的关键因子，为防控策略的制定提供理论依据。【方法】以λ-Red同源重组方法构建STM2503缺... 详细信息

【目的】通过揭示c-di-GMP通路基因STM2503调控鼠伤寒沙门菌生物被膜形成，进而影响其环境应激能力的机制，以期挖掘调控鼠伤寒沙门菌压力适应性的关键因子，为防控策略的制定提供理论依据。【方法】以λ-Red同源重组方法构建STM2503缺失株，并利用质粒PBAD表达STM2503来构建相应的基因回补株。然后通过检测不同STM2503表达水平菌株中信号分子c-di-GMP的含量揭示STM2503对菌株胞内c-di-GMP水平的影响。接下来，利用细菌运动性检测、结晶紫染色等试验检测了STM2503对菌株运动性和生物被膜形成能力的影响，并利用实时荧光定量PCR从基因层面揭示其对菌株运动性和生物被膜形成的调控机制。最后，通过抗生素处理、氧化应激、消毒剂应激等试验探究了STM2503对鼠伤寒沙门菌压力适应性的影响。【结果】与野生株（WT269）相比，STM2503的缺失使菌株胞内c-di-GMP含量升高了37.51%(P<0.001)，且不影响菌株的正常生长。另外，STM2503的缺失提高了菌株各胞外基质合成基因的表达水平，使缺失株胞外多糖、胞外DNA和胞外蛋白质含量分别增加了10.30%(P<0.01)、33.59%(P<0.001)和27.60%(P<0.01)，最终使菌株的生物被膜形成能力显著增强了1.63倍（P<0.01）。并且，269ΔSTM2503通过降低鞭毛合成相关基因fliA与flhC的表达使其在6 h的运动直径较野生株相比下降了17.22%(P<0.01)。这些变化最终导致269ΔSTM2503菌株对头孢噻肟、头孢吡肟、阿莫西林等β-内酰胺类抗生素的敏感性降低1—3倍，且在氧胁迫和SDS消毒剂胁迫下表现出了更强的适应能力。【结论】STM2503参与信号分子c-di-GMP的降解，并通过抑制胞外基质的合成降低鼠伤寒沙门菌的生物被膜形成能力，通过上调鞭毛合成基因的表达增强菌株的运动性，进而降低菌株的耐药性和环境压力适应能力，本研究为鼠伤寒沙门菌关键防控靶点的挖掘提供了理论基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌 c-di-GMP STM2503 生物被膜运动性

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H5N1亚型禽流感病毒HA基因杆状病毒双表达系统的构建及其在小鼠的免疫原性分析

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畜牧兽医学报 2013年第3期44卷 427-433页

作者：樊惠英林文耀佟铁铸张杰叶昱靳立明张春雷廖明华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广州510642 广东惠州出入境检验检疫局惠州516006

高致病性禽流感严重制约着禽类产业链的健康发展,以H5N1为代表的高致病性禽流感病毒能够跨越种间障碍感染人,对公共卫生安全造成极大危害。而预防禽流感的传统疫苗主要是全病毒灭活苗,该类疫苗使用量大,灭活不全时易造成散毒,并给流行... 详细信息

高致病性禽流感严重制约着禽类产业链的健康发展,以H5N1为代表的高致病性禽流感病毒能够跨越种间障碍感染人,对公共卫生安全造成极大危害。而预防禽流感的传统疫苗主要是全病毒灭活苗,该类疫苗使用量大,灭活不全时易造成散毒,并给流行病学监测带来困难。研发更加安全、高效的新型疫苗势在必行。本研究选取H5N1亚型流感病毒的HA蛋白作为靶抗原,构建重组杆状病毒BV-G-H5N1-HA。重组病毒本身可刺激机体天然免疫反应,通过基因改造一方面能在真核细胞内大量表达靶抗原,同时可以将靶抗原展示在重组杆状病毒囊膜表面,兼具DNA疫苗和亚单位疫苗的安全性和有效性。小鼠试验结果表明,BV-G-H5N1-HA免疫组能产生较高水平的中和抗体、HI抗体,BV-G-H5N1-HA免疫组攻毒保护率达91.7%。以上数据表明,BV-G-H5N1-HA可以作为一种新型候选疫苗,为H5N1亚型高致病性禽流感的防控贡献力量,为其他亚型疫苗的研究提供参考。

关键词：禽流感疫苗 H5N1 HA 杆状病毒表达系统

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副猪嗜血杆菌ompP2基因的克隆鉴定及序列分析

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中国动物传染病学报 2017年第1期25卷 45-49页

作者：贾爱卿王贵平樊惠英廖明华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广州510642 广东海大畜牧兽医研究院广州511400

本文用PCR技术对华南地区分离的15株不同血清型副猪嗜血杆菌菌株和2株国际参考菌株的外膜蛋白编码基因ompP2基因进行克隆鉴定，并以CLUSTALS1和PHYLIP-3.68软件将ompP2基因序列进行比对和遗传进化分析。17株副猪嗜血杆菌菌株均能扩出om... 详细信息

本文用PCR技术对华南地区分离的15株不同血清型副猪嗜血杆菌菌株和2株国际参考菌株的外膜蛋白编码基因ompP2基因进行克隆鉴定，并以CLUSTALS1和PHYLIP-3.68软件将ompP2基因序列进行比对和遗传进化分析。17株副猪嗜血杆菌菌株均能扩出ompP2基因，克隆测序结果发现ompP2基因长度为1077~1092bp，其中菌株H37、H38和H49中P2存在两段34~39个氨基酸的保守插入序列。β折叠预测结果显示H37、H38和H49比其他菌株多一个环结构。遗传进化分析显示H37、H38和H493株含有插入片段的菌株聚为一群，与其他菌株遗传距离相对较远。上述结果为进一步验证ompP2蛋白的功能及相关研究奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌 ompP2基因序列分析进化树

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广东省两株猪源戊型肝炎病毒的分离鉴定及其全基因序列分析

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中国预防兽医学报 2013年第7期35卷 542-545页

作者：梁焕斌张桂红张亮权王衡王德刚梁楚敏华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室/广东省动物源性人畜共患病预防与控制重点实验室广东广州510642

为进一步了解广东省近年猪戊型肝炎病毒(HEV)基因组特点及其演化情况,本研究于2010年～2011年间从广东省不同地区猪场收集的69份病猪胆汁样品中,分离得到两株猪源HEV(命名为SS19和ZS11)。采用通用引物通过PCR方法扩增病毒的全基因序列... 详细信息

为进一步了解广东省近年猪戊型肝炎病毒(HEV)基因组特点及其演化情况,本研究于2010年～2011年间从广东省不同地区猪场收集的69份病猪胆汁样品中,分离得到两株猪源HEV(命名为SS19和ZS11)。采用通用引物通过PCR方法扩增病毒的全基因序列。应用DNAStar和MEGA 5基因分析软件,将分离株与24株不同基因型的HEV参考序列进行核苷酸全序列比对和遗传进化分析。结果显示,分离的两株猪源HEV SS19和ZS11的核苷酸序列相似性为95.6%,两个病毒分离株与基因Ⅳ型HEV各参考病毒株核苷酸序列最为接近,其相似性分别为83.2%～94.5%和83.6%～94.6%,并且均属于基因Ⅳ型HEV。实验结果表明,广东省HEV流行病毒株仍以基因IV型为主,病毒株之间存在一定的地域局限性。

关键词：猪戊型肝炎病毒分离鉴定序列分析

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副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2的提取及鉴定

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中国畜牧兽医 2014年第9期41卷 225-230页

作者：罗银珠徐成刚周素明冯赛祥贺现辉樊惠英廖明辛朝安华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东广州510642 宁波大学海洋科学院海洋生物应用重点实验室浙江宁波315211

为简化副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)外膜蛋白中的单一蛋白外膜蛋白P2(OmpP2)的分离步骤,降低膜蛋白分离的设备要求,本试验用Hps标准3型(SW114)、5型(Nagasaki)菌株作为试验材料,选用溶菌酶、核酸酶对Hps进行酶解以获得其完... 详细信息

为简化副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)外膜蛋白中的单一蛋白外膜蛋白P2(OmpP2)的分离步骤,降低膜蛋白分离的设备要求,本试验用Hps标准3型(SW114)、5型(Nagasaki)菌株作为试验材料,选用溶菌酶、核酸酶对Hps进行酶解以获得其完整外膜,然后利用含有2%tritonX-100缓冲液对外膜进行进一步解离,最后利用适量浓度的胰酶对强疏水蛋白进行酶解,实现了Hps高纯度OmpP2的体外快速提取。SDS-PAGE结果显示,上述2株菌OmpP2大小分别约为43和38ku;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)鉴定结果显示,从上述蛋白酶解下来的肽段经比对与Hps的OmpP2完全吻合。斑点杂交(Dot-blot)显示采自Hps患病猪血清在点有5型菌株(Nagasaki)OmpP2和点有3型菌株(SW114)OmpP2NC膜上均发生杂交显色反应,该结果暗示OmpP2是一个具有免疫活性的抗原。本研究为OmpP2功能及免疫保护性研究奠定了基础,也为副猪嗜血杆菌病免疫学诊断提供新的参考。

关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2 提取鉴定

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与鸡内皮血管瘤病例相关的禽白血病病毒K亚群分离及其gp85基因演化分析

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畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 1127-1136页

作者：梁灿新郑小雪舒雪利周婉怡廖明曹伟胜华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室农业部兽用疫苗创制重点实验室广州510642

本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡... 详细信息

本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡群为父母代花鸡,发病率约为2%,剖检无其他肉眼表观病变,病理组织学诊断为内皮血管瘤。RT-PCR检测肿瘤组织表明为K亚群禽白血病病毒(ALV-K)感染,无其他禽肿瘤性病毒感染。对患病鸡的血浆样品(32份)、肿瘤组织匀浆(6份)及脑组织匀浆(6份)进行病毒的分离鉴定,成功从脑组织样品中分离到4个ALV-K毒株(GXJL01~GXJL04)。使用特异性引物扩增GXJL01~GXJL04的env基因并测序,在与华南地区其他5个规模化种禽场中分离获得的7个ALV-K流行株的gp85基因的遗传演化分析中表明,GXJL01~GXJL04与日本的Km5844、Sp53等神经胶质瘤毒株(fowl glioma-inducing virus, FGV)及具有神经组织嗜性的ALV-K毒株JS15SG01同一进化分支上,与本研究其他7个ALV-K分离株的遗传进化关系较远。同时在针对ALV-K的gp85蛋白氨基酸位点突变分析中发现,GXJL01~GXJL04存在多个与FGV和JS15SG01参考株相似的氨基酸位点突变。本研究首次把地方黄羽鸡品种花鸡头部的肿块诊断为内皮血管瘤,且ALV-K为内皮血管瘤的主要相关病原,分离株GXJL01~GXJL04区别于现行华南地区ALV-K流行株且与FGV、JS15SG01等神经组织嗜性的毒株高度同源。

关键词：黄羽肉鸡鸡内皮血管瘤 K亚群禽白血病病毒遗传进化分析

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广东地方品种鸡ALV-K分子流行病学及gag基因12 bp缺失对病毒体外复制能力影响的研究

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畜牧兽医学报 2022年第11期53卷 3956-3966页

作者：郭妍妍梁灿新李锦群董欣怡廖明曹伟胜华南农业大学兽医学院人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室农业部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广州510642

为了解目前广东地方品种鸡K亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-K)的分子特征,于2020-2021年,从广东7家(A~G)正在进行外源性ALV净化的、外观健康的规模化种禽场核心群采集抗凝血样品共8042份。通过血浆接种DF-1细胞、ELISA检测... 详细信息

为了解目前广东地方品种鸡K亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-K)的分子特征,于2020-2021年,从广东7家(A~G)正在进行外源性ALV净化的、外观健康的规模化种禽场核心群采集抗凝血样品共8042份。通过血浆接种DF-1细胞、ELISA检测p27抗原,共检出357份阳性,并对ELISA结果S/P值0.2~0.6的150份阳性样品进行PCR鉴定和env基因测序,共分离到32株ALV-K,进一步选取16株进行全基因组扩增及测序分析。结果显示,这16株ALV-K全长为7481~7496 bp,基因组符合5′-LTR-UTR-gag-pol-env-UTR-LTR-3′典型的反转录病毒结构,不含已知致癌基因;其gp85基因与ALV-K参考株位于同一进化分支上且相似性最高(>94.0%);其pol、gp37基因均比较保守,与ALV各亚群相似性均较高(>94.0%);其LTR与内源性ALV及大多数ALV-K参考株相似性最高(91.4%~99.5%),且LTR U3区与内源性ALV LTR有相同的转录调控元件;此外,观察到31.3%(5/16)的分离株在gag基因373-384位核苷酸存在12 bp的缺失,进一步以缺失株GD20 JM10为亲本,通过PCR分段扩增和同源重组的方法分别构建了缺失株(rGD20 JM10)和回补株(rGD20 JM10 A12)的cDNA克隆,将其转染DF-1细胞,ELISA和IFA结果表明,病毒拯救成功;体外复制动力学结果显示,两者差异不显著(P>0.05)。本研究所调查的广东7个种禽场的ALV-K流行株均携带内源性LTR,且分子特征较为稳定,故采用更敏感的检测技术在开展ALV净化时尤为重要,此外,gag基因373—384位核苷酸的规律性缺失对病毒的体外复制能力无显著影响。

关键词： K亚群禽白血病病毒地方品种鸡分子流行病学 gag基因感染性克隆

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J亚群禽白血病病毒血液核酸筛查技术的建立

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畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 1115-1126页

作者：董欣怡李锦群陈钦玺廖明曹伟胜华南农业大学兽医学院人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室农业部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广州510642

为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood ... 详细信息

为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood quantitative polymerase chain reaction, ALV-J-B-qPCR)。根据GenBank中ALV-J pol及env基因序列,设计ALV-J的特异性引物,并优化反应条件,建立了ALV-J SYBR GreenⅠqPCR检测方法。以ALV-J病毒分离为阳性的鸡抗凝血为实验材料,分别制备抗凝血DNA、血细胞DNA、外周血淋巴细胞DNA、外周血淋巴细胞cDNA和血浆cDNA 5类血液检测模板进行ALV-J的PCR检测,筛选最佳检测模板;进一步比较蒸馏水破裂红细胞法提取混合血液DNA的混样方法,血液混样总体积为200μL的混样方法,血液混样总体积为10μL的混样方法共3种混样方法的检测准确性,筛选最佳混样方法。综合上述qPCR方法、检测模板与混样方法,成功建立了ALV-J-B-qPCR。运用ALV-J-B-qPCR分别进行预期流行率为1%~2%、4%~5%场景下的模拟筛查试验,并与病毒分离法比较。qPCR方法的特异性、灵敏性和重复性试验显示,该方法仅特异性扩增ALV-J,对标准质粒的最低检测限度为1×10^(2)copies·μL^(-1),批内与批间变异系数均<1%。对90份临床送检血液样品的检测结果显示,该qPCR方法对ALV-J的检出率(15.6%)高于p27抗原ELISA和普通PCR的检出率(12.2%)。检测模板筛选试验中,抗凝血DNA最符合检测准确度高、操作复杂度和成本低的要求,为最佳检测模板。混样方法摸索试验中,混样总体积为10μL(混样规模<12份)的混样方法检测准确性最高,为最佳混样方法。在样本数为400份,预期流行率为4%~5%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为6.25%,比病毒分离法高2.00%;在样本数为400份,预期流行率为1%~2%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为2.25%,比病毒分离法高0.75%。本研究建立的ALV-J-B-qPCR技术具有灵敏性高、检测快速和节约成本的优势,为种禽场加快ALV净化进程提供了新的思路和方法。

关键词： J亚群禽白血病病毒实时荧光定量PCR 混样检测筛查技术

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鸡TRIM25蛋白可促进宿主对禽流感病毒的天然免疫应答

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中国科学：生命科学 2018年第12期48卷 1273-1278页

作者：曲楠楠陈祖贤赵冰兵刘伟强刘智婷王霞何婉婷瞿孝云焦培荣华南农业大学兽医学院人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室农业部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广州510642

TRIM家族蛋白在抗病毒天然免疫中发挥着重要作用.然而,鸡TRIM25(chicken tripartite motif25,chTRIM25)蛋白对禽流感病毒复制的影响仍不明确.本文旨在克隆chTRIM25基因并初步分析其功能.首先应用RT-PCR方法,从鸡成纤维细胞(chicken embr... 详细信息

TRIM家族蛋白在抗病毒天然免疫中发挥着重要作用.然而,鸡TRIM25(chicken tripartite motif25,chTRIM25)蛋白对禽流感病毒复制的影响仍不明确.本文旨在克隆chTRIM25基因并初步分析其功能.首先应用RT-PCR方法,从鸡成纤维细胞(chicken embryo fibroblast, CEF)中扩增chTRIM25基因.序列分析发现, chTRIM25基因可读框全长1902 bp,编码633个氨基酸,预测其分子量为71.42 kD.结构预测发现, chTRIM25蛋白的21～66位氨基酸为RING结构域, 110～146位氨基酸为B-box1结构域, 160～189位氨基酸为B-box2结构域, 208～311位氨基酸则为卷曲螺旋结构域, 465～633位氨基酸则为B30.2结构域.同源性分析发现,鸡TRIM25与鸭和鹅TRIM25氨基酸序列同源性在74%～77%,具有较高的同源性;而鸡TRIM25与人和鼠TRIM25的氨基酸序列同源性在46%左右,同源性较低.荧光定量实验发现,在禽流感病毒感染CEF后, TRIM25及相关抗病毒相关因子的表达量上调;也发现,TRIM25可以促进流感病毒对天然免疫信号通路的激活.这为深入了解TRIM25基因在禽流感病毒感染宿主后激发的宿主抗病毒天然免疫应答提供实验基础.

关键词：禽流感病毒鸡TRIM25 鉴定天然免疫应答

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