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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：刘超董伟李冰谢英苏利波张力韩梅河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所河北医科大学生物化学与分子生物学教研室河北省医学生物技术重点实验室

目的平滑肌22α（SM22α）是平滑肌细胞（VSMC）骨架相关蛋白,参与VSMC骨架重构,与动脉粥样硬化、高血压等血管重塑性疾病与关。本研究旨在在SM22α基因内部引入LoxP序列,制备基于Cre/L0xP系统的SM22α条件性基因敲除小鼠,研究其在VSMC... 详细信息

目的平滑肌22α（SM22α）是平滑肌细胞（VSMC）骨架相关蛋白,参与VSMC骨架重构,与动脉粥样硬化、高血压等血管重塑性疾病与关。本研究旨在在SM22α基因内部引入LoxP序列,制备基于Cre/L0xP系统的SM22α条件性基因敲除小鼠,研究其在VSMC骨架重构中的作用机制。方法利用CRISPR/Cas9技术编辑小鼠SM22α基因。在外显子1～2和3～4的非编码区各设计sgRNA位点并将其定向克隆至pUC57-sgRNA。设计包含外显子2、3及2个LoxP序列且两侧各带有700bp同源臂的环状供体载体。Cas9的mRNA使用mMESSAGE mMACHINE（?）T7Ultra Kit进行体外转录,sgRNA使用线性化的spUC57-sgRNA重组质粒作为模板用MEGAshortscriptKit体外转录合成。将制备好Cas9 mRNA、sgRNA和供体质粒进行混合,其浓度分别为Cas9 mRNA 25 ng/μl,sgRNA 10 ng/μl,供体质粒4 ng/μl。水平显微注射法将其导入170枚C57BL/6×B6D2F1受精卵原核。将注射后存活的约140枚受精卵移植入5只当日见栓的假孕KM雌鼠输卵管中,得到17只子代小鼠,经PCR和测序筛选目标小鼠。结果有一只小鼠等位基因的特定位点插入了LoxP序列,三只小鼠删除了SM22α基因的第2第3外显子。结论借助CRISPR/Cas9技术得到了SM22α基因内部引入LoxP序列的小鼠和SM22α基因敲除小鼠,为研究SM22α在VSMC中的作用机制提供了重要实验条件。

关键词： SM22a VSMC骨架重构 CRISPR/CAS9

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聚焦基础研究,关注科研前沿--第65届日本实验动物学年会研究内容简介

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中国比较医学杂志 2018年第7期28卷 91-91页

作者：白琳中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心

2018年5月15日—19日,中国实验动物学会代表团一行16人参加了第65届日本实验动物学年会。本次会议汇集了来自日本、中国、韩国、印度尼西亚等实验动物领域相关的科研、技术和管理专家。本次会议共发表报告和论文240余篇,涉及实验动物使... 详细信息

2018年5月15日—19日,中国实验动物学会代表团一行16人参加了第65届日本实验动物学年会。本次会议汇集了来自日本、中国、韩国、印度尼西亚等实验动物领域相关的科研、技术和管理专家。本次会议共发表报告和论文240余篇,涉及实验动物使用管理、实验动物育种、动物疾病模型构建、比较医学分析等实验动物的各个领域。现将会议中的重点研究领域作简单的介绍和分析:(1)实验动物育种生殖技术实验动物育种生殖技术是实验动物繁殖和基因修饰动物研制的关键技术。本次大会中关于实验动物育种生殖技术的报告共计36篇。其中实验动物学会的功劳奖颁给了Naomi Nakagata教授,主要汇报内容是优化了精子冷冻技术,并对精子冷冻的国际标准提出了修改。

关键词：中国实验动物学会内容简介日本年会科研聚焦生殖技术精子冷冻

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助力战疫不添乱

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家庭医学(下半月) 2020年第5期 45-45页

作者：向志光杨师北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所

一粒种子,遇不到合适的土壤,便不会生长;而一种病毒,找不到它的宿主,它还能怎样?病毒是一种不能独立生存的生物,它必须侵入其他生物的细胞才能繁殖。如果把肆虐的病毒当作一粒种子,那么我们人体的细胞就是这种子的土壤。传染病的发生有...

一粒种子,遇不到合适的土壤,便不会生长;而一种病毒,找不到它的宿主,它还能怎样?病毒是一种不能独立生存的生物,它必须侵入其他生物的细胞才能繁殖。如果把肆虐的病毒当作一粒种子,那么我们人体的细胞就是这种子的土壤。传染病的发生有三个条件。一个是传染源,就是病毒本身。一个是传播途径,不同的病毒传

关键词：

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实时荧光定量Alu-PCR检测整合型SIV/SHIV DNA方法的建立

实时荧光定量Alu-PCR检测整合型SIV/SHIV DNA方法的建立

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第十四届中国实验动物科学年会

作者：童玲陈霆李想丛喆薛婧北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所国家卫生和计划生育委员会人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室

目的建立实时荧光定量Alu-PCR方法,检测SIV/SHIV感染恒河猴体内整合的前病毒DNA。方法提取SIV/SHIV感染猴PBMCs中的DNA,Alu-PCR扩增DNA上病毒LTR U3区域内长度为188bp的片段,将该片段与pGEM T载体连接,构建p GEM-SIV LTR188质粒。扩增... 详细信息

目的建立实时荧光定量Alu-PCR方法,检测SIV/SHIV感染恒河猴体内整合的前病毒DNA。方法提取SIV/SHIV感染猴PBMCs中的DNA,Alu-PCR扩增DNA上病毒LTR U3区域内长度为188bp的片段,将该片段与pGEM T载体连接,构建p GEM-SIV LTR188质粒。扩增纯化质粒并进行定量,10倍系列稀释后,做出标准曲线,作为TaqMan-MGB探针实时荧光定量Alu-PCR的标准品。结果建立的质粒标准品可精确定量到10copies/μL,利用该方法对4只SIV/SHIV感染猴PBMCs中整合型前病毒DNA进行检测,阳性率为100%,高于Alu-PCR 62.5%的阳性率。结论 TaqMan-MGB探针实时荧光定量Alu-PCR方法能够定量检测整合入宿主基因组中的前病毒DNA,灵敏度高,可以用于评价SIV/SHIV潜伏库的大小。

关键词： Alu-PCR 整合型SIV/SHIV 潜伏库

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气溶胶传播之谜

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家庭医学(下半月) 2020年第7期 52-52页

作者：魏强赵宏旭杨师北京协和医学院比较医学中心/中国医学科学院医学实验动物研究所

新型冠状病毒肺炎疫情迅速蔓延,给国家的经济带来了巨大的损失,也给人民的生命财产造成极大的威胁。究其传播原因,主要是病毒经空气(飞沫)传播,通过呼吸道进入人体,速度快、侵袭力强,并且早期不易发现携带者,暴露者疏于防护而被大面积...

新型冠状病毒肺炎疫情迅速蔓延,给国家的经济带来了巨大的损失,也给人民的生命财产造成极大的威胁。究其传播原因,主要是病毒经空气(飞沫)传播,通过呼吸道进入人体,速度快、侵袭力强,并且早期不易发现携带者,暴露者疏于防护而被大面积感染。

关键词：

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建立和人类密切接触的动物血清学检测体系具有重要的社会意义

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中国比较医学杂志 2007年第11期17卷 I0001-I0001页

作者：秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心

近年来新发传染病体已经成为人类健康的主要威胁之一,其中给社会造成巨大损失和对人类健康威胁最大的新发传染病有SARS,艾滋病,禽流感等(图1).

关键词：动物血清学人类健康密切接触社会意义新发传染病测体 SARS 野生动物

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揭示基因组功能的强大工具:基因打靶技术——2007年度诺贝尔生理学或医学奖成果简介

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科技导报 2007年第24期25卷 30-35页

作者：秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

基因打靶技术是20世纪80年代发展起来的新技术,是一种利用DNA同源重组原理和胚胎干细胞(ES细胞)技术按定向组合的方式改变生物活体遗传信息的实验手段,具有定位性强、打靶后新的基因有随染色体DNA稳定遗传的特点,其方法包括基因敲除、... 详细信息

基因打靶技术是20世纪80年代发展起来的新技术,是一种利用DNA同源重组原理和胚胎干细胞(ES细胞)技术按定向组合的方式改变生物活体遗传信息的实验手段,具有定位性强、打靶后新的基因有随染色体DNA稳定遗传的特点,其方法包括基因敲除、基因敲入、点突变、缺失突变、染色体组大片段删除等,相关的基因工程技术包括转基因、基因沉默和基因捕获技术等,为生命科学、基因组学和疾病治疗等领域的研究提供了强大的工具。美国科学家Mario R. Capecchi,Oliver Smithies和英国科学家Martin J. Evans因基因打靶技术的开创性研究而获得了2007年度诺贝尔生理学或医学奖。

关键词：诺贝尔生理学或医学奖基因打靶基因工程功能基因组学

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流感病毒聚合酶酸性亚基转基因小鼠的制备与初步鉴定

流感病毒聚合酶酸性亚基转基因小鼠的制备与初步鉴定

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：谢英国娇李冰刘超河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所中国人民解放军军事兽医研究所动物病毒学研究室中国人民解放军军事兽医研究所动物病毒学研究室吉林农业大学动物科学技术学院河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部

目的本实验旨在构建禽流感病毒聚合酶酸性亚基(PA)转基因小鼠,以期获得转基因小鼠模型,为流感病毒致病机理研究和抗流感药物开发提供新思路.方法甲型H1N1流感病毒野毒株A/Changchun/01/2009(H1N1)为军事兽医研究所动物病毒学与特种疫... 详细信息

目的本实验旨在构建禽流感病毒聚合酶酸性亚基(PA)转基因小鼠,以期获得转基因小鼠模型,为流感病毒致病机理研究和抗流感药物开发提供新思路.方法甲型H1N1流感病毒野毒株A/Changchun/01/2009(H1N1)为军事兽医研究所动物病毒学与特种疫病学实验室分离、保存,经RNA抽提逆转后从中扩增出甲型流感病毒H1N1PA基因的CDS基因全长序列.通过定向克隆的方法将其连接到pIRES2-GFP载体上,酶切鉴定并测序.为提高目的基因表达效率再将重组质粒中的CMV启动子替换为UBC启动子,命名为pUBC-IRES-PA.转染至293T细胞,通过GFP表达情况检测其在细胞内的表达效率.Qiagen@EndoFree Plasmid Maxi Kit制备质粒,线性化后用SephadexG-50进行凝胶层析纯化,纯化产物用0.1×TE缓冲液稀释至终浓度5ng/μl.水平显微注射法将其导入140枚C57BL/6×B6D2F1受精卵原核.将注射后存活的约110枚受精卵移植入3只当日见栓的假孕KM雌鼠输卵管中.仔鼠出生10天后,提取尾尖组织DNA,PCR扩增鉴定仔鼠基因型.结果构建的真核重组表达质粒pUBC-IRES-PA转染293T细胞后,可检测到PA的转录和表达.共产生14只子代小鼠,鼠尾PCR检测获得转基因阳性首建鼠1只,可以稳定遗传并建系.结论本实验成功构建了pUBC-IRES-PA真核表达载体,初步获得了稳定整合PA基因的转基因小鼠,进一步进行基因表达情况与病理学方法检测后有望建立小鼠流感病毒PA蛋白转基因模型,促进流感发病机理研究和药物开发.

关键词：流感病毒转基因小鼠

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新冠疫情期间医学研究生心理、学业状态分析和教育策略研究

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医学信息 2022年第4期 79-83页

作者：张钰曲春辉张玲秦川中国医学科学院医学实验动物研究所/北京协和医学院比较医学中心/国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室/北京市人类重大疾病实验动物模型工程技术研究中心

目的评估2020年至今国内外突发的新冠肺炎疫情期间医学研究生居家学习的心理和学习状态，为返校复学后、新冠疫情常态化防控下研究生教育和心理支持提供参考。方法于2020年5月-7月采用自设问卷、SDS抑郁自评量表和SAS焦虑自评量表，... 详细信息

目的评估2020年至今国内外突发的新冠肺炎疫情期间医学研究生居家学习的心理和学习状态，为返校复学后、新冠疫情常态化防控下研究生教育和心理支持提供参考。方法于2020年5月-7月采用自设问卷、SDS抑郁自评量表和SAS焦虑自评量表，对北京协和医学院、北京大学医学院研究生群体展开线上调查，分析医学研究生居家学习的心理和学业状态。结果共收回有效问卷164份，有效回收率98.20%；调查对象平均年龄为（25.82±2.23）岁，主要来自河北省、山东省等25个地区；医学研究生在新冠肺炎疫情期间心理和学业状况基本正常，其中7.93%的学生出现一定程度的抑郁表现，7.32%的学生出现轻度焦虑表现，4.27%的学生出现中度焦虑表现；居家学习期间学习内容有课程、组会、学术论坛等，学习效果较好，并与教师、同学和家人建立了较好的沟通联系。结论新冠肺炎疫情期间医学研究生的心理和学业状态较好。后疫情时代应更好的关注教师、家庭和同学三方面因素对医学研究生的心理支持作用，指导疫情常态化防控阶段返校学生的心理和学业教育。

关键词：新冠肺炎医学研究生心理健康焦虑抑郁

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SCARB2蛋白提高人肠道病毒71型对转基因小鼠的感染力

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中国比较医学杂志 2013年第7期23卷 16-20,插2页

作者：修晶辉刘江宁杨亚军夏咸柱张连峰中国医学科学医学实验动物研究所/中国医学科学院、北京协和医学院比较医学中心/卫生部人类疾病比较医学重点实验室/国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室军事医学科学学院军事兽医研究所/吉林省人畜共患病防治重点实验室

目的:细胞实验证实人清道夫受体B2(hSCARB2)是人类EV71的受体,本研究拟通过建立人SCARB2转基因小鼠,建立感染能力更高的小鼠模型。方法:构建CMV启动子的SCARB2转基因表达载体,通过显微注射法建立C57BL/6J背景的人SCARB2转基因小鼠,PCR... 详细信息

目的:细胞实验证实人清道夫受体B2(hSCARB2)是人类EV71的受体,本研究拟通过建立人SCARB2转基因小鼠,建立感染能力更高的小鼠模型。方法:构建CMV启动子的SCARB2转基因表达载体,通过显微注射法建立C57BL/6J背景的人SCARB2转基因小鼠,PCR筛选阳性首建鼠.通过Western Blot和免疫组化检测目的:蛋白在各组织中的表达.EV71感染转基因小鼠后,通过实时荧光定量PCR和免疫组化检测目的:蛋白表达对病毒感染的促进效果。结果:人SCARB2蛋白主要在转基因小鼠的骨骼肌和脑组织中表达,与野生型小鼠相比,转基因小鼠组织中的病毒载量显著提高4到5倍。结论:人SCARB2的体内表达可促进EV71对转基因小鼠的感染,该蛋白在体内具有EV71受体功能.

关键词：人肠道病毒71型人SCARB2蛋白转基因小鼠病毒受体

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