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活体荧光技术在肿瘤研究中的应用

活体荧光技术在肿瘤研究中的应用

引用

亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：高苒刘学丽冯娟董伟全雄志张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的建立绿色荧光(GFP)转基因小鼠模型,用GFP和DsRed标记肿瘤细胞,建立系统的活体光学成像技术所需标记动物和标记细胞。并且利用GFP小鼠和DsRed标记的肿瘤细胞,建立双荧光小鼠肿瘤模型,并建立活体荧光成像和荧光显微镜成像在整体和细... 详细信息

目的建立绿色荧光(GFP)转基因小鼠模型,用GFP和DsRed标记肿瘤细胞,建立系统的活体光学成像技术所需标记动物和标记细胞。并且利用GFP小鼠和DsRed标记的肿瘤细胞,建立双荧光小鼠肿瘤模型,并建立活体荧光成像和荧光显微镜成像在整体和细胞水平直接观察肿瘤的技术。方法把EGFP和DsRed基因插入chickenβ-actin强启动子下游构建转基因载体,并且用上述载体标记肿瘤细胞;利用显微注射转基因技术建立绿色荧光转基因C57BL/6J小鼠;将DsRed标记的B16小鼠黑色素瘤细胞接种到绿色荧光转基因小鼠皮下,建立双荧光小鼠肿瘤模型;用活体荧光成像仪和荧光纤维镜分别在整体和细胞水平观察肿瘤的生长。结果建立了绿色荧光转基因小鼠模型和荧光素酶转基因小鼠模型,标记了12种人和小鼠的肿瘤细胞。利用DsRed标记的B16小鼠黑色素瘤细胞和GFP转基因小鼠建立了双荧光小鼠肿瘤模型。利用活体荧光影像仪可以动态监测肿瘤的生长,可以观察到双色荧光小鼠模型中受体绿色荧光组织和红色荧光移植肿瘤相互融合。利用荧光显微镜,可以观察到肿瘤内绿色荧光标记的来源于受体小鼠的血管和免疫细胞。经香菇多糖刺激的GFP小鼠肿瘤模型的移植瘤组织中,来源于受体小鼠绿色荧光标记的血管明显少于经生理盐水刺激的对照组,而免疫细胞明显多于对照小鼠。结论成功建立了绿色荧光转基因小鼠,将成为活体荧光影像系统的重要实验动物模型;利用绿色荧光转基因小鼠和红色荧光DsRed标记的肿瘤细胞建立的双荧光小鼠肿瘤模型,采用活体荧光成像仪和荧光显微镜可在整体和细胞水平直接观察肿瘤的生长以及肿瘤与宿主的相互作用;而且香菇多糖治疗效果的观察也证实了活体光学成像技术的直观性和实用性。

关键词：活体荧光转基因小鼠肿瘤模型

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肝素结合类表皮生长因子参与DCM模型小鼠心脏间质纤维化

肝素结合类表皮生长因子参与DCM模型小鼠心脏间质纤维化

引用

亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：冯娟彭健豪张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的探讨肝素结合类表皮生长因子对DCM模型小鼠心脏间质纤维化的作用。方法 Western blotting检测野生型和DCM模型小鼠心脏中HB-EGF的表达,H&E和Masson染色检测DCM模型小鼠心脏组织学,Realtime PCR检测DCM模型小鼠心脏Ⅰ型胶原和Ⅲ... 详细信息

目的探讨肝素结合类表皮生长因子对DCM模型小鼠心脏间质纤维化的作用。方法 Western blotting检测野生型和DCM模型小鼠心脏中HB-EGF的表达,H&E和Masson染色检测DCM模型小鼠心脏组织学,Realtime PCR检测DCM模型小鼠心脏Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。显微注射法建立HB-EGF转基因C57BL/6J小鼠,PCR鉴定基因表型,Western blotting检测表达水平。病理检测HB-EGF转基因小鼠心脏的组织学,Realtime PCR检测HB-EGF转基因小鼠心脏Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。原代培养C57BL/6J小鼠心肌成纤维细胞,重组人HB-EGF(10ng/ml)刺激心肌成纤维细胞后,BrdU免疫组织化学法检测心肌成纤维细胞的增殖,Realtime PCR检测Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达,Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs),ERK1/2和JNK信号通路的变化。结果野生型小鼠心脏HB-EGF的表达随月龄增加而逐渐降低,而DCM转基因小鼠心脏中HB-EGF随月龄增加病情加重而增加,并伴随有间质纤维化以及Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达增加(1.7倍和1.6倍)。用HB-EGF转基因小鼠研究HB-EGF的功能,发现HB-EGF可增加心脏间质纤维化,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达(1.8倍)。用重组人HB-EGF刺激原代培养心肌成纤维细,30 min即引起Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达显著增加,24h引起心肌成纤维细胞明显增殖,10 min即可引起ERK1/2,JNK磷酸化水平增加。结论结果证实HB-EGF参与DCM模型小鼠心脏间质纤维化。HB-EGF促进Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达,可能通过MAPKs信号通路发挥上述作用。

关键词：肝素结合类表皮生长因子转基因模型心肌细胞成纤维细胞丝裂原活化蛋白激酶

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19种抗禽类IgY多克隆抗体的制备和标记

19种抗禽类IgY多克隆抗体的制备和标记

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：杨帆林树柱刘先菊秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的本课题的主要目标是纯化与人类关系密切的禽类一级抗体作为抗原,制备HRP-标记的抗多种二级抗体,建立多种动物血清学检测体系。以解决动物病原血清学检测体系不完备的问题。方法采集了19种与人类关系密切的禽类蛋或血清,用水稀释法,H... 详细信息

目的本课题的主要目标是纯化与人类关系密切的禽类一级抗体作为抗原,制备HRP-标记的抗多种二级抗体,建立多种动物血清学检测体系。以解决动物病原血清学检测体系不完备的问题。方法采集了19种与人类关系密切的禽类蛋或血清,用水稀释法,HiTrap IgY Purification HP免疫亲和层析法,PEG沉淀,阴离子交换层析,硫酸铵分级沉淀法等纯化了不同鸟类的IgY,并用纯化的IgY作为抗原制备抗血清。Protein-A亲和纯化兔抗IgY血清IgG。使用改良过碘酸钠法制备酶结合物。ELISA检测酶标抗体的工作浓度,western blotting检测酶标抗体的特异性。结果应用改良的硫酸铵沉淀法纯化获得鹅、鸬鹚、鸵鸟、富贵鸟、鸽子、大雁IgY。应用嗜硫性亲和层析和无机盐沉淀法纯化获得孔雀、鹌鹑、贵妃鸡、夜鹭、草鹭IgY。应用切胶法获得赤嘴潜鸭、燕鸥、长脚鹬、虎皮鹦鹉、翘鼻麻鸭、麻雀IgY。共19种鸟类的IgY。本研究制备了17种辣跟过氧化物酶标记的兔抗禽IgY抗体。用纯化的鸬鹚IgY、鸽子IgY、鹌鹑IgY、鹅IgY、草鹭IgY作抗原,制备的抗血清与未纯化卵黄样品的western blotting分析,形成特异的重链和轻链条阳性条带,具有很高的特异性。用过碘酸钠法标记兔抗禽IgY抗体,获得了HRP标记的抗体,用直接ELISA方法检测抗体的最适工作浓度。兔抗草鹭IgY-HRP、兔抗鹌鹑IgY-HRP、兔抗麻雀IgY-HRP、兔抗鸽子IgY-HRP、兔抗大雁IgY-HRP的最适ELISA工作浓度为1:1000。兔抗鸵鸟IgY-HRP、兔抗夜鹭IgY-HRP、兔抗鸬鹚IgY-HRP的ELISA最适工作浓度可以达到1:10000。结论获得了优质可靠的兔抗麻雀IgY-IgG酶标抗体。为鸟类的血清学检测体系建立了初步资源。

关键词：新发传染病禽类 IgY 抗IgY HRP

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Dkk3转基因模型

Dkk3转基因模型

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：吕丹冯娟赵海平张丽张伟董伟秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的为在体内研究Dkk3对心脏功能的影响而建立心脏特异的Dkk3转基因小鼠。背景WNT家族WNT1、WNT3a、WNT8等成员对心脏发育具有重要的作用,Dkk3作为Wnt通路拮抗剂Dickkopf(Dkk)家族成员之一,目前发现其与肿瘤发生发展,细胞保护、凋亡等... 详细信息

目的为在体内研究Dkk3对心脏功能的影响而建立心脏特异的Dkk3转基因小鼠。背景WNT家族WNT1、WNT3a、WNT8等成员对心脏发育具有重要的作用,Dkk3作为Wnt通路拮抗剂Dickkopf(Dkk)家族成员之一,目前发现其与肿瘤发生发展,细胞保护、凋亡等病理进程关系密切,但对于Dkk3对心脏及心血管系统的生物学功能所知甚少,本研究特建立心脏特异的Dkk3转基因小鼠,为研究Dkk3对心脏功能的影响提供病理模型工具。方法利用基因克隆技术,构建α-MHC-m-Dkk3表达载体,经酶切及序列测序鉴定后,通过显微注射将制备好的片段注入受精卵,将注射后存活的受精卵移入ICR假孕母鼠,产下的仔鼠经聚合酶链反应(PCR)筛选出整合有外源目的基因的阳性转基因鼠;对转基因小鼠心脏组织RNA行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及RNA印迹(Northern blot)分析,检测Dkk3在转基因小鼠心脏中的表达水平;对转基因小鼠心脏进行超声波分析,观察转基因小鼠心脏结构形态及功能的变化情况;利用光镜观察转基因小鼠心脏整体结构形态及心肌细胞、胶原纤维等显微结构的改变;利用光镜观察转基因小鼠左心房及左心室等部位心肌纤维、肌质网及线粒体等超微结构的改变。结果重组质粒α-MHC-m-Dkk3中α-MHC启动子及Dkk3 cDNA序列正确,假孕鼠所产仔鼠经PCR检测,检出15只首建鼠;依RT-PCR和Northern blot分析结果筛出高、中、低不同表达水平的3个首建鼠用于其他实验研究;超声波检查发现Dkk3于心脏中过表达可引起转基因小鼠左心室心壁变厚,左心室心腔缩小,心重指数增加,射血分数增加,心肌收缩力增强等改变;光镜观察转基因小鼠整体心脏HE、Masson染色,可见左心室心腔及心肌细胞间间隙变小,心肌细胞增大等改变;电镜观察转基因小鼠心脏超微结构发现其心肌纤维排列轻度紊乱,肌质网轻度扩张,线粒体有增生等改变。结论 Dkk3对心脏的正常生理功能具有重要的影响,α-MHC-m-Dkk3转基因小鼠系的建立为深入研究Dkk3对心脏功能的影响提供了病理模型。

关键词： Dkk3转基因心脏模型

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YCZX01对cTnTR141W转基因扩张型心肌病模型的治疗作用及机理研究

YCZX01对cTnTR141W转基因扩张型心肌病模型的治疗作用及机理研究

引用

亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：赵海平吕丹冯娟张丽张伟董伟秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的观察YCZX01对遗传性扩张型心肌病模型的治疗作用,并研究其可能的药理机制。方法繁殖cTnT转基因扩张型心肌病小鼠,PCR法鉴定基因型,待小鼠到1.5月龄后进行心脏超声检测,根据体重、心功能将其分成三组:阴性鼠作为对照组,阳性鼠分为模... 详细信息

目的观察YCZX01对遗传性扩张型心肌病模型的治疗作用,并研究其可能的药理机制。方法繁殖cTnT转基因扩张型心肌病小鼠,PCR法鉴定基因型,待小鼠到1.5月龄后进行心脏超声检测,根据体重、心功能将其分成三组:阴性鼠作为对照组,阳性鼠分为模型组及YCZX01给药组（n=12）。将YCZX01（75mg/kg/d）放入动物饮水中,连续给药7个月。cTnT转基因小鼠在实验过程中有猝死,从给药开始记录各组的动物死亡数,七个月后用spss10.0统计软件进行生存率分析。每个月进行一次心脏超声检测,对左心室长轴M超结果进行分析,比较各组动物的心脏构型及心功能。给药7个月后,采用HE染色和Masson染色,光镜观察心脏的显微结构。透射电镜观察心肌的超微结构。RT-PCR法检测心脏缝隙连接蛋白Cx40、Cx43,钙粘蛋白N-cadherin、E-cadherin、P-cadherin,整合素Itga8、Itgb1bp3,成纤维生长因子FGF2以及ASK1的表达水平的变化。结果连续7个月的超声检测显示,cTnT转基因小鼠出现进行性的左心室扩张及收缩功能障碍。并有猝死发生;drug1减轻了扩心病小鼠的左心室扩张,改善了心功能,并降低了死亡率。心脏HE及Masson染色显示,cTnT转基因小鼠有心肌细胞的不均匀肥大及间质胶原的增生,透射电镜结果显示,cTnT转基因小鼠发生线粒体肿胀、嵴断裂,肌浆网扩张,闰盘连接破坏;YCZX01改善了心脏的结构。cTnT转基因小鼠心脏缝隙连接蛋白Cx40的表达降低,钙粘蛋白E-cadherin、P-cadherin的表达增加,整合素Itga8、Itgb1bp3的表达增加,成纤维生长因子FGF2及ASK1的表达增加,Cx43、N-cadherin的表达没有显著的变化。Drug1提高了Cx40的表达,降低了E-cadherin、P-cadherin、Itga8、Itgb1bp3的表达,降低了FGF2、ASK1的表达。结论 YCZX01对cTnT转基因扩张型心肌病小鼠有治疗作用,可能部分通过抑制FGF2、ASK1的表达发生作用。

关键词： YCZX01 遗传性扩张型心肌病治疗

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YCZX02对cTnTR141W转基因扩张型心肌病模型的治疗作用及机理研究

YCZX02对cTnTR141W转基因扩张型心肌病模型的治疗作用及机理研究

引用

亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：赵海平冯娟董伟吕丹李万波秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的观察YCZX02对遗传性扩张型心肌病模型的治疗作用,并研究其可能的药理机制。方法繁殖cTnT转基因扩张型心肌病小鼠,PCR法鉴定基因型,待小鼠到1.5月龄后进行心脏超声检测,根据体重、心功能将其分成三组:阴性鼠作为对照组,阳性鼠分为模... 详细信息

目的观察YCZX02对遗传性扩张型心肌病模型的治疗作用,并研究其可能的药理机制。方法繁殖cTnT转基因扩张型心肌病小鼠,PCR法鉴定基因型,待小鼠到1.5月龄后进行心脏超声检测,根据体重、心功能将其分成三组:阴性鼠作为对照组,阳性鼠分为模型组及YCZX02给药组（n=12）。将YCZX02（40mg/kg/d）放入动物饮水中,连续给药7个月。cTnT转基因小鼠在实验过程中有猝死,从给药开始记录各组的动物死亡数,七个月后用spss10.0统计软件进行生存率分析。每个月进行一次心脏超声检测,对左心室长轴M超结果进行分析,比较各组动物的心脏构型及心功能。给药7个月后,采用HE染色和Masson染色,光镜观察心脏的显微结构。RT-PCR法检测心脏缝隙连接蛋白Cx40、Cx43,心肌收缩蛋白MYL4、MYL7、MYH6、MYH7,钾离子通道kcnj3、kcnal以及钙调蛋白PLN、SLN表达水平的变化。结果连续7个月的超声检测显示,cTnT转基因小鼠出现进行性的左心室扩张及收缩功能障碍,并有猝死发生;drag2减轻了扩心病小鼠的左心室扩张,改善了心功能,并降低了死亡率。心脏HE及Masson染色显示,cTnT转基因小鼠有心肌细胞的不均匀肥大及间质胶原的增生,YCZX02改善了心脏的结构。RT-PCR结果显示cTnT转基因小鼠心脏缝隙连接蛋白Cx40的表达降低,心肌收缩蛋白MYL4、MYL7表达增加,钾离子通道kcnj3、kcnal表达升高,钙调蛋白SLN表达升高,Cx43、MYH6、MYH7、PLN的表达没有显著的变化。YCZX02提高了Cx40的表达,降低了MYLA、MYL7的表达,降低了kcnj3、kcnal、SLN的表达。结论 YCZX02对cTnT转基因扩张型心肌病小鼠有治疗作用,可能部分通过调节钙钾离子转运发生作用。

关键词： YCZX02 cTnTR141W转基因扩张型心肌病治疗

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动物与新发传染病

动物与新发传染病

引用

中国科协第179次青年科学家论坛——传染病病原体变异和致病机制

作者：秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

野生动物源性传染性人兽共患病作为新发传染病已经成为威胁人类健康的重要因素。对人类健康造成了巨大的全球负担，其确切程度尚难统计。作者介绍了新发对传染病的种类，并对流行病学和新发传染病与野生动物的关系进行了详细的分析，同... 详细信息

野生动物源性传染性人兽共患病作为新发传染病已经成为威胁人类健康的重要因素。对人类健康造成了巨大的全球负担，其确切程度尚难统计。作者介绍了新发对传染病的种类，并对流行病学和新发传染病与野生动物的关系进行了详细的分析，同时，还对新发传染病的防治作了展望。

关键词：新发传染病流行病学野生动物

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cTnTR92Q转基因小鼠肥厚型心肌病模型的建立

cTnTR92Q转基因小鼠肥厚型心肌病模型的建立

引用

亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：董伟冯娟祝梅香全雄志张伟秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的建立cTnT肥厚型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnT基因插入α-MHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnT转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnT转基因小鼠的基因表型,RT-PCR检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnT转... 详细信息

目的建立cTnT肥厚型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnT基因插入α-MHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnT转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnT转基因小鼠的基因表型,RT-PCR检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnT转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个不同表达水平的cTnT转基因小鼠品系。转入的cTnT基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。组织学分析显示cTnT转基因小鼠心脏变大,心室壁肥厚,心腔变小,心肌细胞排列紊乱,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室壁变厚,收缩期容积和舒张期容积显著缩小,射血分数、短轴缩短率明显增加。结论 cTnT转基因小鼠心脏变大,室壁变厚,心腔变小,心肌细胞排列紊乱,间质纤维化以及心肌舒张功能失调,说明成功建立了cTnT转基因小鼠肥厚型心肌病模型,为研究肥厚型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。

关键词：心肌肌钙蛋白T 肥厚型心肌病转基因模型基因突变

来源：评论

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cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠模型

cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠模型

引用

亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：冯娟董伟全雄志张晓娟秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的建立cTnT扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnT基因插入α-MHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnT转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnT转基因小鼠的基因表型,Reahime PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting... 详细信息

目的建立cTnT扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnT基因插入α-MHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnT转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnT转基因小鼠的基因表型,Reahime PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting检测基因表达,组织学和电镜检测cTnT转基因小鼠心脏的病理改变。免疫组织化学检测突变的cTnT蛋白的定位。超声心动图检测cTnT转基因小鼠心脏的结构和功能。记录cTnT转基因小鼠的生存状况。逆转录PCR检测cTnT转基因小鼠的心脏肥大分子标志物。结果建立了3个系的cTnT转基因小鼠。3个系的基因拷贝数分别是15、20和59拷贝。cTnT的表达水平是内源性cTnT的1.5～2.0倍。cTnT转基因小鼠心脏组织学检测显示,室壁变薄,心室扩张,间质纤维化。电镜检测显示肌纤维变细,部分溶解。免疫组织化学检测显示,突变的cTnT蛋白聚集在cTnT转基因小鼠心脏的肌小节中。M型超声心动图检测显示,左室收缩末期内径和左室舒张末期内径明显增加58.3%和27.8%,左室收缩期容积和左室舒张期容积显著增加191.2%和75.9%,射血分数和短轴缩短率分别降低39.9%和45.4%。从2月龄到8月龄,转基因小鼠左室收缩末期容积和左室舒张末期容积增加2倍左右,EF%降低36.7%,FS%降低39.7%。4月龄后转基因小鼠出现早期死亡,至8月龄早期死亡率达11.1%。心脏肥大的分子标记物检测显示Nppb表达增加29%,Actal增加4倍,而Atp2a2降低58%。结论 cTnT转基因小鼠的全心扩大,室壁变薄,心肌细胞肥大,间质纤维化以及心肌收缩力下降,说明成功建立了cTnT转基因小鼠扩张型心肌病模型,为研究扩张型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。

关键词：心肌肌钙蛋白T 基因突变扩张型心肌病转基因模型

来源：评论

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PDGF-CCK转基因小鼠的建立及对代谢影响的初步研究

PDGF-CCK转基因小鼠的建立及对代谢影响的初步研究

引用

亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：刘学丽杜静董伟全雄志秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

前言胆囊收缩素(Cholecystokinin,CCK)是一种广泛存在于胃肠道和中枢神经系统的脑肠肽,具有多种生理学功能。作为在脑内含量最丰富的脑肠肽之一,CCK在神经系统内参与了多种生理过程并发挥着重要的功能,如抑制进食、抗焦虑、镇痛、调节... 详细信息

前言胆囊收缩素(Cholecystokinin,CCK)是一种广泛存在于胃肠道和中枢神经系统的脑肠肽,具有多种生理学功能。作为在脑内含量最丰富的脑肠肽之一,CCK在神经系统内参与了多种生理过程并发挥着重要的功能,如抑制进食、抗焦虑、镇痛、调节血压和增强记忆等。但是,迄今为止人们对CCK在脑中发挥作用的具体机制还不清楚;对CCK在脑中的许多功能还存在着很大的争论。目的为了更好的研究CCK在中枢神经系统的功能,本实验采用神经特异性启动子PDGF,建立了在神经系统特异性表达CCK的转基因小鼠并对CCK对小鼠摄食行为和体重的影响进行了初步探讨。结果我们通过扩增CCK cDNA编码区,克隆到含有神经特异性启动子PDGF的载体,构建了CCK转基因表达载体;酶切含有PDGF启动子、CCK目的片段、PolyA的片断进行显微注射,建立携带有CCK的转基因小鼠,通过鼠尾PCR的方法鉴定转基因首建鼠;采用WestemBlot方法鉴定CCK在脑内的表达;测量阳性鼠和同窝阴性鼠体重、血糖、血脂并进行统计学分析。结论我们得到了3只CCK阳性首建鼠,其中2首建鼠品系的鼠脑内CCK表达量比野生鼠明显增加。对各组小鼠进食进水量监测显示:给与正常饮食时,CCK降低了雄鼠摄食量,增加雌鼠摄食量;高脂饮食时,CCK增加了小鼠摄食量;对摄水量无显著影响。转基因小鼠体重低于阴性鼠,餐后血糖高于阴性鼠,血脂未发现显著差异。脑内CCK高表达可使小鼠消瘦,且血糖升高。实验结果初步显示,CCK对小鼠摄食行为有影响,是调节小鼠摄食和体重的一个重要神经肽。

关键词：胆囊收缩素中枢神经系统模型

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