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细胞与分子免疫学杂志 2009年第1期25卷 49-52页

作者：汪少华沈宜李静向自武范维珂陈黎重庆医科大学基础医学院病理生理教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:评价顺铂(DDP)与exosomes联用的抗肿瘤效果,研究其可能机制。方法:采用MTT法检测顺铂对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响,用H22源exosomes瘤苗免疫小鼠,3H-TdR释放法检测exosomes诱导产生的CTL活性及顺铂对CTL杀伤的增敏作用,RT-PCR检测... 详细信息

目的:评价顺铂(DDP)与exosomes联用的抗肿瘤效果,研究其可能机制。方法:采用MTT法检测顺铂对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响,用H22源exosomes瘤苗免疫小鼠,3H-TdR释放法检测exosomes诱导产生的CTL活性及顺铂对CTL杀伤的增敏作用,RT-PCR检测顺铂作用后H22细胞中Fas及exosomes免疫后脾淋巴细胞FasL的mRNA表达水平,Western blot检测顺铂对H22细胞Fas的蛋白表达水平的影响。以小鼠肝癌H22细胞接种BALB/c小鼠建立动物模型,观察顺铂联合exosomes治疗对小鼠生存期的影响。结果:顺铂抑制H22细胞生长呈量效关系;exosomes免疫小鼠可诱导产生针对H22细胞的CTL反应,经2.5mg/L顺铂预处理24h的H22细胞对CTL杀伤的敏感性增强(P<0.05)。顺铂在mRNA和蛋白水平,显著增强H22Fas的表达;exosomes免疫小鼠后,脾淋巴细胞FasL表达增加。顺铂联合exosomes组小鼠生存期较单独治疗组及对照组明显延长(P<0.05)。结论:顺铂与exosomes联合治疗有协同抑制肿瘤的作用,产生协同作用的机制与增强CTL活性有关。

关键词：顺铂 exosomes 联合治疗肿瘤疫苗

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11,12-环氧二十碳三烯酸对缺氧/复氧诱导的内皮细胞损伤及细胞间黏附因子-1表达的影响

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首都医科大学学报 2009年第6期30卷 805-808页

作者：邱笑违王珏王红霞王雯蒋东桥芦玲巧唐朝枢张立克首都医科大学基础医学院病理生理学教研室

目的观察11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-epoxyeicosatrienoic acids,11,12-EET)对缺氧/复氧诱导的内皮细胞损伤以及黏附分子表达的影响,了解环氧二十碳三烯酸发挥血管保护作用的可能途径,初步探讨其作用机制。方法采用原代培养人脐静脉... 详细信息

目的观察11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-epoxyeicosatrienoic acids,11,12-EET)对缺氧/复氧诱导的内皮细胞损伤以及黏附分子表达的影响,了解环氧二十碳三烯酸发挥血管保护作用的可能途径,初步探讨其作用机制。方法采用原代培养人脐静脉内皮细胞,用数字表法将其随机分为对照组、11,12-EET对照组、缺氧/复氧组和11,12-EET缺氧/复氧组。通过向培养瓶内通入混合气体(2%O2,5%CO2,93%N2)3h,复氧1h,复制缺氧/复氧损伤模型。采用MTT法检测细胞活力,用比色法检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的变化,用RT-PCR法检测细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)mRNA表达,用酶联免疫吸附实验测定细胞间黏附分子-1蛋白表达,用Western blotting方法检测蛋白激酶B(Akt)。结果11,12-EET在常氧条件下可对细胞造成轻度损伤,在缺氧/复氧条件下能显著提高内皮细胞的存活率,提高SOD的活性,降低MDA的含量,抑制细胞间黏附分子-1 mRNA和蛋白的表达,提高Akt的表达。结论11,12-EET具有减轻内皮细胞缺氧/复氧损伤作用,这可能与其能提高缺氧/复氧条件下内皮细胞SOD活性、清除氧自由基、抑制细胞间黏附分子-1 mRNA和蛋白的表达和促进Akt的表达有关。

关键词： 11 12-环二十碳三烯酸内皮细胞缺氧/复氧损伤

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靶向TNF-α基因shRNA干扰片段的筛选和重组体的构建

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中国实验血液学杂志 2009年第1期17卷 180-183页

作者：宋晓宇郑宁宁孙鲁宁张海鹏中国医科大学基础医学院病理生理教研室辽宁沈阳110001

本研究利用RNA干扰技术,筛选出可以高效、特异性抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的小发夹状RNA(shRNA)片段,设计并构建重组质粒,进行序列分析,为探索TNF-α相关疾病的基因治疗提供新途径。取原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,置于15%DMEM中,... 详细信息

本研究利用RNA干扰技术,筛选出可以高效、特异性抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的小发夹状RNA(shRNA)片段,设计并构建重组质粒,进行序列分析,为探索TNF-α相关疾病的基因治疗提供新途径。取原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,置于15%DMEM中,调细胞浓度为2×107/L,接种于6孔板,3ml/well;细胞用脂多糖(LPS)激活,ELISA法测不同时间培养上清中TNF-α的浓度;将针对TNF-α基因的5段shRNA干扰片段的表达框经PCR扩增、纯化后,与转染试剂混合转染入巨噬细胞,细胞用LPS激活24小时后用ELISA法测培养上清中TNF-α的浓度,RT-PCR法测细胞TNF-αmRNA的表达;将最有效抑制TNF-α表达的干扰片段插入质粒载体,转化***5α感受态菌株,提取质粒,进行测序分析。结果表明:LPS刺激巨噬细胞24小时后,细胞分泌TNF-α达高峰;转染了干扰序列1的细胞培养上清中TNF-α浓度与对照组相比下降最明显(p<0.05),达59.46%,TNF-αmRNA的表达被抑制了61.2%;将干扰序列1DNA序列克隆到载体上,经测序鉴定确实为所需序列。结论:成功筛选出靶向TNF-α基因的shRNA干扰片段并构建重组质粒,可进一步利用克隆所得到的shRNA干扰TNF-αmRNA的表达,为TNF-α相关疾病的基因治疗提供新手段。

关键词：肿瘤坏死因子-α 小发夹状RNA RNA干扰

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裸质粒与脂质体介导转染方法对大鼠平滑肌细胞CYP2J3基因表达的影响

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首都医科大学学报 2009年第4期30卷 481-485页

作者：常静曾翔俊王红霞穆晶刘琨王瑛李珊珊张立克首都医科大学基础医学院病理生理学教研室首都医科大学基础医学院生物化学教研室

目的比较脂质体介导法和裸质粒直接转染法导入CYP2J3基因表达的效率。方法将CYP2J3真核表达质粒导入原代培养大鼠平滑肌细胞,用半定量RT-PCR方法检测CYP2J3 mRNA表达,Western blotting方法测定CYP2J3蛋白表达,高效液相色谱法测定培养液1... 详细信息

目的比较脂质体介导法和裸质粒直接转染法导入CYP2J3基因表达的效率。方法将CYP2J3真核表达质粒导入原代培养大鼠平滑肌细胞,用半定量RT-PCR方法检测CYP2J3 mRNA表达,Western blotting方法测定CYP2J3蛋白表达,高效液相色谱法测定培养液11,12-EET含量。实验分为裸质粒转染组(2J3)、脂质体介导转染组(L2J3)和对照组,转染后24h和48h收集细胞。结果转染后24h,2个转染组CYP2J3 mRNA表达均较对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);L2J3组蛋白含量较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01),2J3组蛋白含量较L2J3组高,差异有统计学意义(P<0.05)。培养液11,12-EET含量在3组间差异无统计学意义。转染后48h2个转染组CYP2J3 mRNA表达较24h时弱,但仍较对照组高,脂质体转染组较裸质粒转染组CYP2J3 mRNA表达增强;2J3组及L2J3组蛋白含量均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01);2个转染组培养液中11,12-EET浓度较对照组高,脂质体转染组表达高于裸质粒转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论裸质粒直接转染能成功导入CYP2J3基因并表达产物。

关键词：细胞色素P450单氧化酶 CYP2J3 裸质粒基因转染环-二十碳三烯酸

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神经丝蛋白质糖基化与磷酸化的相互调节和神经退行性疾病

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生命的化学 2009年第6期29卷 812-816页

作者：崔冉亮胡海燕吕朴戎凯陈宁邓艳秋天津医科大学基础医学院病理生理学教研室天津300070

神经丝(neurofilament,NF)蛋白质是神经元细胞骨架的主要成分,由低(68kDa)、中(160 kDa)和高(200 kDa)分子量的三种亚基聚合而成,在维持细胞骨架、稳定细胞形态和轴突转运方面均有十分重要意义。NF蛋白质存在两个非常重要的翻译后修饰... 详细信息

神经丝(neurofilament,NF)蛋白质是神经元细胞骨架的主要成分,由低(68kDa)、中(160 kDa)和高(200 kDa)分子量的三种亚基聚合而成,在维持细胞骨架、稳定细胞形态和轴突转运方面均有十分重要意义。NF蛋白质存在两个非常重要的翻译后修饰——磷酸化和O位N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)糖基化。由于它们修饰同一蛋白质的相同或邻近丝氨酸和苏氨酸羟基,因此磷酸化和糖基化修饰可能存在着竞争性调节,在神经退行性变性疾病如阿尔茨海默病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症和进行性肌肉萎缩症等发病机制中可能起十分重要的作用。

关键词：神经丝神经丝蛋白质磷酸化糖基化神经退行性疾病

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窦神经压力感受器聚类分析

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首都医科大学学报 2009年第5期30卷 658-663页

作者：赵海燕魏华刘萍刘廷会王伟黄海霞钮伟真首都医科大学燕京医学院生理学教研室首都医科大学医学实验与测试中心首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系

目的探讨应用Spike2软件从颈动脉窦压力感受器多重纤维放电记录中提取单纤维放电信息的可能性和具体方法。方法对离体条件下同步记录的家兔颈动脉窦压力和窦神经少纤维放电数据,应用Spike2软件的聚类分析功能对所有动作电位进行分类。... 详细信息

目的探讨应用Spike2软件从颈动脉窦压力感受器多重纤维放电记录中提取单纤维放电信息的可能性和具体方法。方法对离体条件下同步记录的家兔颈动脉窦压力和窦神经少纤维放电数据,应用Spike2软件的聚类分析功能对所有动作电位进行分类。结果①分析过程中,设定模板参数必须紧密结合压力感受器的自身特点;②对于具有较高信噪比的、简单(含2-3个单位)或稍复杂的窦神经放电(含5个单位),应用Spike2进行分析可获得可靠的单位放电结果;③对于包含更多单位的压力感受器放电,应用Spike2分析时,对所得结果需持审慎的态度。结论Spike2软件适用于窦神经压力感受器少纤维(<5个单位)放电的聚类分析;正确分析结果取决于原始记录良好的信噪比和对模版参数有针对性的设置。

关键词：颈动脉窦压力感受器动作电位单纤维放电聚类分析主成分分析

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显示肠肌间神经丛的全层铺片技术

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首都医科大学学报 2009年第2期30卷 256-258页

作者：纪托薛红朱进霞首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系生理学教研室

自1921年Langley提出“肠道神经系统”(entericnervous system,ENS)的概念以来,ENS对肠道运动的控制和功能调节的重要性日益引起人们的注意[1]。本实验室长期从事胃肠功能调节等方面的研究[2-3],深感消化道全层铺片技术[4-5]是研究肠道... 详细信息

自1921年Langley提出“肠道神经系统”(entericnervous system,ENS)的概念以来,ENS对肠道运动的控制和功能调节的重要性日益引起人们的注意[1]。本实验室长期从事胃肠功能调节等方面的研究[2-3],深感消化道全层铺片技术[4-5]是研究肠道神经系统必需的方法之一。虽然利用该技术显示肌间神经丛的方法已被众多学者广泛接受和使用,但文献中却很少提及此方法的详细操作过程。本研究室在传统铺片制作技术的方法上进行了不断的摸索和改进,本文就制作铺片的细节进行了较为详尽的阐述,谨供同行分享。1材料和方法1.1动物实验动物为成年SD大鼠,体质量200~300g;成年豚鼠,体质量250~350g;成年ICR小鼠,体质量15~25g。动物均来源于首都医科大学实验动物科学部。实验动物编号:SD大鼠:SCXK-(军)2007-004,ICR小鼠:SGXK(京)2007-0001。1.2方法1)取材:大鼠、豚鼠和小鼠均以颈椎脱臼法急性处死。腹部正中切口打开腹腔,取结肠,置4℃、4%多聚甲醛溶液固定2h,用0.1mol/L磷酸缓冲液(PBS)冲洗后再置于4℃、300g/L蔗糖溶液中过夜,次日行全层铺片。2)...

关键词：铺片网络结构小鼠豚鼠大鼠小家鼠荷兰猪肌间神经丛奥尔巴克丛免疫荧光组织化学

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As_2O_3联合H_(22)源exosome的抗肿瘤作用研究

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激光杂志 2009年第4期30卷 82-84页

作者：沈宜向自武陈国庆谢莹珊郑维萍重庆医科大学基础医学院病理生理教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合小鼠肝癌(H22)源exosome对小鼠皮下种植性肝癌(H22)模型的抗瘤作用。方法:超速离心及密度梯度离心法提取exosome,Bradford法蛋白定量;建立BALB/c小鼠皮下荷瘤模型,实验分4组:空白成瘤对照组、As2O3组、As... 详细信息

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合小鼠肝癌(H22)源exosome对小鼠皮下种植性肝癌(H22)模型的抗瘤作用。方法:超速离心及密度梯度离心法提取exosome,Bradford法蛋白定量;建立BALB/c小鼠皮下荷瘤模型,实验分4组:空白成瘤对照组、As2O3组、As2O3联合exosome组和exosome组。观察As2O3、exosome、及其联合应用的体内抗瘤效应;监测在体肿瘤的生长情况;计算抑瘤率、生存率:免疫组织化学法检测肿瘤组织中浸润的CD4+、CD8+T淋巴细胞。结果:与空白成瘤对照组比较,As2O3组、及其与exosome联合组的肿瘤生长明显放缓(P<0.05)。其抑瘤率分别为44.58%、66.27%。As2O3组及As2O3联合exosome组肿瘤组织中浸润的CD4+、CD8+T淋巴细胞明显增加(P<0.05)。结论:As2O3与exosome联合应用对小鼠皮下种植性实体性肝癌(H22)有协同治疗效应。

关键词：肿瘤免疫 As2O3 小鼠肝癌细胞H22 exosome

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黄连素通过PI3K抑制肺炎衣原体感染诱导的血管内皮细胞迁移

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中国动脉硬化杂志 2009年第11期17卷 877-881页

作者：权伟张利军陈宁王蓓蓓张丽莙天津医科大学基础医学院病理生理学教研室天津市300070

目的观察肺炎衣原体感染对人血管内皮细胞迁移的影响,探讨黄连素对其干预作用及作用机制。方法体外成功培养肺炎衣原体AR-39株后,感染不同浓度黄连素(0、100、150及200 mmol/L)预处理的内皮细胞,在感染后24、48及72 h,创伤修复实验、Tra... 详细信息

目的观察肺炎衣原体感染对人血管内皮细胞迁移的影响,探讨黄连素对其干预作用及作用机制。方法体外成功培养肺炎衣原体AR-39株后,感染不同浓度黄连素(0、100、150及200 mmol/L)预处理的内皮细胞,在感染后24、48及72 h,创伤修复实验、Transwell实验观察内皮细胞迁移的变化,逆转录聚合酶链反应和酶联免疫吸附法检测内皮细胞中信号蛋白PI3K mRNA表达水平和酶活性。结果与正常对照组比较,肺炎衣原体感染组内皮细胞于24、48及72 h迁移量均明显增加(P<0.01),且PI3K mRNA表达水平显著升高,酶活性亦明显增强(P<0.01);与肺炎衣原体感染组比较,PI3K抑制剂LY294002组内皮细胞迁移量明显减少(P<0.01),PI3K mRNA表达水平明显降低,酶活性也明显减弱(P<0.01);与肺炎衣原体感染组比较,黄连素中剂量组和高剂量组内皮细胞迁移量均明显下降(P<0.01),PI3K mRNA表达水平和酶活性均明显降低(P<0.01),且PI3K mRNA表达水平和酶活性均与细胞迁移抑制程度呈正相关(r分别为0.841和0.832,P<0.01)。结论肺炎衣原体感染可能是通过激活PI3K诱导内皮细胞迁移;黄连素可拮抗肺炎衣原体感染诱导的内皮细胞迁移,其机制可能与黄连素下调PI3K表达及抑制PI3K活化有关。

关键词：黄连素肺炎衣原体内皮细胞迁移 P13K 血管新生

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双抗体夹心法检测3-硝基酪氨酸方法的建立及应用

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中国应用生理学杂志 2009年第4期25卷 569-572页

作者：闫莉许言午王晓梁武烨田珏杨光照马秀瑞刘慧荣山西医科大学生理学教研室山西太原030001 上海中医药大学基础医学院生物化学教研室上海201203 首都医科大学病理生理学教研室北京100069

目的:建立一种准确、快速的双抗体夹心酶免疫吸附的方法,以定量检测组织中过氧亚硝基阴离子的水平。方法:分别以小鼠源性抗3-硝基酪氨酸单克隆IgG抗体和兔源性抗3-硝基酪氨酸IgG抗体为包被抗体和检测抗体,采用正交设计方法摸索以上各抗... 详细信息

目的:建立一种准确、快速的双抗体夹心酶免疫吸附的方法,以定量检测组织中过氧亚硝基阴离子的水平。方法:分别以小鼠源性抗3-硝基酪氨酸单克隆IgG抗体和兔源性抗3-硝基酪氨酸IgG抗体为包被抗体和检测抗体,采用正交设计方法摸索以上各抗体的浓度,建立定量检测3-硝基酪氨酸(3-NT)的双抗体夹心ELISA法。同时,测定心肌缺血再灌注大鼠心肌组织3-NT的含量。结果:本研究建立的双抗体夹心ELISA法检测3-NT的最低检测下限为0.10 ***-1,具有良好线性关系的检测范围是(0.15～7.50)***-1(r2=0.995);心肌缺血再灌注组大鼠的心肌组织中的3-NT水平为(1022.42±97.35)*** pro-1,明显高于假手术组(246.58±56.52 *** pro-1,P<0.01)。结论:本研究建立的定量检测3-NT的双抗体夹心ELISA法能够方便、准确、快速地检测组织中3-NT的含量,为定量检测组织中ONOO-的水平提供了新的方法。

关键词：过氧亚硝基阴离子硝基化酪氨酸酶联免疫吸附测定

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