检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2016年第9期32卷 83-92页

作者：王大威张健何春百马挺吕鑫李强海洋石油高效开发国家重点实验室中海油研究总院北京100028 南开大学生命科学学院分子微生物学与技术教育部重点实验室天津300071

利用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术分析渤海N油田注水和未注水油藏中细菌和古菌群落结构组成及分布特征,试分析注水过程对油藏微生物群落丰度和种群的影响,为开展目标油田本源微生物采油试验提... 详细信息

利用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术分析渤海N油田注水和未注水油藏中细菌和古菌群落结构组成及分布特征,试分析注水过程对油藏微生物群落丰度和种群的影响,为开展目标油田本源微生物采油试验提供技术支持。结果显示,注水采油井中细菌丰度和种类明显高于未注水采油井,其中注水采油井中的细菌主要为固氮螺菌属(Azospira sp.)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas sp.)、陶厄氏菌属(Thauera sp.);注水井古菌的丰度和种类与未注水井也存在一定差异,主要为热自养甲烷热杆菌(Methanothermobacter thermautotrophicus)、甲烷鬃毛菌属(Methanosaeta)、嗜泉古菌(Crenarchaeote)。注水井和未注水井中的细菌、古菌种类分布有限,但丰度较高,主要为提高原油采收率有益的采油菌种,显示该区块具备开展本源微生物微生物采油技术实施的条件。

关键词：注水油藏变性梯度凝胶电泳细菌古菌

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RNAi介导的HvCDA1基因沉默影响茄二十八星瓢虫存活和发育

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昆虫学报 2023年第1期66卷 27-36页

作者：王亚洁刘卓琦潘广邱宝利潘慧鹏杨春晓华南农业大学植物保护学院广东省生物农药创制与应用重点实验室广州510642 广州国家现代农业产业科技创新中心广州510520 华南农业大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广州510642

【目的】茄二十八星瓢虫Henosepilachna vigintioctopunctata是茄科(Solanaceae)植物上的重要害虫。昆虫体内几丁质脱乙酰酶1(chitin deacetylase 1,CDA1)催化N-乙酰氨基-D-葡萄糖胺脱去乙酰基,促使几丁质转化为壳聚糖,控制昆虫体内几... 详细信息

【目的】茄二十八星瓢虫Henosepilachna vigintioctopunctata是茄科(Solanaceae)植物上的重要害虫。昆虫体内几丁质脱乙酰酶1(chitin deacetylase 1,CDA1)催化N-乙酰氨基-D-葡萄糖胺脱去乙酰基,促使几丁质转化为壳聚糖,控制昆虫体内几丁质纤维有序堆积,并维持角质层结构的完整性。抑制虫体中CDA1基因的表达会抑制壳聚糖的合成,影响昆虫表皮结构的形成,使昆虫不能正常发育而亡。【方法】利用RT-qPCR方法测定HvCDA 1基因在茄二十八星瓢虫不同发育阶段(卵、1-4龄幼虫和预蛹)和4龄幼虫不同组织(表皮、脂肪体、中肠和马氏管)中的表达模式。通过饲喂茄二十八星瓢虫1龄幼虫不同浓度ds HvCDA1溶液浸泡处理1 min的茄子叶片后及直接饲喂4龄幼虫不同浓度ds HvCDA1溶液,探究沉默茄二十八星瓢虫HvCDA1基因对其幼虫存活和发育以及HvCDA1基因表达量的影响。【结果】发育表达谱结果表明,HvCDA1在茄二十八星瓢虫的各发育阶段均有表达,但在1龄末和2龄末幼虫中的表达量最高。组织表达谱结果显示,在茄二十八星瓢虫4龄幼虫的表皮中HvCDA1基因的表达量显著的高于其他组织中的。1龄幼虫取食50 ng/μL ds HvCDA1溶液浸泡处理的茄子叶片后,幼虫蜕皮后其枝刺不能直立,角质层不能正常形成,且出现取食障碍直至死亡;饲喂50,200和400 ng/μL ds HvCDA1溶液浸泡处理的茄子叶片后48 h时,死亡率分别高达84%,94%和100%。与对照组(饲喂ds GFP溶液浸泡处理的茄子叶片)相比,饲喂1龄幼虫50 ng/μL ds HvCDA 1溶液浸泡处理的茄子叶片后48和96 h时,其HvCDA1基因的表达量分别下降了38.63%和79.00%。另外,4龄幼虫单头饲喂50,200和400 ng ds HvCDA1溶液,可分别导致29%,40%和66%的幼虫化蛹后呈畸形且不能正常羽化。与对照组(饲喂200 ng/头ds GFP溶液)相比,饲喂4龄幼虫200 ng/头ds HvCDA1溶液后48和96 h时,其HvCDA1基因的表达量分别下降了52.99%和70.09%。【结论】上述结果表明,HvCDA1基因在茄二十八星瓢虫的存活和发育中起重要作用。当该基因表达受阻,会负面影响茄二十八星瓢虫的蜕皮、化蛹以及羽化,最终死亡。本研究结果表明HvCDA1可作为1个潜在的防治二十八星瓢虫的RNAi靶标基因。

关键词：茄二十八星瓢虫 HvCDA1 RNAi 存活发育

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微生物脱有机硫的催化剂制备和条件

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科学通报 2002年第4期47卷 275-279页

作者：许平马翠卿李福利曾义勇王书宁宋波佟明友 H.D.Blankespoor 山东大学微生物技术国家重点实验室济南250100 中国石油化工股份有限公司抚顺石油化工研究院抚顺113001 Biology

从石油污染土壤中筛选到的一株能专一性降解二苯并噻吩（dibenzothiophene,DBT）生成2-羟基联苯（2-hydfoxybiphenyl,2-HBP）的红球属（Rhodococcus）菌株lawq出发,研究了影响该菌株生长和脱硫的因素.2-HBP对菌体生长、降解DBT酶系的产... 详细信息

从石油污染土壤中筛选到的一株能专一性降解二苯并噻吩（dibenzothiophene,DBT）生成2-羟基联苯（2-hydfoxybiphenyl,2-HBP）的红球属（Rhodococcus）菌株lawq出发,研究了影响该菌株生长和脱硫的因素.2-HBP对菌体生长、降解DBT酶系的产生及脱硫活力都有抑制作用.研究了生长反应系统中硫酸盐和DBT同时存在条件下,硫酸盐的存在对产生降解DBT酶系的影响作用.对休止细胞脱有机硫反应体系进行了研究,并确定了最佳细胞浓度和反应条件.研究结果表明红球菌lawq具有对硫酸盐不敏感的特点,较适合于生物脱有机硫工艺.

关键词：微生物脱有机硫催化剂制备二苯并噻吩石油产品

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CMP羟甲基化酶MilA中与甲基羟化过程相关的关键氨基酸定点突变分析

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微生物学通报 2014年第1期41卷 50-57页

作者：高土玲陈诚赵功邓子新胡申才贺新义武汉工业学院生物与制药工程学院湖北武汉430023 上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室上海200030

【目的】米多霉素生物合成起始反应的MilA蛋白可以使底物胞苷酸单磷酸(CMP)的胞嘧啶碱基C5位上形成羟甲基化,形成羟甲基化胞苷酸(HmCMP),MilA是迄今发现的首个能够高效利用CMP的羟甲基化酶。MilA属于脱氧胸苷酸合成酶(TS)和脱氧胞苷酸... 详细信息

【目的】米多霉素生物合成起始反应的MilA蛋白可以使底物胞苷酸单磷酸(CMP)的胞嘧啶碱基C5位上形成羟甲基化,形成羟甲基化胞苷酸(HmCMP),MilA是迄今发现的首个能够高效利用CMP的羟甲基化酶。MilA属于脱氧胸苷酸合成酶(TS)和脱氧胞苷酸羟甲基化酶(CH)蛋白超家族,通过三维结构预测发现它们的三维结构非常相似,CH94上的丝氨酸曾被证明与胞嘧啶上甲基变成羟甲基过程有关,MilA102上对应的氨基酸为苏氨酸,TS91上对应的氨基酸为脯氨酸。因此,突变MilA上第102位的苏氨酸,考察该氨基酸对CMP和脱氧胞苷酸(dCMP)羟甲基化反应的影响。【方法】通过定点突变技术,将MilA第102位的保守氨基酸苏氨酸(Threonine,T)分别点突变成缬氨酸(Valine,V)和亮氨酸(Leucine,L)。【结果】体外酶活实验结果显示,相对于MilA,MilA T102V对于CMP的催化活性下降87.1%,对于dCMP的催化活性没有影响;而MilA T102L均丧失了对于两种底物的活性。【结论】这表明Thr102对于MilA催化底物CMP形成HmCMP至关重要;同时,失去活性的仅比缬氨酸和野生型苏氨酸的链长多出了一个碳原子,暗示其在与底物结合时形成了一定的空间位阻效应。Thr在102位点的功能经过自然进化的微调有可能已经达到最优化。

关键词：胞苷酸羟甲基化酶MilA 定点突变脱氧胞苷酸羟甲基化酶体外催化反应

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土壤/沉积物吸附有机污染物机理研究的进展

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化学通报 2001年第2期64卷 81-85页

作者：党志于虹黄伟林刘丛强华南理工大学应用化学系贵阳卫生学校微生物教研室 School of Environmental Science Engineering and PolicyDrexel UniversityU.S.A. 中国科学院地球化学研究所环境地球化学国家重点实验室贵阳550002

有机污染物与土壤、沉积物以及地表水中悬浮物 (如腐殖质 )之间的相互作用——吸附与解吸是决定它们环境行为最重要的因素之一。自 60年代末期以来 ,经各国科学家们的共同努力 ,该项工作取得了一些非常重要的研究成果。本文将对该领域... 详细信息

有机污染物与土壤、沉积物以及地表水中悬浮物 (如腐殖质 )之间的相互作用——吸附与解吸是决定它们环境行为最重要的因素之一。自 60年代末期以来 ,经各国科学家们的共同努力 ,该项工作取得了一些非常重要的研究成果。本文将对该领域的研究现状进行评述 ,并对其未来可能的发展方向提出自己的见解。

关键词：有机污染物土壤/沉积物吸附机理

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棉花miRNA表达量检测方法Stem-loop RT-PCR的建立

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核农学报 2017年第11期31卷 2121-2127页

作者：胡广王乐张振楠唐叶周璐璐彭清忠吴家和吉首大学生物资源与环境科学学院湖南吉首416000 中国科学院微生物研究所/植物基因组学国家重点实验室北京100101

为建立一套鉴定棉花miRNA表达丰度的分子技术,优化了Stem-loop RT-PCR方法,并通过分析棉花3个miRNA的表达谱来评价分析该技术体系的特性。首先设计3条引物(茎环特异性反转录引物、正向引物和通用反向引物),通过cDNA和RNA梯度稀释,分析... 详细信息

为建立一套鉴定棉花miRNA表达丰度的分子技术,优化了Stem-loop RT-PCR方法,并通过分析棉花3个miRNA的表达谱来评价分析该技术体系的特性。首先设计3条引物(茎环特异性反转录引物、正向引物和通用反向引物),通过cDNA和RNA梯度稀释,分析引物的扩增效率和检测灵敏度。结果表明,Stem-loop RT-PCR方法中设计的引物具有较高的扩增效率和检测灵敏度,miR156和miR159扩增效率分别为102.0%和103.6%;并对不同miRNA分析其总RNA检测灵敏度,miR156和miR159的总RNA检测灵敏度差异较大,分别为20 ng和2 pg。同时,应用建立的棉花Stem-loop RT-PCR方法,成功地分析了Gh-miR156、Gh-miR159和Gh-miR5658在根茎叶中的表达量。由此可见,棉花Stem-loop RT-PCR方法具有灵敏度高、特异性强、成本较低和适用于一般实验室等优点,为棉花等植物miRNA相关研究提供了技术保证,加快了miRNA及其调控基因功能的研究步伐。

关键词： Stem-loop RT-PCR 棉花 miRNA 茎环引物

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裂谷热病毒Gn1蛋白在杆状病毒系统中的表达与纯化

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中国动物传染病学报 2022年第2期30卷 126-133页

作者：孙潇张艳芳叶静曹胜波陈政华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

采用杆状病毒表达系统表达并纯化裂谷热病毒(RVFV)Gn蛋白,并对其反应原性进行鉴定。根据GenBank公布的Gn蛋白的序列,选取其主要抗原区Gn1设计引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至pFastBac HTB载体,构建重组转移载体,并将其转化DH10Bac感... 详细信息

采用杆状病毒表达系统表达并纯化裂谷热病毒(RVFV)Gn蛋白,并对其反应原性进行鉴定。根据GenBank公布的Gn蛋白的序列,选取其主要抗原区Gn1设计引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至pFastBac HTB载体,构建重组转移载体,并将其转化DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组杆粒转染Sf9细胞获得重组杆状病毒,经SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白正确表达后,将重组杆状病毒感染High5细胞,大量表达重组蛋白,并用镍柱亲和层析法进行纯化,最终获得纯度较高的Gn1重组蛋白。本研究为RVF新型疫苗研发及诊断试剂的研发提供了重要材料。

关键词：裂谷热病毒 Gn1蛋白重组杆状病毒蛋白纯化

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来自于台湾地区葡萄苦腐病菌的检疫鉴定

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植物检疫 2018年第6期32卷 38-45页

作者：张慧丽段丽君李雪莲陈先锋蔡磊段维军宁波检验检疫科学技术研究院浙江宁波315012 中国科学院微生物研究所真菌学国家重点实验室

自来源于台湾的船检葡萄样品上,采用常规平板分离法获得1株疑似葡萄苦腐病菌(Greeneria uvicola)的菌株,编号7407。该菌株在PDA上产生分生孢子盘和大量分生孢子,未见有性阶段。经rDNA ITS基因序列比对分析,发现该菌株与GenBank中多个葡... 详细信息

自来源于台湾的船检葡萄样品上,采用常规平板分离法获得1株疑似葡萄苦腐病菌(Greeneria uvicola)的菌株,编号7407。该菌株在PDA上产生分生孢子盘和大量分生孢子,未见有性阶段。经rDNA ITS基因序列比对分析,发现该菌株与GenBank中多个葡萄苦腐病菌菌株的ITS基因序列一致性达99%以上,位于同一个发育分支。经特异性引物GUA-1/GUA-2扩增,可产生354 bp的DNA条带。致病性测定结果表明,该菌株可侵染葡萄果实,引起典型的葡萄苦腐病菌为害症状。以上结果表明,来自于台湾的葡萄携带葡萄苦腐病菌(Greeneria uvicola),这是我国口岸首次截获该种检疫性真菌。

关键词：葡萄苦腐病菌形态特征 ITS 序列分析致病性测定检测鉴定

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细菌DNA损伤诱导反应(SOS 反应)在控制细菌耐药性中的作用

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微生物前沿 2013年第3期2卷 83-89页

作者：张岩盛多红山东大学微生物技术国家重点实验室济南山东水利医院济南

细菌耐药性是当前最紧迫的公众健康问题之一,尤其在目前新型抗菌药物研发落后于耐药菌进化速度的情况下,细菌耐药性的发生、传播以及消除的机制,已经成为人们关注的热点。近来研究发现,细菌DNA损伤诱导反应(SOS反应)在细菌进化耐药性的... 详细信息

细菌耐药性是当前最紧迫的公众健康问题之一,尤其在目前新型抗菌药物研发落后于耐药菌进化速度的情况下,细菌耐药性的发生、传播以及消除的机制,已经成为人们关注的热点。近来研究发现,细菌DNA损伤诱导反应(SOS反应)在细菌进化耐药性的过程中扮演着重要角色。在这里,本文对SOS反应与细菌耐药性的关系、研究进展以及当前存在问题作一阐述。

关键词：细菌 SOS反应耐药性 RecA

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狂犬病新型基因工程疫苗研究进展

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华中农业大学学报 2021年第3期40卷 75-84页

作者：柴本杰黄菲裴捷周明田大勇傅振芳赵凌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院武汉430070 上海青赛生物科技有限公司上海201506

狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领... 详细信息

狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领域的热点之一,进而不断涌现出新型疫苗。本文对近期狂犬病新型灭活疫苗、弱毒疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、口服疫苗等基因工程疫苗研究进展进行系统梳理,以期把握狂犬病疫苗研究现状,为研发更为有效的狂犬病新型疫苗提供新思路。

关键词：狂犬病狂犬病病毒灭活疫苗弱毒疫苗核酸疫苗亚单位疫苗病毒样颗粒疫苗口服疫苗基因工程

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