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食品科学 2023年第7期44卷 313-323页

作者：寇秀颖周宝青陈玲代京莎张菊梅吴清平无限极(中国)有限公司广东广州510405 广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州510070

食源性致病菌的早期筛查与快速检测对食品安全和临床诊断至关重要。然而,传统检测方法操作繁琐、费时费力,难以满足快速检测需求。成簇、规则间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)... 详细信息

食源性致病菌的早期筛查与快速检测对食品安全和临床诊断至关重要。然而,传统检测方法操作繁琐、费时费力,难以满足快速检测需求。成簇、规则间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和关联蛋白(CRISPR-associated protein,Cas)组成的CRISPR/Cas是广泛存在于细菌和古细菌中的一种免疫系统,其高效特异序列识别及切割活性的特性,为食源性致病菌高灵敏、快速检测提供了一种新的途径。本文介绍了CRISPR/Cas系统的原理、机制及发展,总结了近年来基于CRISPR/Cas系统结合不同结果报告方式用于食源性致病菌快速检测的最新进展,并对其优势、局限性和未来发展方向进行了讨论。

关键词： CRISPR/Cas 食源性致病菌反式切割快速检测技术

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一株新现食源性多重耐药非典型肠致病大肠杆菌特征分析

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现代食品科技 2024年第6期40卷 268-278页

作者：黄远斌张淑红杨广珠吴清平张菊梅吴诗古其会叶青华张友雄韦献虎广东省科学院微生物研究所广东省微生物安全与健康重点实验室华南应用微生物国家重点实验室农业农村部广东广州510070

探究一株新现食源性多重耐药非典型肠致病大肠杆菌(aEPEC)表型、生化及遗传特征。从市售食品中分离到一株产ESBL且携带质粒介导多粘菌耐药基因mcr-1的aEPEC菌株E2892A1,利用API 20E对其生化特征进行了分析,采用微量肉汤稀释法测定了常... 详细信息

探究一株新现食源性多重耐药非典型肠致病大肠杆菌(aEPEC)表型、生化及遗传特征。从市售食品中分离到一株产ESBL且携带质粒介导多粘菌耐药基因mcr-1的aEPEC菌株E2892A1,利用API 20E对其生化特征进行了分析,采用微量肉汤稀释法测定了常见抗生素MICs,通过基因组测序分析了遗传特征(耐药基因、质粒类型、毒力基因),并基于cgSNP对其遗传进化关系进行了探究。结果表明,该菌株对多种常用抗生素如头孢他定,头孢曲松,四环素、氨苄西林等耐药,且属于ESBL菌株。测序结果显示,该菌株为aEPEC,其携带17种耐药基因和EPEC特征毒力基因eae,具有4种复制子类型。这是国内外首次发现多种耐药基因(特别是CTX-123和mcr-1)共存于同一株多重耐药aEPEC ST752菌株中。接合实验证实mcr-1基因可水平传播至大肠杆菌C600。这类菌株存在于食品中对人体健康构成了重要威胁,需特别关注其扩散情况。该研究为食品中高毒力多重耐药菌风险监测提供了重要基础数据,可为畜牧养殖中抗生素合理使用和食源性疾病用药方案制定提供数据参考。

关键词：非典型肠致病大肠杆菌 mcr-1基因 ESBL 生化特征遗传特征

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碱熔-电感耦合等离子体质谱法测定土壤中全硼

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质谱学报 2025年第3期46卷 361-369页

作者：陈家舒熊雄段锦梅陈颖麟江家俊朱红惠广东省科学院微生物研究所广东省微生物分析检测中心华南应用微生物国家重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室农业农村部农业微生物组学重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东广州510070

本研究使用碳酸钠高温碱熔消解试样,通过优化熔融温度、熔融时间、酸溶解条件等实验条件,建立了碱熔-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定土壤中全硼。实验表明,向样品中加入2.0 g Na_2CO_3于950℃碱熔20 min后,使用HCl水溶液(1:1,V/V)... 详细信息

本研究使用碳酸钠高温碱熔消解试样,通过优化熔融温度、熔融时间、酸溶解条件等实验条件,建立了碱熔-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定土壤中全硼。实验表明,向样品中加入2.0 g Na_2CO_3于950℃碱熔20 min后,使用HCl水溶液(1:1,V/V)溶解熔块的效果最好。碱熔法可以有效避免硼在HF中易挥发损失的问题。使用有证标准物质和实际样品对方法进行验证,结果表明,该方法测定全硼含量在0~100μg/L浓度范围内的线性关系良好,线性相关系数为0.999 5,方法检出限为0.20 mg/kg,定量限为0.65 mg/kg,方法精密度(RSD,n=6)为1.92%~3.79%,相对误差(RE)为-0.32%~3.69%。实际样品测定的相对标准偏差(RSD,n=6)为0.99%~1.82%。相比于电感耦合等离子体发射光谱(ICP-OES)法,本方法的数据稳定性更好、工作效率更高,适用于土壤中全硼的测定。

关键词：碱熔电感耦合等离子体质谱(ICP-MS) 土壤全硼

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代谢工程改造大肠杆菌合成L-苏氨酸研究进展

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微生物学报 2024年第8期64卷 2648-2660页

作者：罗筱萍苏卜利邓名荣徐晓龙朱红惠五邑大学环境与化学工程学院广东江门529020 广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室农业农村部农业微生物组学重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东广州510070

L-苏氨酸是一种人体自身无法合成,必须从食物中摄取的8种必需氨基酸之一,是蛋白质合成的重要组成成分,广泛应用于食品、饲料、医药等多个领域。目前,利用大肠杆菌发酵可获得更理想的苏氨酸产量,是工业上用于苏氨酸生产的主要菌株。随着... 详细信息

L-苏氨酸是一种人体自身无法合成,必须从食物中摄取的8种必需氨基酸之一,是蛋白质合成的重要组成成分,广泛应用于食品、饲料、医药等多个领域。目前,利用大肠杆菌发酵可获得更理想的苏氨酸产量,是工业上用于苏氨酸生产的主要菌株。随着代谢工程技术的发展,对菌株的改造不再局限于传统诱变育种,菌株的定向改造极大地提高了菌株L-苏氨酸的合成能力,促进了L-苏氨酸工业的发展。本文主要从L-苏氨酸的理化性质、合成途径以及利用代谢工程技术在提高L-苏氨酸产量研究中取得的一系列成果进行综述,旨在为改造大肠杆菌高效合成苏氨酸的研究提供更全面的认识。

关键词： L-苏氨酸大肠杆菌代谢调控前体辅因子

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扩增型和非扩增型CRISPR/Cas系统在食源性致病菌快速检测领域应用的研究进展

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食品科学 2023年第5期44卷 257-265页

作者：徐文星邵艳娜吴清平王涓张菊梅丁郁广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州510070 暨南大学理工学院广东广州510632 华南农业大学食品学院广东广州510642

食源性致病菌引起的食品安全事件频发已对公众健康和社会经济造成巨大的影响,构建针对其快速、高效的检测方法是保障食品安全的重要手段。成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR... 详细信息

食源性致病菌引起的食品安全事件频发已对公众健康和社会经济造成巨大的影响,构建针对其快速、高效的检测方法是保障食品安全的重要手段。成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)及其相关蛋白(CRISPR-associated protein,Cas)组成的CRISPR/Cas是广泛存在于细菌和古细菌中的一种免疫系统,可以有效地识别并切割外源核酸。因此,可以利用CRISPR/Cas系统这一对外源核酸的识别及切割活性实现对食源性致病菌的快速高效检测。本文详细介绍基于核酸扩增和免核酸扩增的两种CRISPR/Cas系统,综述其在对各种食源性致病菌检测中的应用,讨论它们的优势、局限性以及未来的发展趋势,旨在为建立更高效的食源性致病菌检测方法提供技术参考,以期更有效地减少食源性致病菌造成的食品安全问题。

关键词： CRISPR/Cas 食源性致病菌等温扩增非扩增核酸检测

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高效噬菌体防控食品源单增李斯特菌的研究进展

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现代食品科技 2024年第1期40卷 304-311页

作者：梁馨文刘振杰张菊梅陈谋通吴清平华南农业大学食品学院广东广州510642 广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州510070

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是一种重要的食源性致病菌,因其具有耐高盐度、宽pH值和宽温度等特点,对食品安全构成了重大威胁。近年来,由于细菌的耐药进化速度惊人,检测与控制食品中的单增李斯特菌... 详细信息

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是一种重要的食源性致病菌,因其具有耐高盐度、宽pH值和宽温度等特点,对食品安全构成了重大威胁。近年来,由于细菌的耐药进化速度惊人,检测与控制食品中的单增李斯特菌是食品行业和公共卫生部门面临的一项重要挑战。而噬菌体(Bacteriophage,Phage)因其特异性强、安全性好、繁殖速度快等特点,在食品有害微生物防控应用中显示出巨大的潜力。大量的研究报道表明噬菌体作为一种天然、绿色的杀菌剂,在不同种类食品致病微生物防控中具有很好的前景。尽管噬菌体生物防治仍存在宿主谱窄及宿主易产生抗性菌等挑战,但其作为一种安全有效的方法,将在防控食品中的单增李斯特菌发挥重要作用。本文综述了食品中单增李斯特菌噬菌体分离、快速检测与高效防控方面的研究现状,为开发基于噬菌体的高效防控新技术提供参考。

关键词：单增李斯特菌噬菌体食品安全防控检测

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基于免疫蛋白质组学的单增李斯特菌强免疫原性蛋白挖掘

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现代食品科技 2024年第3期40卷 301-308页

作者：张颖吴诗古其会叶青华张菊梅陈谋通吴清平华南农业大学食品学院广东广州510642 广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州510070

该研究采用高毒力持留基因型单增李斯特菌819-2菌株全菌蛋白免疫SPF级Balb/C小鼠制备抗血清,利用免疫蛋白质组学对菌株胞外蛋白质组进行分析,旨在挖掘筛选单增李斯特菌强免疫原性蛋白作为特异性抗体制备的候选抗原。超声法提取819-2菌... 详细信息

该研究采用高毒力持留基因型单增李斯特菌819-2菌株全菌蛋白免疫SPF级Balb/C小鼠制备抗血清,利用免疫蛋白质组学对菌株胞外蛋白质组进行分析,旨在挖掘筛选单增李斯特菌强免疫原性蛋白作为特异性抗体制备的候选抗原。超声法提取819-2菌株全菌蛋白免疫SPF级Balb/C小鼠制备抗血清,四次免疫后经间接ELISA测定效价达1:512000。脱氧胆酸钠(DOC)-10%(m/V)TCA沉淀法提取单增李斯特菌819-2菌株胞外蛋白,利用免疫蛋白质组学和LC-MS/MS技术挖掘并鉴定具有强免疫反应的蛋白点,结果表明双向电泳图谱成功获得85个蛋白点,并成功鉴定了P60、InlC、MltG、Enolase和假定蛋白YxeA family protein等5个强免疫原性蛋白,研究结果为基于强免疫原性蛋白制备特异性抗体用于食品及其加工环境中单增李斯特菌富集及快速检测技术研制提供了数据基础。

关键词：单增李斯特菌免疫蛋白质组学抗血清免疫印迹

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人肠道细菌CAZymes对中药多糖利用位点的研究进展

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中国中药杂志 2025年

作者：郭龙明白光剑田馨胡惠萍王雅琪陈少丹江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室广东省科学院微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室国家卫健委微生物食品营养与安全科技创新平台华南农业大学食品学院

多糖作为中药的重要活性成分，其生物利用度与健康效应高度依赖于人肠道菌群中碳水化合物活性酶（carbohydrate-active enzymes， CAZymes）的代谢调控。该文系统总结了CAZymes的分类和在肠道菌群中的功能分布，以及其编码的多糖利用位... 详细信息

多糖作为中药的重要活性成分，其生物利用度与健康效应高度依赖于人肠道菌群中碳水化合物活性酶（carbohydrate-active enzymes， CAZymes）的代谢调控。该文系统总结了CAZymes的分类和在肠道菌群中的功能分布，以及其编码的多糖利用位点（polysaccharide utilization loci， PULs）通过动态调控机制识别并降解中药多糖的过程。肠道细菌CAZymes通过底物结合模块（CBMs）和催化域的协同作用，精准识别多糖的糖苷键类型及空间构象，将复杂多糖转化为寡糖和短链脂肪酸（SCFAs）等代谢产物，进而通过免疫调节、代谢稳态和肠道屏障修复等途径影响宿主健康。在此基础上进一步提出，解析CAZymes-多糖复合物的三维结构、探索跨菌门协同代谢机制及开发菌群导向型中药多糖递送系统，是未来研究的重点方向。该文系统揭示了肠道CAZymes介导中药多糖代谢的核心机制，为阐明中药药效物质基础及中药多糖创新药物开发提供理论依据。

关键词：肠道细菌中药多糖碳水化合物活性酶多糖利用位点拟杆菌

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发酵乳杆菌CSC-19胞外粗多糖提取物抑制单核细胞增生李斯特菌生物被膜形成能力的研究

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微生物学报 2023年第1期63卷 376-386页

作者：林若钦张颖李婧怡梁馨文程健恒胡文艳吴清平陈谋通张菊梅华南农业大学食品学院广东广州510642 广东省科学院微生物研究所、华南应用微生物国家重点实验室、广东省微生物安全与健康重点实验室、农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州510070

【目的】筛选能有效抑制单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)形成生物被膜的乳酸菌,分析其活性成分并进行功能表征。【方法】采用结晶紫染色法筛选抑制LM形成生物被膜的不同乳酸菌提取物;通过酸中和、蛋白酶处理及热处理,... 详细信息

【目的】筛选能有效抑制单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)形成生物被膜的乳酸菌,分析其活性成分并进行功能表征。【方法】采用结晶紫染色法筛选抑制LM形成生物被膜的不同乳酸菌提取物;通过酸中和、蛋白酶处理及热处理,推测抑制生物被膜活性物质以胞外多糖(extracellular crude polysaccharide,ECP)为主;乙醇沉淀法提取目标乳酸菌分离株胞外粗多糖,分析其抑制生物被膜形成活性和对LM生长的影响;运用激光共聚焦扫描显微镜(laser confocal scanning microscopy,LCSM)和扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)观察胞外粗多糖对生物被膜细胞形态和结构的影响。【结果】发酵乳杆菌CSC-19发酵上清液对1516-2LM生物被膜的抑制率为81.7%;经热和蛋白酶处理后,发酵上清抑制生物被膜形成的活性未发生显著变化(P>0.05),表明发酵上清液中抑制生物被膜形成的物质可能为胞外多糖;在不抑制LM生长的条件下所提取的胞外粗多糖抑制生物被膜形成能力具有浓度依赖性。激光共聚焦扫描显微镜和扫描电子显微镜结果显示,胞外粗多糖显著抑制了生物被膜的形成能力,生物被膜三维、有组织的蜂窝状结构被破坏,仅有少量的粘附细胞分散于细胞爬片表面。【结论】发酵乳杆菌CSC-19胞外粗多糖能有效抑制LM生物被膜的形成,有望应用于高效防控该菌污染食品。

关键词：发酵乳杆菌胞外粗多糖单核细胞增生李斯特菌生物被膜抑制

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动态浊度法测定饲料中细菌内毒素含量的研究

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中国饲料 2025年第5期 112-117页

作者：陈家舒熊雄段锦梅韩和悦熊诗阳朱红惠广东省科学院微生物研究所广东省微生物分析检测中心华南应用微生物国家重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室农业农村部农业微生物组学重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东广州510070

本实验基于动态浊度法的基础,旨在利用动态试管仪建立饲料中细菌内毒素的测定方法。将供试品配成10%溶液,涡旋混合后,采用10000 r/min离心10 min后取上清液,应用动态浊度法进行细菌内毒素测定。结果显示:该方法的相关系数(r)为0.9977,... 详细信息

本实验基于动态浊度法的基础,旨在利用动态试管仪建立饲料中细菌内毒素的测定方法。将供试品配成10%溶液,涡旋混合后,采用10000 r/min离心10 min后取上清液,应用动态浊度法进行细菌内毒素测定。结果显示:该方法的相关系数(r)为0.9977,加标回收率为97.1%~156.4%,相对标准偏差(RSD)(n=6)为2.0%~7.9%,28种不同类型的饲料样品中细菌内毒素含量在0~349.220 EU/mg。研究表明,实验所用方法操作简便、准确度高、重复性好、应用范围广,适用于饲料中细菌内毒素含量的测定。

关键词：饲料细菌内毒素动态浊度法动态试管仪

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