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华南农业大学学报 2024年第3期45卷 311-320页

作者：姚梓淇廖立钦宋佳蓓张新珩谢青梅华南农业大学动物科学学院/岭南现代农业科学与技术广东省实验室河源分中心/广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广东广州510642

【目的】以提高诱导鸡多能干细胞的干性为目的,利用Pcgf2基因与传统诱导多能干细胞的重编程因子共同诱导鸡多能干细胞。【方法】以鸡早期胚胎为模板,对Oct4、Sox2、Nanog、Lin28、C-myc、Klf4这6种传统的重编程因子及Pcgf2进行基因扩增... 详细信息

【目的】以提高诱导鸡多能干细胞的干性为目的,利用Pcgf2基因与传统诱导多能干细胞的重编程因子共同诱导鸡多能干细胞。【方法】以鸡早期胚胎为模板,对Oct4、Sox2、Nanog、Lin28、C-myc、Klf4这6种传统的重编程因子及Pcgf2进行基因扩增,并与慢病毒载体重组为慢病毒质粒,在包装慢病毒并测定相对应的病毒滴度后,分组感染鸡胚成纤维细胞,在诱导的过程中对干细胞标记物进行检测。【结果】利用传统的重编程因子组合与加入Pcgf2共同诱导后的细胞都较早地表达出磷酸酶活性。加入Pcgf2诱导多能干细胞可以使细胞更早地出现类干细胞形态,且内源性基因Oct4、Sox2、Nanog和Lin28的表达得到更稳定的提高。【结论】Pcgf2在加入诱导体系后可以有效提高细胞的重编程接近干细胞状态。该研究可为选择重编程因子诱导鸡细胞完全重编程及其机制研究提供理论参考。

关键词：鸡慢病毒多能转录因子鸡胚成纤维细胞体细胞重编程诱导多能干细胞

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Pcgf2对鸡胚胎成纤维细胞重编程为诱导多能干细胞的促进

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华南农业大学学报 2024年

作者：姚梓淇廖立钦宋佳蓓张新珩谢青梅华南农业大学动物科学学院/岭南现代农业科学与技术广东省实验室河源分中心/广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室

【目的】以提高诱导鸡多能干细胞干性为目的，利用Pcgf2基因与传统诱导多能干细胞的重编程因子共同诱导鸡多能干细胞。【方法】以鸡早期胚胎为模板对Oct4、Sox2、Nanog、Lin28、C-myc、Klf4这6种传统的重编程因子及Pcgf2进行基因扩增，... 详细信息

【目的】以提高诱导鸡多能干细胞干性为目的，利用Pcgf2基因与传统诱导多能干细胞的重编程因子共同诱导鸡多能干细胞。【方法】以鸡早期胚胎为模板对Oct4、Sox2、Nanog、Lin28、C-myc、Klf4这6种传统的重编程因子及Pcgf2进行基因扩增，并与慢病毒载体重组为慢病毒质粒，在包装慢病毒后且测定相对应的病毒滴度后，分组感染鸡胚胎成纤维细胞，在诱导的过程中对干细胞标记物进行检测。【结果】利用传统的重编程因子组合与加入Pcgf2共同诱导后的细胞都较早地表达出磷酸酶活性。加入Pcgf2诱导多能干细胞可以使细胞更早地出现类干细胞形态，且内源性基因Oct4、Sox2、Nanog以及Lin28的表达得到更为稳定的提高。【结论】Pcgf2在加入诱导体系后可以有效提高细胞的重编程接近干细胞状态。该试验结果可为诱导鸡完全重编程细胞的重编程因子的选择与机制研究提供理论参考。

关键词：慢病毒多能转录因子 CEF 体细胞重编程鸡iPSC

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好氧堆肥对畜禽粪便氟喹诺酮类抗性基因消减的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2024年第2期 22-27页

作者：陆婷婷刘卿黄楷雯张欣林海尧普梓伦吴银宝华南农业大学动物科学学院广州510642 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东茂名525000 广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广州510642

在畜禽养殖业中,氟喹诺酮类抗菌药(fluoroquinolones antibiotics, FQs)的广泛使用导致氟喹诺酮类抗性基因(fluoroquinolones resistance genes, FRGs)在环境中传播,对环境生态造成威胁。目前,好氧堆肥是去除FRGs的有效手段之一。笔者... 详细信息

在畜禽养殖业中,氟喹诺酮类抗菌药(fluoroquinolones antibiotics, FQs)的广泛使用导致氟喹诺酮类抗性基因(fluoroquinolones resistance genes, FRGs)在环境中传播,对环境生态造成威胁。目前,好氧堆肥是去除FRGs的有效手段之一。笔者综述了畜禽粪便好氧堆肥中不同因素[FQs、微生物群落、可移动遗传元件(mobile genetic elements, MGEs)、环境因素(温度、pH值、含水量、碳氮比、电导率等)和重金属]对FRGs去除效果的影响,旨在为FRGs的有效控制提供参考。

关键词：畜禽粪便好氧堆肥氟喹诺酮类抗菌药氟喹诺酮类抗性基因

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畜禽源四环素类抗生素抗性基因的归趋及影响因素

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黑龙江畜牧兽医 2022年第19期 31-35页

作者：唐小月陈涛王微唐婧张淼王文强魏文晓吴银宝华南农业大学动物科学学院广州510642 岭南现代农业科学与技术广东省实验室广州510642 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东茂名525000 广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广州510642

兽用抗生素在畜禽养殖行业的不合理使用导致抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes,ARGs)在农业环境中广泛传播,严重危胁人类健康及生态安全。畜禽源四环素类抗生素降解难、残留重等问题严重困扰着畜牧业的可持续发展。因此,文章... 详细信息

兽用抗生素在畜禽养殖行业的不合理使用导致抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes,ARGs)在农业环境中广泛传播,严重危胁人类健康及生态安全。畜禽源四环素类抗生素降解难、残留重等问题严重困扰着畜牧业的可持续发展。因此,文章综述了四环素类抗性基因(tetracycline resist⁃ance genes,TRGs)的类别、在畜禽粪便中的残留情况,在农业环境中的传播途径、传播方式,以及细菌自身系统、环境胁迫因子和可移动遗传元件等影响基因水平传播的因素,以期为有效防控畜禽源四环素类抗生素抗性基因在农业环境中的传播提供参考。

关键词：抗生素抗性基因四环素类抗生素传播途径水平基因转移畜禽粪便

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猪催乳素的真核表达与生物活性验证

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华南农业大学学报 2024年第2期45卷 179-189页

作者：谢社风韩贝贝高凤磊马莹李莉张守全邹娴卫恒习国家生猪种业工程技术研究中心/广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室/华南农业大学动物科学学院广东广州510642 广东农工商职业技术学院热带农林学院广东广州510507 广东省农业科学院动物科学研究所广东广州510640 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东茂名525000

【目的】催乳素(Prolactin,PRL)具有广泛的生理调节作用,但其多效性机制仍不清楚。为了更好地研究猪PRL的多效性,本研究制备猪源PRL真核重组蛋白并验证其生物活性。【方法】利用分子克隆技术将猪PRL基因克隆到慢病毒表达载体pCDH-CMV-MC... 详细信息

【目的】催乳素(Prolactin,PRL)具有广泛的生理调节作用,但其多效性机制仍不清楚。为了更好地研究猪PRL的多效性,本研究制备猪源PRL真核重组蛋白并验证其生物活性。【方法】利用分子克隆技术将猪PRL基因克隆到慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro中,经慢病毒包装获得携带猪PRL基因的PRL-慢病毒;用浓缩的PRL-慢病毒感染CHO-K1细胞,经嘌呤霉素筛选后,获得能够分泌PRL重组蛋白的阳性细胞系CHO-K1-PRL;利用镍柱亲和层析法对重组蛋白进行纯化并进行LC-MS/MS质谱鉴定,利用HC11细胞体外培养体系验证PRL重组蛋白的生物活性。【结果】成功构建了携带猪PRL基因的pCDH-CMV-6His-PRL-6HisEF1-GFP+Puro慢病毒表达载体;包装及浓缩后的PRL-慢病毒滴度为9.9×10^(8) TU/mL,其感染的CHO-K1细胞经嘌呤霉素筛选后得到阳性细胞系CHO-K1-PRL;从CHO-K1-PRL细胞培养液中成功纯化出重组蛋白,质量浓度为50μg/mL,LC-MS/MS质谱分析的覆盖率达94%,鉴定为猪PRL重组蛋白;重组PRL具有促进HC11细胞增殖及酪蛋白表达的生物活性。【结论】构建的细胞系CHO-K1-PRL可稳定表达具有生物活性的猪重组PRL,为猪PRL功能的研究和生产应用奠定了基础。

关键词：猪催乳素 CHO-K1细胞真核表达慢病毒载体重组蛋白

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猪DNA甲基转移酶基因家族进化分析

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中国畜牧兽医 2022年第9期49卷 3283-3291页

作者：龚文滔潘向春蔡佳丽王祎菲李加琪张哲袁晓龙华南农业大学动物科学学院广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室国家生猪种业工程技术研究中心广州510642 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心茂名525000

【目的】探究猪DNA甲基转移酶(DNMT)基因家族的基因特性及表达模式。【方法】利用生物信息学方法鉴定猪全基因组范围的DNMT基因家族,并对其染色体定位、理化性质、蛋白质结构、亚细胞定位、基因结构、保守基序、系统进化关系、共线性关... 详细信息

【目的】探究猪DNA甲基转移酶(DNMT)基因家族的基因特性及表达模式。【方法】利用生物信息学方法鉴定猪全基因组范围的DNMT基因家族,并对其染色体定位、理化性质、蛋白质结构、亚细胞定位、基因结构、保守基序、系统进化关系、共线性关系和基因表达模式进行分析。【结果】共鉴定得到5个猪DNMT基因家族成员:Pig DNMT 1、Pig DNMT 2、Pig DNMT3、Pig DNMT4和Pig DNMT5,分别位于2、3、13、14、17号染色体上。猪DNMT基因家族进化树分析发现,PigDNMT1和PigDNMT4、PigDNMT2和PigDNMT5的亲缘关系较近。PigDNMT2和PigDNMT5具有相同数量和排列顺序的保守基序,但在基因结构上差异较大。系统进化树结果揭示,猪、人、小鼠和牛的DNMT基因家族分为4个亚族,其中猪与牛的DNMT基因家族亲缘关系更近。基因共线性分析显示,猪与人、小鼠、牛之间都具有4对直系同源DNMT基因,表明4个物种的DNMT基因间存在较强的共线性关系。猪DNMT家族蛋白长度在228~1706个氨基酸之间,分子质量在26133.32~192267.80 u之间,等电点在6.00~9.06之间。二级结构预测分析结果显示,猪DNMT蛋白主要由无规则卷曲组成。亚细胞定位分析发现,5个猪DNMT蛋白定位于细胞核。母猪性腺轴的转录组数据分析发现,PigDNMT1在下丘脑、垂体和卵巢组织中随着初情启动过程而展现出不同的表达模式。【结论】本研究在猪基因组上共鉴定出5个DNMT基因,并发现性腺轴组织中的PigDNMT1在初情启动过程中呈现出不同的表达模式,为解析猪DNMT基因家族功能提供一些参考。

关键词：猪 DNA甲基转移酶(DNMT) 系统进化表达分析

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强力霉素降解菌在蛋鸡粪堆肥中的应用及其抗性风险研究

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中国家禽 2022年第10期44卷 69-76页

作者：钱昱良杨振边马保华邹永德张娜吴银宝华南农业大学动物科学学院广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广东广州510642 佛山海关综合技术中心广东佛山528200 岭南现代农业科学与技术广东省实验室广东广州510642

为研究强力霉素降解菌假丝酵母和苍白杆菌在蛋鸡粪堆肥中的应用效果以及潜在抗生素抗性传播风险,试验以蛋鸡粪为原料、锯末为调理剂,采用动态箱式堆肥装置进行堆肥试验,试验分成4组:空白对照组堆肥中不添加强力霉素和强力霉素降解菌,强... 详细信息

为研究强力霉素降解菌假丝酵母和苍白杆菌在蛋鸡粪堆肥中的应用效果以及潜在抗生素抗性传播风险,试验以蛋鸡粪为原料、锯末为调理剂,采用动态箱式堆肥装置进行堆肥试验,试验分成4组:空白对照组堆肥中不添加强力霉素和强力霉素降解菌,强力霉素组、假丝酵母组和苍白杆菌组堆肥中分别添加85 mg/kg强力霉素、85 mg/kg强力霉素+0.5%假丝酵母和85 mg/kg强力霉素+0.5%苍白杆菌。试验期25 d。定期检测堆体中强力霉素和6-差向强力霉素浓度及四环素类抗性基因tetA、tetM、tetW和tetX的绝对丰度。结果显示:强力霉素降解菌的加入未显著影响堆体温度和pH;强力霉素降解菌使堆肥高温期强力霉素的降解率显著提升5.67%~10%(P<0.05),7 d时强力霉素组、假丝酵母组、苍白杆菌组强力霉素的降解率分别为24.00%、32.33%和31.00%;假丝酵母和苍白杆菌的加入使堆肥结束时6-差向强力霉素的浓度比强力霉素组分别显著降低13.17%和6.74%(P<0.05);堆肥结束时空白对照组、强力霉素组、假丝酵母组和苍白杆菌组tetA的去除率分别为14.34%、15.03%、12.82%和15.01%(P<0.01);tetM的去除率均为100%;tetW的去除率分别为45.62%、47.91%、50.76%和56.51%(P<0.01);tetX的去除率分别为12.17%、7.12%、4.08%和16.90%(P<0.05)。综上所述,本试验条件下添加外源性强力霉素降解菌能显著提高堆肥高温期强力霉素的降解率,显著增强堆肥过程中6-差向强力霉素的降解,且未增加tetA、tetM、tetW和tetX抗性基因的传播风险。

关键词：蛋鸡粪强力霉素堆肥降解菌抗生素抗性基因

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定时输精对经产母猪繁殖性能及生殖激素的影响

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中国畜牧兽医 2021年第10期48卷 3726-3733页

作者：范玉珊吴俊辉高凤磊郭聪慧谢绍怡孟立李莉张守全卫恒习华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广州510642 广东农工商职业技术学院广州510507 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心茂名525000

试验旨在建立高效的经产母猪定时输精(timed artificial insemination,TAI)技术,研究了定时输精对经产母猪繁殖性能、断奶-分娩间隔、不同胎次母猪产仔性能及断奶后7 d内血清生殖激素水平的影响。选取309头2~8胎次二元(长×大)经产... 详细信息

试验旨在建立高效的经产母猪定时输精(timed artificial insemination,TAI)技术,研究了定时输精对经产母猪繁殖性能、断奶-分娩间隔、不同胎次母猪产仔性能及断奶后7 d内血清生殖激素水平的影响。选取309头2~8胎次二元(长×大)经产母猪,随机分为对照组和试验组,对照组母猪进行常规人工授精(artificial insemination,AI),试验组母猪进行断奶后24 h注射PMSG 1000 IU,间隔72 h注射GnRH 100μg,在注射GnRH后24和40 h各输精1次的定时输精技术。通过统计两组母猪的断奶1周内发情率、受胎率、分娩率、窝均产仔数等,判断定时输精对经产母猪繁殖性能的影响;通过对断奶时间和分娩时间的统计,检测定时输精对经产母猪断奶-分娩间隔的影响;用放射免疫(RIA)方法检测2~4胎次母猪断奶1周内血清E2、LH、FSH和P4的含量,研究定时输精对母猪生殖激素的影响。结果显示,试验组母猪发情率显著高于对照组(P<0.05),但两组间受胎率、分娩率差异不显著(P>0.05),窝均产仔数、窝均合格仔数和繁殖效率有增加的趋势,但差异不显著(P>0.05);定时输精显著缩短了母猪的断奶-分娩间隔(P<0.05)。在胎次方面,3~4胎母猪使用定时输精的效果较好,其发情率、受胎率和分娩率均显著高于对照组(P<0.05)。在生殖激素方面,试验组E2水平在注射PMSG后迅速上升,且在定时输精处理后66~96 h内持续高于对照组(P<0.05),试验组P4水平在断奶后至配种前显著低于对照组(P<0.05),但配种后快速升高,并高于对照组;LH和FSH的含量在两组间无显著差异。综上,定时输精可有效提高经产母猪的断奶发情率,并减少其非生产天数,可显著提高3~4胎母猪的繁殖性能。

关键词：经产母猪定时输精技术(TAI) 繁殖性能生殖激素胎次

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催乳素及血管抑制素对哺乳动物卵泡发育的调控作用研究进展

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中国畜牧杂志 2022年第10期58卷 107-113页

作者：谢社风高凤磊李菊韩贝贝李承德卫恒习华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广东广州510642 广东农工商职业技术学院热带农林学院广东广州510507 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东茂名525000

哺乳动物卵泡发育主要受到卵巢轴生殖激素的调控。催乳素(PRL)作为经典的生殖激素可通过内分泌途径调控卵泡发育,也可以作为细胞因子对卵泡发育起局部调控作用。高水平的PRL能够抑制促性腺激素释放激素(GnRH)和黄体生成素(LH)等激素分泌... 详细信息

哺乳动物卵泡发育主要受到卵巢轴生殖激素的调控。催乳素(PRL)作为经典的生殖激素可通过内分泌途径调控卵泡发育,也可以作为细胞因子对卵泡发育起局部调控作用。高水平的PRL能够抑制促性腺激素释放激素(GnRH)和黄体生成素(LH)等激素分泌,从而抑制卵泡发育。近期研究表明,PRL具有促进血管发生的功能,对有腔卵泡发育具有促进作用;而PRL经组织蛋白酶(CTSD、BMP-1和MMPs)裂解可产生血管抑制素(Vi),PRL/Vi的相对水平对血管发生起到重要影响。本文主要对PRL及Vi的结构、分泌、作用机制及其在哺乳动物卵泡发育过程中可能的调节作用进行综述,可为探究动物卵泡发育的调控机制提供参考。

关键词：催乳素卵泡发育血管发生血管抑制素

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猪β-防御素129和114的表达及其功能研究进展

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中国畜牧杂志 2024年第3期60卷 73-78页

作者：李菊黄晓刚韩贝贝刘松柏高凤磊李莉赵云翔张守全卫恒习华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广东广州510642 广东农工商职业技术学院热带农林学院广东广州510507 佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528000 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东茂名525000

防御素是广泛分布于脊椎动物体内的高度保守的小型阳离子肽,具有抵抗病原微生物的能力,并在先天性免疫与适应性免疫中发挥重要作用。猪β-防御素129(Porcine β-Defensin 129,pBD129)和猪β-防御素114(Porcine β-Defensin,pBD114)广泛... 详细信息

防御素是广泛分布于脊椎动物体内的高度保守的小型阳离子肽,具有抵抗病原微生物的能力,并在先天性免疫与适应性免疫中发挥重要作用。猪β-防御素129(Porcine β-Defensin 129,pBD129)和猪β-防御素114(Porcine β-Defensin,pBD114)广泛分布于猪的各个器官和组织中,它们除抵抗病原微生物、调节机体免疫功能外,还对猪的繁殖与发育具有重要作用。近年来研究表明,pBD129和pBD114在公猪附睾中有较高的表达量,并参与精子的成熟、运动和受精过程,对雄性动物的精子功能和受精能力具有重要影响。本文对pBD129和pBD114在猪体内的表达分布情况、参与调节的信号通路以及相关生物学功能等进行综述,旨在为pBD129和pBD114的功能研究和应用提供理论和参考依据。

关键词： pBD129 pBD114 免疫繁殖猪

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