检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2020年第3期42卷 219-228页

作者：饶一凡毛旭虎彭华刚尚伟龙饶贤才西南大学生命科学学院现代生物医药研究所三峡库区生态环境与生物资源省部共建国家重点实验室培育基地重庆400715 陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院临床微生物学与免疫学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院微生物学教研室重庆400038

目的探讨WalK(S221P)突变对万古霉素中等耐药金黄色葡萄球菌(vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus, VISA)毒力的影响及其机制。方法采用转录组测序比较VISA菌株XN108及其WalK(S221P)回复菌株K65的毒力基因表达差异,利用RT-qPCR检测菌株毒力基因的表达变化,溶血实验比较菌株的溶血能力。采用同源重组技术在金葡菌中引入WalK(S221P)突变,E-test检测菌株的耐药性。凝胶阻滞实验(EMSA)检测WalKR对靶基因调控区的结合能力。结果转录组测序结果显示,K65中多种重要毒力因子基因的表达上调(P<0.01),调控系统Agr的活性增强,溶血能力恢复。将WalK(S221P)突变引入USA300菌株后,其耐药性升高,毒力因子表达水平及溶血活性降低;EMSA证实WalKR对金葡菌Agr有直接调控作用;敲除agrA基因后,引入WalK(S221P)突变仍可使USA300agrA对万古霉素的耐药性升高,但毒力基因的表达水平及溶血活性改变不显著。结论 WalK(S221P)突变影响VISA毒力是通过Agr实现的,该突变导致WalKR的活性降低,激活Agr的能力下降,最终影响VISA菌株的毒力。

关键词：万古霉素中等耐药金黄色葡萄球菌二元调控系统 WalKR WalK(S221P)突变毒力

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类泛素蛋白及其中文命名

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科学通报 2018年第25期63卷 2564-2569页

作者：魏文毅孙毅曹诚常智杰陈策实陈佺程金科冯仁田高大明胡荣贵贾立军姜天霞金建平李汇华李卫刘翠华刘萱马蕾娜缪时英饶枫商瑜宋质银万勇王恒彬王平王占新吴缅吴乔谢旗谢松波谢志平徐平许执恒杨波阳成伟应美丹张宏冰张令强赵永超周军朱军王琳芳张宏王琛邱小波 Department of Pathology Beth Israel Deaconess Medical Center Harvard Medical School Boston MA 02115 USA 浙江大学医学院转化医学研究院杭州310058 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100071 清华大学膜生物学国家重点实验室北京100084 中国科学院昆明动物研究所昆明650223 中国科学院动物研究所膜生物学国家重点实验室北京100101 上海交通大学医学院生物化学与分子细胞生物学系上海200025 浙江海正药业有限公司台州318099 中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所上海200031 上海中医药大学中医肿瘤研究所和附属龙华医院上海200032 北京师范大学生命科学学院细胞增殖与调控生物学教育部重点实验室北京100875 Department of Biochemistry and Molecular Biology Medical School The University of Texas Health Science Center at Houston Houston TX 77030USA 大连医科大学附属第一医院心血管病研究所大连116011 中国科学院动物研究所干细胞与生殖生物学国家重点实验室北京100101 中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室北京100101 北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 南方科技大学生物系深圳518055 武汉大学生命科学学院武汉430072 Robert H.Lurie Comprehensive Cancer Center of Northwestern University Feinberg School of Medicine Northwestern University Chicago IL 60611 USA Department of Biochemistry and Molecular Genetics University of Alabama at Birmingham Birmingham AL 352942 USA 同济大学生命科学与技术学院上海第十人民医院上海200092 中国科学技术大学生命科学学院中国科学院天然免疫与慢性疾病重点实验室中国科学院分子细胞科学卓越创新中心细胞信号网络创新中心合肥230026 厦门大学生命科学学院细胞应激生物学国家重点实验室厦门361000 中国科学院遗传与发育生物学研究所植物基因组学国家重点实验室国家植物基因研究中心北京100101 山东师范大学生命科学学院生物医学科学研究所山东省动物抗性生物学重点实验室济南250014 上海交通大学生命科学技术学院上海200240 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所国家蛋白质科学中心北京蛋白质组学研究中心北京102206 中国科学院遗传与发育生物学研究所分子发育生物学国家重点实验室北京100101 浙江大学药学院杭州310058 华南师范大学生命科学学院广东省植物发育生物工程重点实验室广州510631 浙江大学医学院附属第一医院杭州310003 南开大学生命科学学院药物化学生物学国家重点实验室天津300071 上海交通大学医学院附属瑞金医院中法生命科学和基因组研究中心上海200025 中国科学院生物物理研究所生物膜国家重点实验室生物大分子卓越创新中心北京100101 中国药科大学生命科学学院南京211198

泛素(ubiquitin,Ub)家族包括泛素及类泛素蛋白(ubiquitin-like protein,UBL),约20种成员蛋白,通过共价修饰其底物从而调节着几乎所有动植物的细胞活动[1].泛素及类泛素修饰的异常将导致癌症或神经退行性疾病等多种人类重大疾病.因此,对... 详细信息

泛素(ubiquitin,Ub)家族包括泛素及类泛素蛋白(ubiquitin-like protein,UBL),约20种成员蛋白,通过共价修饰其底物从而调节着几乎所有动植物的细胞活动[1].泛素及类泛素修饰的异常将导致癌症或神经退行性疾病等多种人类重大疾病.因此,对该通路的干预已成为治疗人类疾病中的一种创新性途径[2].随着泛素及类泛素修饰领域的迅速发展,越来越多的中国科研工作者开始使用该领域的专用词汇.但是困扰这一领域持续发展的一个问题是类泛素蛋白并没有统一规范的中文译名,如Nedd8,SUMO和Atg8/LC3等.在我们撰写《泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬》专著时,这个问题显得尤为突出.因此,我们在2018年4月9日于苏州召开的该专著的编委会时讨论了类泛素蛋白的中文命名问题,并取得初步共识.

关键词： ubiquitin ubiquitin-like proteins ubiquitination Chinese nomenclature

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病毒介导的P53低表达HepG2细胞株的建立

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免疫学杂志 2012年第6期28卷 493-496页

作者：刘佳张俊磊李庆伟韩俊峰徐小峰王嘉丽陈炜饶贤才李国利重庆医科大学实验教学管理中心 401331 第三军医大学基础部微生物学教研室重庆400038 诸城市人民医院呼吸内一科 262200 第三军医大学全军免疫学研究所重庆400038 第三军医大学医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学生理学教研室重庆400038 重庆三峡医药高等专科学校 404120

目的构建干扰P53的逆转录病毒载体,建立稳定低表达P53的HepG2细胞株。方法合成干扰P53基因的寡核苷酸序列插入pMSCV-hyg-U6质粒,转化受体菌DH5α,经酶切测序鉴定后瞬时转染HepG2细胞,通过半定量RT-PCR方法检测P53 mRNA表达水平评估干扰... 详细信息

目的构建干扰P53的逆转录病毒载体,建立稳定低表达P53的HepG2细胞株。方法合成干扰P53基因的寡核苷酸序列插入pMSCV-hyg-U6质粒,转化受体菌DH5α,经酶切测序鉴定后瞬时转染HepG2细胞,通过半定量RT-PCR方法检测P53 mRNA表达水平评估干扰效果;选择干扰效果最好的重组质粒转染PT67细胞进行病毒包装,获得逆转录病毒颗粒感染HepG2细胞,通过Hygromycin筛选获得多个细胞克隆,Western blot检测P53蛋白的表达情况;选择P53表达水平最低的细胞克隆。通过5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导凋亡实验,检测P53低表达的HepG2细胞p53通路介导的细胞凋亡情况。结果经酶切和测序验证成功构建重组病毒载体;瞬时转染HepG2细胞后P53 mRNA表达下调;病毒颗粒感染HepG2细胞后P53的mRNA、蛋白表达下调;用5-FU处理后P53低表达HepG2细胞凋亡水平明显低于对照。结论成功构建了干扰P53的逆转录病毒载体,建立了P53低表达HepG2细胞株,明显阻断了P53通路依赖的细胞凋亡。

关键词：逆转录病毒 P53 HepG2 RNA干扰细胞凋亡

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进化树指导的腺病毒六邻体家族蛋白的快速建模

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高等学校化学学报 2011年第8期32卷 1838-1844页

作者：袁晓辉王迎晨曲章义任家毅王靖飞郭莹莹王雅贤华东吴晓敏杨志伟高虹中国医学科学院北京协和医学院病原生物学研究所北京100730 哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室哈尔滨150081 黑龙江中医药大学基础医学院微生物与免疫学研究室哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001 东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室哈尔滨150040

为实现对人腺病毒六邻体家族蛋白进行快速准确的结构建模,发展了一种新的基于进化树的预测蛋白质家族中一系列分子三维空间结构的快速建模方法.首先利用邻接法对7株D亚属人腺病毒的六邻体序列构建了基于距离的进化树,并根据进化树所提... 详细信息

为实现对人腺病毒六邻体家族蛋白进行快速准确的结构建模,发展了一种新的基于进化树的预测蛋白质家族中一系列分子三维空间结构的快速建模方法.首先利用邻接法对7株D亚属人腺病毒的六邻体序列构建了基于距离的进化树,并根据进化树所提供的信息确定最佳六邻体家族蛋白渐进式建模路径,然后利用Modeler与Charmm程序实现六邻体家族蛋白的快速建模.新的建模方法与传统方法相比,需要的计算量大大减少,经过结构评估以及与传统方法建模所得到的结构进行比较,证实基于进化树的快速建模结果是可靠的.人腺病毒六邻体家族蛋白的快速建模对于实现快速高通量的表位预测及开发多价人腺病毒疫苗与腺病毒分型诊断试剂都具有重大的意义.

关键词：同源建模进化树人腺病毒六邻体家庭蛋白

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HV单链抗体/鱼精蛋白片段融合蛋白1A8 ScFv/Cκ/P的构建和表达

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第四军医大学学报 2008年第11期29卷 967-970页

作者：陈锐杨洁张芳琳秦炜炜王涛张瑞孟艳玲胡刚徐志凯杨安钢第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710033 第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710033 第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710033

目的:构建汉坦病毒(Hantavirus,HV)单链抗体/鱼精蛋白片段融合蛋白1A8 ScFv/Cκ/P基因的原核表达载体,蛋白经表达后纯化并进行1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白的功能活性鉴定.方法:采用PCR的方法,扩增单链抗体基因1A8 ScFv和1A8 ScFv/Cκ,将鱼... 详细信息

目的:构建汉坦病毒(Hantavirus,HV)单链抗体/鱼精蛋白片段融合蛋白1A8 ScFv/Cκ/P基因的原核表达载体,蛋白经表达后纯化并进行1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白的功能活性鉴定.方法:采用PCR的方法,扩增单链抗体基因1A8 ScFv和1A8 ScFv/Cκ,将鱼精蛋白片段的编码序列设计入扩增引物,获得HV单链抗体/鱼精蛋白片段的融合蛋白基因1A8 ScFv/Cκ/P.将获得的重组基因克隆入原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21中表达.表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,用Ni-NTA螯合层析介质进行纯化.采用ELISA方法分析1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白与HV抗原的结合活性,凝胶迁移阻滞实验检测1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白与质粒DNA的结合活性.结果:成功构建了HV 1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白基因的表达载体,在大肠杆菌中实现了可溶性表达.通过功能活性测定,纯化的1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白既保持了与HV抗原的结合能力,同时又具有与核酸的结合活性.结论:构建和表达的HV 1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白具有HV抗原结合活性和DNA结合的活性.

关键词：汉坦病毒单链抗体鱼精蛋白融合蛋白靶向输送

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抑制ATM表达对^(60)Co照射下宫颈癌细胞损伤修复机制的影响

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肿瘤 2007年第8期27卷 607-610页

作者：魏莉辛晓燕王建薛涛曹云新雷迎锋张红菊第四军医大学西京医院妇产科西安710032 第四军医大学西京医院耳鼻喉科西安710032 第四军医大学西京医院基础部免疫学教研室西安710032 第四军医大学西京医院基础部微生物学教研室西安710032

目的:探讨抑制毛细血管扩张-共济失调突变基因(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)表达对人宫颈癌细胞株HeLa在60Co照射下细胞损伤修复机制的影响。方法:电穿孔法将人ATM基因siRNA的重组真核表达质粒pSup-ATM转染宫颈癌HeLa细胞;G418... 详细信息

目的:探讨抑制毛细血管扩张-共济失调突变基因(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)表达对人宫颈癌细胞株HeLa在60Co照射下细胞损伤修复机制的影响。方法:电穿孔法将人ATM基因siRNA的重组真核表达质粒pSup-ATM转染宫颈癌HeLa细胞;G418筛选建立稳定转染株;RT-PCR、W estern-b lot、免疫荧光法检测ATM基因表达的抑制情况;W estern-b lot法检测60Co照射前后各组细胞ATM、p53Ser15磷酸化、CHK2Thr 68磷酸化、p53、CHK2蛋白的表达水平;流式细胞术检测60Co照射后各组的细胞周期变化。结果:ATM基因在HeLaATM细胞中表达明显低于在HeLa、HeLans细胞中的表达水平,成功地建立了ATM低表达的宫颈癌细胞模型。HeLaATM细胞在60Co照射后p53Ser15磷酸化、CHK2Thr68磷酸化、p53蛋白表达均显著降低,细胞周期呈现为G2期延长,G1/G2倒置。结论:抑制ATM基因表达可显著抑制宫颈癌细胞对60Co辐射损伤的修复。这一机制可能与HeLaATM细胞中ATM蛋白表达缺失,ATM依赖性的细胞损伤修复通路受阻有关。

关键词：宫颈肿瘤放射疗法 RNA 小分子干扰 ATM基因 HeLa细胞

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用于筛选COPS3相互作用蛋白酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-COPS3的构建及鉴定

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山西医科大学学报 2007年第7期38卷 577-580,F0003页

作者：苏海川赵玉红陈军张伟李陕区第四军医大学唐都医院中心实验室西安710038 第四军医大学基础部免疫学教研室第四军医大学基础部微生物学教研室

目的用COPS3基因片段构建酵母双杂交GAL4系统的诱饵载体pGBKT7-COPS3,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用。方法运用RT-PCR技术从骨肉瘤细胞系SOSP-9607中扩增出COPS3基因片段,克隆入pUC19质粒,经测序正确后,... 详细信息

目的用COPS3基因片段构建酵母双杂交GAL4系统的诱饵载体pGBKT7-COPS3,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用。方法运用RT-PCR技术从骨肉瘤细胞系SOSP-9607中扩增出COPS3基因片段,克隆入pUC19质粒,经测序正确后,插入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因有无激活作用。结果成功获得COPS3基因片段,其表达蛋白对酵母菌AH109无毒性,对报告基因亦无激活作用。结论可以利用酵母双杂交GAL4系统来研究与COPS3相互作用蛋白。

关键词：基因,COPS3 酵母双杂交系统报告基因

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螺杆菌感染与NF—κB p65蛋白表达相关性在人食管癌发生中的意义

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第3期27卷 234-239页

作者：张丽叶嗣颖 Ulrich Bohr 陈新山田拥军张小兵华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物系武汉430030 华中科技大学同济医学院基础医学院法医病理学系武汉430030 华中科技大学同济医学院基础医学院附属同济医院分子生物学实验中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430030 暨南大学医学院微生物学和免疫学教研室广州510632 德国马格德堡大学医学院胃肠病学肝病学和传染病学系

目的研究人食管癌是否存在螺杆菌感染及其与NF-κB p65蛋白的关系，从而探讨在人食管癌发生中的意义。方法随机收集食管癌标本40例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16SrRNA，随机选4例测序及同源比较。阳性者再... 详细信息

目的研究人食管癌是否存在螺杆菌感染及其与NF-κB p65蛋白的关系，从而探讨在人食管癌发生中的意义。方法随机收集食管癌标本40例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16SrRNA，随机选4例测序及同源比较。阳性者再扩增幽门螺杆菌（***,Hp）的特异基因相对分子质量（Mr）26×10^3的种特异性抗原和相关功能基因（GagA，VacA）。并采用免疫组化法检测食管癌组织中NF-κB p65蛋白的表达情况。结果32．5％（13／40）的食管癌组织中发现有螺杆菌16SrRNA基因存在，正常人食管组织无一例阳性。4例测序及同源比较，食管癌组织中螺杆菌序列与***的16SrRNA序列有99％～100％同源性。阳性标本均扩增出脚特异基因M，26×10^3种特异性抗原，但仅2例扩增出G田弘基因，3例扩增出VacA基因。免疫组化法染色显示，16SrRNA阳性的食管癌组织中NF-κB p65蛋白表达率为100％（13／13），而16SrRNA阴性食管癌组织表达率仅占18．5％（5／27），二者差异有统计学意义（P〈0．01）。结论食管癌患者食管组织存在螺杆菌感染，该螺杆菌可能为脚。螺杆菌感染导致食管黏膜NF-κB p65蛋白表达的增加，可能在食管癌生成中作为信号传导机制之一。

关键词：食管癌螺杆菌 PCR NF-κB p65蛋白免疫组化染色

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糖基化与HCVE2诱导的体液免疫应答相关性的研究

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微生物学杂志 2006年第5期26卷 19-22页

作者：李平飞李艳梅赵兰娟刘敏万崎陈新文章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室基础医学院免疫学系和过敏及其免疫相关疾病湖北省重点实验室湖北武汉430071 清华大学生命有机磷化学及化学生物学教育部重点实验室第二军医大学微生物学教研室中国科学院武汉病毒研究所湖北武汉430071

检测丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)包膜蛋白E2糖基化位点对体液免疫功能的影响。野生型E2基因和糖基化突变体型E2基因的真核表达质粒DNA分别肌肉注射BALB/C小鼠,免疫3次,末次免疫后第10 d,眼眶摘眼球取血清,断椎处死小鼠,同时设... 详细信息

检测丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)包膜蛋白E2糖基化位点对体液免疫功能的影响。野生型E2基因和糖基化突变体型E2基因的真核表达质粒DNA分别肌肉注射BALB/C小鼠,免疫3次,末次免疫后第10 d,眼眶摘眼球取血清,断椎处死小鼠,同时设阴性对照和空载质粒对照。血清标本用ELISA检测特异性IgG及其亚类IgG1I、gG2α表达水平,观测特异性体液免疫反应和脾细胞分泌细胞因子水平。与阴性对照和空载组对比,E2和N-糖基化突变体质粒DNA免疫小鼠都能诱导产生强烈的特异性免疫反应(P<0.01),并且N-糖基化突变体(560、576位糖基化突变体)质粒DNA与野生型E2相比,其特异性IgG效价明显降低(P<0.05),IL-4分泌水平明显降低(P<0.05)。E2糖蛋白的560、576位N-糖基化位点是诱导体液免疫反应所需要的,除去560、576位N-糖基化会降低E2诱导的体液免疫应答。

关键词： HCV 包膜蛋白糖基化体液免疫

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糖基化与HCVE2诱导的体液免疫应答相关性的研究

糖基化与HCVE2诱导的体液免疫应答相关性的研究

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第五届全国感染与免疫及生物制品学术研讨会

作者：李平飞李艳梅赵兰娟刘敏万崎陈新文章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室基础医学院免疫学系和过敏及其免疫相关疾病湖北省重点实验室湖北武汉430071 中国科学院武汉病毒研究所湖北武汉430071 清华大学生命有机磷化学及化学生物学教育部重点实验室第二军医大学微生物学教研室

丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)包膜蛋白E2糖基化位点对体液免疫功能的影响.野生型E2基因和糖基化突变体型E2基因的真核表达质粒DNA分别肌肉注射BALB/C小鼠,免疫 3 次,末次免疫后第 10 d,眼眶摘眼球取血清,断椎处死小鼠,同时设阴... 详细信息

丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)包膜蛋白E2糖基化位点对体液免疫功能的影响.野生型E2基因和糖基化突变体型E2基因的真核表达质粒DNA分别肌肉注射BALB/C小鼠,免疫 3 次,末次免疫后第 10 d,眼眶摘眼球取血清,断椎处死小鼠,同时设阴性对照和空载质粒对照.血清标本用ELISA检测特异性IgG及其亚类IgG1、IgG2α表达水平,观测特异性体液免疫反应和脾细胞分泌细胞因子水平.与阴性对照和空载组对比,E2和N-糖基化突变体质粒DNA免疫小鼠都能诱导产生强烈的特异性免疫反应(P＜0.01),并且N-糖基化突变体(560、576 位糖基化突变体)质粒DNA与野生型E2相比,其特异性IgG效价明显降低(P＜0.05),IL-4分泌水平明显降低(P＜0.05).E2糖蛋白的 560、576 位N-糖基化位点是诱导体液免疫反应所需要的,除去 560、576 位N-糖基化会降低E2诱导的体液免疫应答.

关键词： HCV 包膜蛋白糖基化体液免疫

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