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微生物学通报 2023年第9期50卷 4141-4153页

作者：张阳阳万强牛得权苗森蒋富凤刘翔曲晓莹张菊梅蔡芷荷陈博吴清平陕西科技大学食品与生物工程学院陕西西安 710021 广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州 510070 广东环凯生物科技有限公司广东肇庆 526238 广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州 510070

[背景]猪水肿病大肠杆菌引发的疾病造成了很大的危害,但现有培养基存在培养密度低的问题.[目的]研制出高抗原活性猪水肿病大肠杆菌疫苗培养基.[方法]以常用的市售猪水肿培养基为对照,通过单因素试验、爬坡试验(Plackett-Burman,PB)、响... 详细信息

[背景]猪水肿病大肠杆菌引发的疾病造成了很大的危害,但现有培养基存在培养密度低的问题.[目的]研制出高抗原活性猪水肿病大肠杆菌疫苗培养基.[方法]以常用的市售猪水肿培养基为对照,通过单因素试验、爬坡试验(Plackett-Burman,PB)、响应面(Box-Behnken,BB)试验对猪水肿培养基进行响应面优化,得到猪水肿培养基最优配方.以响应面试验得到的培养基培养猪水肿病大肠杆菌,评价不同培养时间点菌株的抗原活性,制作灭活疫苗,进行动物免疫保护试验.[结果]对研制的培养基进行扩大培养验证,发现扩大培养得到的菌株活菌数可达 5×109 CFU/mL以上,约为对照组的 2 倍.制备的灭活疫苗效价可达 1:140 000,并在 9 h时抗原蛋白效价达到最高.[结论]本研究研制出的疫苗培养基显著提高了猪大肠杆菌菌体密度,并可提高菌体抗原活性,为猪水肿病灭活疫苗的制备提供了技术指引.

关键词：猪水肿病响应面法疫苗培养基高抗原活性

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灵芝孢子粉脂质成分HPLC-ELSD指纹图谱构建及含量测定

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食用菌学报 2023年第6期30卷 52-59页

作者：夏凤娜关小莺陈少丹陈秋颜张一帆杨小兵广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州510070

以16批(S1~S16)不同来源的灵芝(Ganoderma lucidum)孢子粉为材料,构建灵芝孢子粉脂质成分高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)指纹图谱,将S1~S16的HPLC-ELSD指纹图谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版),指认共有峰和... 详细信息

以16批(S1~S16)不同来源的灵芝(Ganoderma lucidum)孢子粉为材料,构建灵芝孢子粉脂质成分高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)指纹图谱,将S1~S16的HPLC-ELSD指纹图谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版),指认共有峰和评价相似度,采用HPLC-ELSD测定S1~S16中亚油酸、棕榈酸、油酸和麦角甾醇含量。结果表明:共指认4个共有峰,分别为亚油酸、棕榈酸、油酸和麦角甾醇;除S14外,其他15批灵芝孢子粉中脂质成分HPLC-ELSD指纹图谱相似度高,较为稳定;不同来源的灵芝孢子粉中亚油酸、棕榈酸和油酸的含量差异较大,麦角甾醇含量较为稳定。

关键词：灵芝孢子粉高效液相色谱-蒸发光散射检测脂质成分指纹图谱

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基于响应面法的高抗原活性禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基的研制与效果评价

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微生物学通报 2023年第8期50卷 3515-3525页

作者：刘翔万强苗森牛得权张阳阳蒋富凤曲晓莹张菊梅蔡芷荷陈博吴清平合肥工业大学食品与生物工程学院安徽合肥 230601 广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州 510070 广东环凯生物科技有限公司广东肇庆 526238 广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州 510070

[背景]禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)引发的禽霍乱疫情造成了巨大的危害,而现有培养基存在培养菌密度较低的问题.[目的]研制高抗原活性的禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基.[方法]通过单因素试验、Plackett-Burman试验和响应面分... 详细信息

[背景]禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)引发的禽霍乱疫情造成了巨大的危害,而现有培养基存在培养菌密度较低的问题.[目的]研制高抗原活性的禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基.[方法]通过单因素试验、Plackett-Burman试验和响应面分析方法对禽多杀性巴氏杆菌培养基的成分进行调整,并对不同发酵阶段的菌体进行免疫原性测定.最后使用该培养基培养细菌后制备疫苗并通过动物攻毒试验评价其保护效果.[结果]使用研制的培养基培养禽多杀性巴氏杆菌,活菌密度能够在 6 h达到约 1.84×1010 CFU/mL,增菌效果是对照培养基的 2.6 倍;免疫原性测定结果显示在生长平台期菌体的抗原活性最高;攻毒试验表明制备的疫苗能够很好地抵抗禽多杀性巴氏杆菌的侵袭.[结论]研制出了高抗原活性的禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基,为疫苗的生产奠定了基础.

关键词：禽多杀性巴氏杆菌高抗原活性疫苗培养基响应面法

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基于响应面分析的高抗原活性鸭疫里默氏杆菌疫苗培养基的研制及其效果评价

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微生物学通报 2023年第8期50卷 3526-3537页

作者：牛得权万强苗森刘翔张阳阳蒋富凤曲晓莹张菊梅蔡芷荷陈博吴清平合肥工业大学食品与生物工程学院安徽合肥 230601 广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州 510070 广东环凯生物科技有限公司广东肇庆 526238 广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州 510070

[背景]鸭疫里默氏杆菌广泛存在于养殖场,引起雏鸭发生传染性浆膜炎,严重危害养鸭业的发展.[目的]提高鸭疫里默氏杆菌发酵培养水平和抗原活性,为鸭疫里默氏杆菌灭活疫苗的研制提供技术指引.[方法]利用单因素及响应面的试验设计方法,针对... 详细信息

[背景]鸭疫里默氏杆菌广泛存在于养殖场,引起雏鸭发生传染性浆膜炎,严重危害养鸭业的发展.[目的]提高鸭疫里默氏杆菌发酵培养水平和抗原活性,为鸭疫里默氏杆菌灭活疫苗的研制提供技术指引.[方法]利用单因素及响应面的试验设计方法,针对鸭疫里默氏杆菌进行疫苗培养基的研制,并探究不同发酵时间点该菌的抗原活性,选择抗原活性最高点时制备灭活疫苗,通过动物免疫保护试验评价疫苗免疫效果.[结果]使用研制的疫苗培养基发酵培养鸭疫里默氏杆菌,其活菌数能够达到 4.68×1010 CFU/mL,较市面上该菌专用的培养基提高 2.29 倍.该菌发酵 12 h后抗原活性达到最高,在此时制备的灭活疫苗诱导小鼠产生的抗体水平显著高于商品化灭活疫苗,攻毒保护率达到了 100%.[结论]本研究研制的培养基具有优异的增菌效果,可作为生产鸭疫里默氏杆菌灭活疫苗抗原的发酵培养基,疫苗生产过程中可选择菌株抗原活性达到最高时收集菌体.

关键词：鸭疫里默氏杆菌疫苗培养基抗原活性响应面

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AM真菌接种和生草刈割对盆栽初生枳生长和土壤结构的影响

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中国南方果树 2024年第2期53卷 9-15页

作者：谢小林陈猛王勇周莲李成江刘玉敏姚青朱红惠广东省科学院微生物研究所/华南应用微生物国家重点实验室/农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物菌种保藏中心广州510070 广东博沃特生物技术有限公司广东韶关512026 华南农业大学广州510642

在温室中,研究了盆栽基质接种丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza,AM)真菌摩西管柄囊霉Funneliformis mosseae对初生(种子播种育苗2个月后的幼苗)枳Poncirus trifoliata生长、菌根侵染、菌丝长度、土壤球囊霉素相关土壤蛋白(GRSP)含量和土... 详细信息

在温室中,研究了盆栽基质接种丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza,AM)真菌摩西管柄囊霉Funneliformis mosseae对初生(种子播种育苗2个月后的幼苗)枳Poncirus trifoliata生长、菌根侵染、菌丝长度、土壤球囊霉素相关土壤蛋白(GRSP)含量和土壤结构的影响;同时研究了在AM真菌接种和柱花草间作条件下柱花草刈割对初生枳和柱花草生长、菌根侵染、土壤GRSP含量和土壤结构的影响。结果表明,与不接种相比,接种AM真菌显著地促进了初生枳生长,增加了土壤GRSP含量,并且土壤结构也得到改善。在AM真菌接种与柱花草间作的相同条件下,与柱花草未刈割相比,柱花草刈割对初生枳生长、菌根侵染、土壤GRSP含量和土壤结构均无显著性影响,但柱花草未刈割处理的菌丝长度是刈割处理的2.5倍。相关性分析表明,根际土壤大团聚体显著地与菌根侵染率、土壤GRSP含量和菌丝长度正相关,而生草刈割影响了丛枝菌根真菌菌丝长度,可能对土壤结构有不利影响。

关键词：果园生草丛枝菌根真菌刈割球囊霉素相关土壤蛋白质土壤结构

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广州地区GII.17型诺如病毒GZ-L343毒株病毒样颗粒的构建与免疫特征的鉴定

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微生物学通报 2023年第9期50卷 4168-4179页

作者：孟洛冰薛亮高珺珊王林平缪水娣任少雷张菊梅王涓古其会吴清平华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510641 广东省科学院微生物研究所、华南应用微生物国家重点实验室、广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州510070

【背景】人源诺如病毒是急性胃肠炎暴发的主要原因,GII.4是过去几十年的主要流行基因型。2014/2015年出现的GII.17型变异株是中国首例导致大规模暴发的非GII.4流行株。通过对来自华南地区的诺如病毒GII.17型毒株的完整基因组序列进行分... 详细信息

【背景】人源诺如病毒是急性胃肠炎暴发的主要原因,GII.4是过去几十年的主要流行基因型。2014/2015年出现的GII.17型变异株是中国首例导致大规模暴发的非GII.4流行株。通过对来自华南地区的诺如病毒GII.17型毒株的完整基因组序列进行分析,证实了该GII.17型突变株与先前确定的GII型变异株不同。【目的】制备广州地区GII.17型诺如病毒GZ-L343的病毒样颗粒,并系统表征其免疫原性及功能特性。【方法】借助杆状病毒表达系统制备GII.17-GZ-L343的病毒样颗粒,并通过氯化铯梯度超速离心对其进行纯化,制备抗血清并对其免疫功能进行评价。【结果】聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质免疫印迹结果表明所得蛋白分子量大小约为58 kDa;透射电镜结果表明病毒样颗粒直径约为30 nm;酶联免疫吸附测定结果显示该病毒样颗粒具有较好的免疫原性;唾液组织血型抗原的体外受体结合测定表明,该病毒样颗粒与部分A型、B型、O型及AB型分泌及非分泌血型样本存在阳性结合;效价测定结果表明免疫所得血清效价在104以上;交叉反应结果表明该抗血清与异型病毒样颗粒不存在交叉反应。此外,体外阻断结果表明,该抗血清仅能阻断相应型别病毒样颗粒与受体的结合作用,与异型病毒样颗粒不存在交叉阻断。【结论】GII.17-GZ-L343具有广泛的结合谱,其抗血清对异型病毒样颗粒不具有广谱性,且只对同型病毒样颗粒存在阻断作用,结果将为进一步揭示该病毒的宿主适应特性、进化机制及研发多价疫苗提供理论支持。

关键词：诺如病毒病毒样颗粒免疫特征受体结合

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基于髓源性抑制细胞的食药用菌多糖抗肿瘤免疫作用机制

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微生物学报 2022年第8期62卷 2969-2980页

作者：阮勤钊李向敏王涓谢意珍吴清平华南农业大学食品学院广东广州510642 广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广东广州510070

髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)是一种异质性的免疫调节细胞。在癌症机体中,MDSCs是主要的免疫抑制细胞,通过多种途径诱导T淋巴细胞衰竭和凋亡,促进肿瘤细胞逃逸,从而导致肿瘤不受控制地生长,是癌症治疗的主... 详细信息

髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)是一种异质性的免疫调节细胞。在癌症机体中,MDSCs是主要的免疫抑制细胞,通过多种途径诱导T淋巴细胞衰竭和凋亡,促进肿瘤细胞逃逸,从而导致肿瘤不受控制地生长,是癌症治疗的主要障碍。目前,MDSCs是癌症药物研究的热点和关键靶点。近年来,研究报道显示多糖可下调MDSCs在癌症患者及肿瘤实验动物体内数量和比例,并诱导免疫抑制功能丧失。食药用菌多糖是天然多糖的主要来源,可以通过多种途径激活肿瘤免疫应答,其抑制MDSCs功能的研究报道逐年增多,目前研究主要集中在香菇多糖、灵芝多糖等部分种类。因此,本文简要描述髓源性抑制细胞在癌症中的免疫抑制功能,然后详细地综述食药用菌多糖对髓源性抑制细胞作用的研究进展,以期为食药用菌多糖在肿瘤免疫药物开发及辅助增强(如免疫检查点抑制剂)等免疫治疗提供新思路。

关键词：食药用菌多糖髓源性抑制细胞 T细胞免疫作用

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细菌素的抑菌机制及其在食品工业中应用进展

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现代食品科技 2023年第11期39卷 323-332页

作者：李冰瑶郑茵王涓吴清平张菊梅丁郁广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验广东省微生物安全与健康重点实验室广东广州510070 暨南大学食品科学与工程系广东广州510632 华南农业大学食品学院广东广州510642

由致病菌等微生物污染所引起的食源性疾病和食品腐败变质始终是食品工业面临的巨大难题,而传统的抗生素防腐剂所产生的细菌耐药性会对人体健康造成潜在的威胁。出于人们对于安全和绿色防腐剂的巨大需求,细菌素的研究愈发成为焦点,以期... 详细信息

由致病菌等微生物污染所引起的食源性疾病和食品腐败变质始终是食品工业面临的巨大难题,而传统的抗生素防腐剂所产生的细菌耐药性会对人体健康造成潜在的威胁。出于人们对于安全和绿色防腐剂的巨大需求,细菌素的研究愈发成为焦点,以期发现可有效控制食源性病原体的新型抗菌物质。细菌素是细菌分泌的多肽或前体多肽,分子量在1~100 ku之间不均匀分布,可以杀死或抑制同一生态系统中竞争营养物质的敏感细菌,少数细菌素还表现出抗病毒和抗真菌等特性。已有研究发现的细菌素具有不同的作用模式,例如:成孔、抑制细胞壁/核酸/蛋白质合成等。该研究综述了细菌素的种类与抑菌作用机制,并结合最新的细菌素在食品工业上的应用,全面概述了细菌素抑菌的特性及其对未来食品行业的应用前景与展望,为细菌素更好的应用在食品工业中提供一定的理论依据,同时对推动食品防腐保鲜技术的革新发展具有重要的意义。

关键词：细菌素抑菌机制食品工业控制

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人诺如病毒重组乳酸菌疫苗的制备及免疫效果评价

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国际病毒学杂志 2024年第1期31卷 1-7页

作者：曹颖雯薛亮徐锐权高珺珊寇晓霞广州市传染性疾病临床快速诊断与预警重点实验室、广州医科大学金域检验学院 510180 广东省科学院微生物研究所、华南应用微生物国家重点实验室、广东省微生物安全与健康重点实验室、农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室广州510070

目的诺如病毒(norovirus,NoV)是导致人类急性胃肠炎的主要病原体之一,目前仍没有获批上市的NoV疫苗,开发安全有效且便于推广的NoV疫苗具有重要意义.本研究基于乳酸菌表达系统构建在体外表达GⅡ.2型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)主... 详细信息

目的诺如病毒(norovirus,NoV)是导致人类急性胃肠炎的主要病原体之一,目前仍没有获批上市的NoV疫苗,开发安全有效且便于推广的NoV疫苗具有重要意义.本研究基于乳酸菌表达系统构建在体外表达GⅡ.2型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)主要衣壳蛋白(viral protein 1,VP1)的重组乳酸乳球菌,并评价其诱导机体产生黏膜免疫和体液免疫的能力.方法将HuNoV GⅡ.2型VP1基因片段无缝克隆至乳酸菌表达系统中,体外诱导表达目的蛋白VP1,并通过正交试验优化蛋白表达条件.对小鼠进行口服免疫后通过ELISA方法测定其血清和组织中的免疫因子水平.结果构建了一株针对HuNoV GⅡ.2型的新型重组乳酸乳球菌疫苗,口服免疫后可诱导小鼠产生NoV特异性IgG和IgA,并诱导产生黏膜免疫系统的主要效应分子sIgA.结论本研究构建的口服乳酸菌疫苗能够诱导小鼠产生针对NoV的先天性和获得性免疫,并产生对应的免疫分子.与被广泛用于研究的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗相比,此口服疫苗还具有制备快捷、成本更低、运输方便的优势.

关键词：人诺如病毒口服疫苗乳酸菌 VP1

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哈茨木霉BWT1.221的固态发酵工艺条件优化研究

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中国生物防治学报 2023年第5期39卷 1224-1234页

作者：谢小林王勇陈猛周莲李成江刘玉敏朱红惠广东省科学院微生物研究所/华南应用微生物国家重点实验室/农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物菌种保藏中心广州510070 广东博沃特生物技术有限公司韶关512026 华南农业大学广州510642

哈茨木霉Trichoderma harzianum在植物病害生物防治中起着重要作用,但不同菌株的固态发酵工艺水平存在着很大的差异化。为了获得具有拮抗植物病原菌生防功能的哈茨木霉BWT1.221固态发酵的最佳条件,本研究采用单因素和正交实验法,通过测... 详细信息

哈茨木霉Trichoderma harzianum在植物病害生物防治中起着重要作用,但不同菌株的固态发酵工艺水平存在着很大的差异化。为了获得具有拮抗植物病原菌生防功能的哈茨木霉BWT1.221固态发酵的最佳条件,本研究采用单因素和正交实验法,通过测定发酵菌物烘干前后菌体有效活菌数及菌体数量占比对哈茨木霉BWT1.221固态发酵不同物料构比、发酵条件进行优化研究。试验结果表明,哈茨木霉BWT1.221固态发酵最佳发酵物料成分以麸皮和玉米粉混合物为发酵基质,物料比例为麸皮:玉米粉=0.25:1,速效碳源蔗糖添加量为5%,速效氮源尿素和硫酸铵的添加量分别为0.15%和0.8%,料水比为1:0.7。固态发酵最佳发酵条件为:发酵温度为28℃,发酵时间为7 d,液体接种量为5%,在28℃烘干条件下烘干24 h,制备获得微生物菌剂,其有效活菌数达10.78×109CFU/g,杂菌率≤0.01%。本研究为哈茨木霉的大规模发酵生产提供了一定的技术支持,对于促进我国应用生防制剂防治植物病害,减轻环境污染具有重要的意义。

关键词：哈茨木霉固态发酵菌体有效活菌数菌体数量占比微生物菌剂

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