检索结果-内蒙古大学图书馆

遗传 2024年第5期46卷 408-420页

作者：资崯郑淑文宁丽蔺紫怡鹿璇席嘉慧高月周小青唐成程五邑大学药学与食品工程学院江门529000 广东省医学大动物模型重点实验室江门529000 五邑大学华南生物医药大动物模型研究院江门529000

Lesch-Nyhan综合征(Lesch-Nyhan syndrome,LNS)是一种先天性的嘌呤代谢缺陷病,次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine phosphoribosyltransferase,HPRT)是其主要致病基因,临床特征表现为尿酸分泌过多、痛风、肾结石及肾脏损伤等,... 详细信息

Lesch-Nyhan综合征(Lesch-Nyhan syndrome,LNS)是一种先天性的嘌呤代谢缺陷病,次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine phosphoribosyltransferase,HPRT)是其主要致病基因,临床特征表现为尿酸分泌过多、痛风、肾结石及肾脏损伤等,目前致病机制尚未被完全阐明且无有效治愈手段。动物模型在疾病致病机理研究和治疗方式探索中发挥着重要功能。本研究采用高效的CRISPR/Cas9基因编辑技术和显微注射的方式敲除家兔(Oryctolagus cuniculus)HPRT基因建立了LNS家兔模型,以期能更好的模拟该疾病的表型。首先针对兔HPRT基因第3外显子设计一条sgRNA,将体外转录的sgRNA和Cas9 mRNA共注射到兔受精卵中,注射后的胚胎移植到代孕母兔子宫中,待仔兔出生后对其基因型及表型进行鉴定与分析。共出生4只仔兔(分别编号为R1、R2、R3和R4),测序结果显示4只仔兔都产生了不同程度的基因修饰,基因编辑效率达100%,其中R4仔兔T载体测序结果在基因编辑靶点未检测到野生型序列。通过6-硫代鸟嘌呤(6-Thioguanine,6-TG)药物测试,证明R4仔兔HPRT酶活性缺失;肾组织HE染色发现4只仔兔表现出肾小球炎细胞浸润、集合管脱落等肾脏损失。本研究成功设计了1条能够敲除家兔HPRT基因的sgRNA,并采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和显微注射方式成功构建了HPRT基因修饰家兔,为研究LNS综合征致病机制和治疗方式提供了新的非啮齿类动物模型。

关键词： Lesch-Nyhan综合征 HPRT 家兔

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评价白蛋白相关药物动物模型的研究进展

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中国实验动物学报 2023年第10期31卷 1374-1380页

作者：资崯宁丽周小青唐成程广东省医学大动物模型重点实验室华南生物医药大动物模型研究院生物科技与大健康学院五邑大学广东江门529000

许多肽或蛋白质药物治疗的一个主要挑战是血浆半衰期短。通过将该类药物与白蛋白结合获得的药物称为白蛋白相关药物,有效延长血浆半衰期。动物模型作为研究药物药代动力学的重要工具是药物研究中不可或缺的一部分。本综述概括了两大类... 详细信息

许多肽或蛋白质药物治疗的一个主要挑战是血浆半衰期短。通过将该类药物与白蛋白结合获得的药物称为白蛋白相关药物,有效延长血浆半衰期。动物模型作为研究药物药代动力学的重要工具是药物研究中不可或缺的一部分。本综述概括了两大类动物模型:啮齿类(野生型小鼠、大鼠模型,基因修饰小鼠模型)与非啮齿(猴)在白蛋白相关药物药代动力学研究中的应用与发展,为其进一步研究发展提供参考。

关键词：白蛋白相关药物血浆半衰期动物模型

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FAH/GSTZ1双基因突变肝细胞模型的建立

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中国比较医学杂志 2022年第8期32卷 71-78页

作者：刘艳顾鹏叶行梁春锦关雅今张映辉邹庆剑顾为望五邑大学生物科技与大健康学院广东江门529020 江门市大健康国际创新研究院广东江门592040 华南生物医药大动物模型研究院广东省医学大动物模型重点实验室广东江门529728 南方医科大学实验动物管理中心暨比较医学研究所广州510515

目的采用CRISPR/Cas9技术敲除人LO2肝细胞系的谷胱甘肽S-转移酶Z1(GSTZ1)和延胡索酰乙酰乙酸水解酶(FAH),探讨GSTZ1和FAH基因敲除对于肝细胞生长、增殖、迁移的影响。方法分别构建靶向GSTZ1和FAH基因的向导RNA(sgRNA)载体,与CRISPR/Cas... 详细信息

目的采用CRISPR/Cas9技术敲除人LO2肝细胞系的谷胱甘肽S-转移酶Z1(GSTZ1)和延胡索酰乙酰乙酸水解酶(FAH),探讨GSTZ1和FAH基因敲除对于肝细胞生长、增殖、迁移的影响。方法分别构建靶向GSTZ1和FAH基因的向导RNA(sgRNA)载体,与CRISPR/Cas9载体共转染LO2细胞,通过有限稀释法筛选,基因型鉴定和Western blot实验证实获得的FAH和GSTZ1基因的单基因敲除和双基因敲除三种细胞株。进一步对敲除细胞株表型进行鉴定,通过平板克隆形成实验检测基因敲除肝细胞克隆形成能力;CCK8实验和EdU分析实验测试细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力。结果成功获得GSTZ1、FAH和FAH/GSTZ1三种基因敲除细胞株。相比于野生型细胞,三种细胞株在增殖能力,克隆形成能力、迁移能力均有显著增加,其中FAH敲除对细胞表型的影响相对较小,GSTZ1敲除对肝细胞活性提高最强,双基因敲除细胞活性处于两个单基因敲除之间。结论我们首次成功建立了FAH/GSTZ1双基因突变肝细胞株,为酪氨酸代谢通路研究和Ⅰ型遗传性酪氨酸血症治疗研究提供了一个新型的细胞模型。

关键词： CRISPR/Cas9技术双基因敲除 GSTZ1 FAH LO2细胞系

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碱基编辑器在基因治疗中的潜在安全性风险及解决方案研究进展

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生命科学 2022年第10期34卷 1289-1304页

作者：刘洋吴运琴彭晓华邹庆剑赖良学中国科学院广州生物医药与健康研究院五邑大学生物科技与大健康学院广东省医学大动物模型重点实验室

碱基编辑器(base editor, BE)是一种由脱氨酶与人工核酸结合蛋白结合形成的基因编辑工具，可以对单个碱基进行定点替换，以达到改变核酸序列的目的。其主要特点是能够在不产生核酸完全断裂的条件下，进行高效的碱基编辑，BE在动植物育... 详细信息

碱基编辑器(base editor, BE)是一种由脱氨酶与人工核酸结合蛋白结合形成的基因编辑工具，可以对单个碱基进行定点替换，以达到改变核酸序列的目的。其主要特点是能够在不产生核酸完全断裂的条件下，进行高效的碱基编辑，BE在动植物育种以及遗传性疾病的基因治疗领域已经显示出巨大的应用价值。目前已报道的碱基编辑器包括胞嘧啶碱基编辑器、腺嘌呤碱基编辑器、糖苷酶碱基编辑器、双碱基编辑器、线粒体碱基编辑器以及RNA编辑器等。然而，各种碱基编辑器中含有的两个主要功能元件，即脱氨酶和人工核酸结合蛋白，均有脱靶效应，为本技术的广泛应用带来严重的安全隐患。本文通过对不同碱基编辑工具的种类特点、疾病模型治疗现状以及安全性问题和解决方案进行综述，希望对后续的碱基编辑技术的优化研究提供参考。

关键词：碱基编辑技术基因治疗脱靶编辑安全性

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敲除GGTA1同时表达人白细胞抗原G5的基因修饰猪的构建

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生物工程学报 2022年第3期38卷 1096-1111页

作者：周小青刘玉唐成程程令印郑淑文郑雨龄陈敏杨化强邹庆剑赖良学五邑大学生物科技与大健康学院广东江门529020 广东省医学大动物模型重点实验室广东江门529020 华南农业大学动物科学学院广东广州510642 中国科学院广州生物医药与健康研究院广东广州510530

由于猪的诸多生理和遗传特征与人类近似,猪一直被认为是理想的异种器官移植候选供体动物。但是物种之间严重的免疫不相容是影响猪到灵长类异种器官移植的最关键因素。为了克服物种之间的免疫排斥反应,诸多研究对猪进行了各种各样的基因... 详细信息

由于猪的诸多生理和遗传特征与人类近似,猪一直被认为是理想的异种器官移植候选供体动物。但是物种之间严重的免疫不相容是影响猪到灵长类异种器官移植的最关键因素。为了克服物种之间的免疫排斥反应,诸多研究对猪进行了各种各样的基因修饰,消除或抑制造成异种器官移植的免疫原,以获得可应用于灵长类移植的供体器官。本研究利用转录激活因子样效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)对猪的α-1,3-半乳糖苷转移酶(α-1,3-galactosyltransferase,GGTA1)基因进行敲除,该基因编码的酶催化合成α-1,3-半乳糖,这是导致猪到灵长类异种器官移植中产生超急性免疫排斥的关键因子。同时本研究也通过转基因方法导入一种重要的免疫抑制因子,人类白细胞抗原G5(human leukocyte antigen-G5,HLA-G5),来进一步增加猪器官在异种器官移植中的免疫耐受。本研究筛选了GGTA1双等位基因敲除(GGTA1 knockout,GTKO)且HLA-G5转基因导入的猪成纤维细胞,并通过体细胞核移植(somaticcell nuclear transfer,SCNT)构建相应的基因修饰猪模型。本研究获得了20头GGTA1双等位基因敲除的克隆猪,其中10头同时表达HLA-G5蛋白。经检测,α-1,3-半乳糖在GTKO/HLA-G5克隆猪的组织和细胞上完全缺失,Western blotting和免疫荧光染色显示,HLA-G5在克隆猪的组织和细胞上成功表达。功能学分析显示,从GTKO/HLA-G5克隆猪分离的成纤维细胞具有更好的免疫耐受,相比于单一的GTKO猪和未经基因修饰的野生型猪,GTKO/HLA-G5克隆猪的细胞对补体介导的细胞裂解反应具有更强的耐受。GTKO/HLA-G5克隆猪可以为异种器官移植提供一种有用的动物模型。

关键词：基因修饰猪 GGTA1 基因敲除 HLA-G5 异种器官移植 TALEN

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载脂蛋白C3在动脉粥样硬化发生中的研究进展

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中国卫生检验杂志 2023年第1期33卷 125-128页

作者：杨夏雯李文慧范江霖王宇辉吴涵闫海钊广东省医学大动物模型重点实验室广东江门529000 五邑大学生物科技与大健康学院北京大学心血管研究所中国科学院广州生物医药与健康研究院

1血脂异常是动脉粥样硬化的独立危险因子以动脉粥样硬化为主要病理基础的心血管疾病是危害人类健康的头号杀手,目前中国心血管病患者人数高达3.3亿,其死亡率居首位[1]。血脂异常是动脉粥样硬化最重要的独立危险因子之一,目前中国成人血... 详细信息

1血脂异常是动脉粥样硬化的独立危险因子以动脉粥样硬化为主要病理基础的心血管疾病是危害人类健康的头号杀手,目前中国心血管病患者人数高达3.3亿,其死亡率居首位[1]。血脂异常是动脉粥样硬化最重要的独立危险因子之一,目前中国成人血脂异常总体患病率高达40.4%。因此研究高脂血症,包括高甘油三脂血症和高胆固醇血症等的发病机制,对于血脂异常和动脉粥样硬化的防治以及降低死亡率具有重大意义[2]。

关键词：载脂蛋白C3 脂质代谢高脂血症动脉粥样硬化

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