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南京中医药大学学报 2017年第3期33卷 263-267页

作者：吴豪宋捷仲青香韦英杰封亮汪晶贾晓斌安徽中医药大学药学院安徽合肥230038 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室江苏南京210028

目的采用斑马鱼模型探究补骨脂提取物对肝脏的毒性作用。方法根据斑马鱼幼鱼在不同浓度的补骨脂水提物和醇提物中的存活数和死亡数,计算出幼鱼死亡率初步评估补骨脂水提物和醇提物的毒性大小。药浴后的斑马鱼幼鱼进行组织匀浆,通过生化... 详细信息

目的采用斑马鱼模型探究补骨脂提取物对肝脏的毒性作用。方法根据斑马鱼幼鱼在不同浓度的补骨脂水提物和醇提物中的存活数和死亡数,计算出幼鱼死亡率初步评估补骨脂水提物和醇提物的毒性大小。药浴后的斑马鱼幼鱼进行组织匀浆,通过生化仪测定谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的酶活。斑马鱼成鱼给药24h后冰浴处死,进行HE染色观察肝脏病理变化。采用qPCR和Western Blot法检测成鱼肝脏中固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c),脂肪酸合成酶(FAS),乙酰辅酶A羧化酶(ACC1)以及微粒体甘油三脂转移蛋白(MTP)的mRNA表达和蛋白表达。结果与正常组相比,补骨脂药浴组的斑马鱼幼鱼在2dpf时出现死亡。并且补骨脂对幼鱼的毒性具有一定的浓度依赖性。相同浓度下,醇提`物的毒性大于水提物。HE染色结果可观察到补骨脂醇提和水提给药组的成鱼中肝脏发生脂变,同时给药组的斑马鱼幼鱼匀浆组织液中ALT,AST和LDH含量明显高于空白组。通过qPCR实验发现,补骨脂水提物和醇提物给药组的斑马鱼肝脏中SREBP-1c,FAS,ACC1的表达升高,MTP的表达降低。Western Blot检测结果与qPCR结果一致。结论浓度为300μg/mL和600μg/mL的补骨脂水提物和浓度为40μg/mL和80μg/mL的补骨脂醇提物药浴给药48h会导致斑马鱼的肝脏产生病变,甚至死亡,且机制可能与肝脂变有关。

关键词：斑马鱼补骨脂肝脂变

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以羊脂油制备淫羊藿黄酮自组装胶束对其生物利用度的增效作用研究

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中国药学杂志 2017年第9期52卷 726-730页

作者：侯健李杰孙娥朱灿娟贾晓斌江苏大学药学院江苏镇江212013 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室南京210028 安徽省立医院药剂科合肥230001

目的研究淫羊藿经羊脂油炮制后对黄酮类成分生物利用度的影响。方法采用药理效应法与血药浓度法分别测定淫羊藿总黄酮与淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ的生物利用度。结果淫羊藿黄酮在羊脂油的作用下自组装形成胶束后,淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷和宝... 详细信息

目的研究淫羊藿经羊脂油炮制后对黄酮类成分生物利用度的影响。方法采用药理效应法与血药浓度法分别测定淫羊藿总黄酮与淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ的生物利用度。结果淫羊藿黄酮在羊脂油的作用下自组装形成胶束后,淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ与原形药物相比,ρ_(max)分别提高了77.94%、38.99%和49.90%,AUC_(0-t)分别提高了95.19%、37.76%和43.49%,AUC_(0-∞)分别提高了119.35%、35.37%和46.26%。各药动学参数显示在炮制辅料羊脂油的作用下,淫羊藿活性黄酮自组装形成胶束后,生物利用度显著提高。结论炮制辅料羊脂油提高了淫羊藿黄酮生物利用度,促进了其在体内的吸收。

关键词：淫羊藿黄酮生物利用度羊脂油炙自组装胶束

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蒸三七皂苷类活性组分在大鼠体内代谢产物鉴定的研究

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中国中药杂志 2017年第20期42卷 3996-4001页

作者：申文雯张银仇守蓓朱粉霞贾晓斌汤道权陈斌南京中医药大学第三临床医学院(附属省中西医结合医院)江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室江苏南京210028 徐州医科大学江苏省新药研究与临床药学重点实验室江苏徐州221004

采用超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC-QTOF-MS/MS)分析大鼠灌胃蒸三七正丁醇部位后所得血液、尿液和粪便样品,获取正负离子模式下样品中化学成分的分析数据。样品数据经Peak View软件处理后,根据原型化合物的结... 详细信息

采用超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC-QTOF-MS/MS)分析大鼠灌胃蒸三七正丁醇部位后所得血液、尿液和粪便样品,获取正负离子模式下样品中化学成分的分析数据。样品数据经Peak View软件处理后,根据原型化合物的结构特征以及体内常见代谢方式的准确质量数变化,对代谢产物进行解析。最终利用代谢物的MS/MS信息鉴定了蒸三七正丁醇部位中的4个皂苷代谢原型,即人参皂苷Rh_4,Rk_3,Rk_1,Rg_5及其15个代谢产物。蒸三七正丁醇部位中4个人参皂苷的代谢途径包括葡萄糖醛酸化、脱糖、硫酸化、脱羟甲基化、支链丢失等。该文从定性角度对蒸三七主要活性皂苷类组分在体内的代谢开展了研究,进一步阐明蒸三七在体内发挥药效的物质基础。

关键词：蒸三七正丁醇部位代谢产物鉴定 UPLC-QTOF—-MS/MS 人参皂苷Rh4 Rk3 Rk1 Rg5 转化方式

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益气解毒方对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬作用机制

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中国实验方剂学杂志 2017年第2期23卷 109-114页

作者：孙敏顾俊菲封亮连云港市第二人民医院江苏连云港222006 国家中医药管理局中药释药系统重点研究室南京中医药大学附属中西医结合医院南京210028

目的:研究益气解毒方对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬作用机制。方法:采用DN大鼠模型,观察益气解毒方对DN的治疗作用。采用苏木素伊红(HE)染色法观察给药后DN大鼠肾脏病理变化,透射电镜观察DN大鼠... 详细信息

目的:研究益气解毒方对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬作用机制。方法:采用DN大鼠模型,观察益气解毒方对DN的治疗作用。采用苏木素伊红(HE)染色法观察给药后DN大鼠肾脏病理变化,透射电镜观察DN大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬体情况。采用蛋白免疫印迹法检测肾组织中微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associatedprotein1lightchain 3Ⅱ,MAP1LC3-Ⅱ,LC3-Ⅱ),自噬标志物p62蛋白(sequestosome-1,p62),促凋亡蛋白Nix(Bcl-2/E1B 19 k Da-interacting protein 3-like,Nix)的表达,并应用实时荧光定量PCR测定Nix mRNA的表达。结果:与模型组比较,益气解毒方能够增加DN大鼠体重,改善DN大鼠血尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),血糖(GLU),甘油三酯(TG)及总胆固醇(CHOL),白蛋白(Alb)等血、尿生化指标(P<0.01),并且能抑制由DN导致的肾小管上皮细胞线粒体过度自噬,显著降低LC3-Ⅱ,p62,Nix蛋白的表达(P<0.01),同时降低Nix mRNA的表达(P<0.01)。结论:益气解毒方对DN有较好的治疗效果,这可能与其调节DN肾小管上皮细胞线粒体自噬紊乱有关。

关键词：益气解毒方糖尿病肾病肾小管上皮细胞线粒体自噬

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葛根素对体内外晚期糖基化终末产物形成的抑制作用

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中草药 2017年第7期48卷 1386-1390页

作者：袁媛侯雪峰封亮贾晓斌王永庆南京医科大学第一附属医院江苏南京210029 镇江市第四人民医院药剂科江苏镇江212001 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室江苏南京210028 安徽中医药大学安徽合肥230012

目的研究葛根素对体内外晚期糖基化终末产物(AGEs)形成的影响。方法 C57BL/6小鼠采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(40 mg/kg)构建糖尿病模型。造模成功后随机分为模型组,氨基胍组(100 mg/kg),葛根素低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组... 详细信息

目的研究葛根素对体内外晚期糖基化终末产物(AGEs)形成的影响。方法 C57BL/6小鼠采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(40 mg/kg)构建糖尿病模型。造模成功后随机分为模型组,氨基胍组(100 mg/kg),葛根素低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组,另设对照组。连续给药8周后,检测空腹血糖(FBG)、口服糖耐量(OGTT)、糖化血清蛋白(GSP)及血清AGEs水平。此外将不同浓度的葛根素(0.5、1.0、2.0 mmol/L)与丙酮醛和牛血清白蛋白共孵育144 h,建立体外非酶糖基化反应模型,用荧光光度法测定AGEs的荧光值,考察葛根素体外抑制AGEs生成的规律。结果葛根素能够显著降低糖尿病小鼠的FBG,改善OGTT,抑制GSP及血清AGEs的生成。葛根素在体外非酶糖基化反应体系中抑制AGEs的生成,并有一定的剂量依赖性。结论葛根素可以显著降低糖尿病小鼠的FBG,对体内外AGEs的形成具有明显的抑制作用。

关键词：葛根素非酶糖基化反应晚期糖基化终末产物糖尿病糖化血清蛋白

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原儿茶酸在大鼠体内代谢产物的分析

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中成药 2017年第3期39卷 561-564页

作者：陈家全王慧李冬玉翟小婷朱粉霞中国药科大学分析化学教研室江苏南京210009 南京中医药大学附属中西医结合医院江苏南京210028 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室江苏南京210028

目的分析原儿茶酸在大鼠体内的代谢产物。方法大鼠灌胃原儿茶酸-0.5%羧甲基纤维素钠混悬液后,通过超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)法分析该成分在大鼠血浆、尿液、胆汁、粪便中的代谢产物。结果在大鼠血浆、尿液、胆汁... 详细信息

目的分析原儿茶酸在大鼠体内的代谢产物。方法大鼠灌胃原儿茶酸-0.5%羧甲基纤维素钠混悬液后,通过超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)法分析该成分在大鼠血浆、尿液、胆汁、粪便中的代谢产物。结果在大鼠血浆、尿液、胆汁中,分别发现了9、4、1个原儿茶酸代谢产物,而粪便中未发现。结论原儿茶酸在大鼠体内吸收入血代谢,不经粪便原形排出。

关键词：原儿茶酸代谢产物血浆尿液胆汁粪便大鼠 UPLC-QTOF/MS

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黄蜀葵花中黄酮类化合物抗抑郁活性及其上调大鼠海马组织中BDNF的作用机制研究

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药学学报 2017年第2期52卷 222-228页

作者：蔡红蝶陶伟伟宿树兰郭盛朱悦郭建明钱大玮丛旭东唐仁茂段金廒南京中医药大学江苏省中药资源产业化过程协同创新中心中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心国家中医药管理局中药资源循环利用重点研究室江苏南京210023 南京中医药大学平移系统生物学与神经科学中心/脑疾病综合生物医学实验室基础医学院江苏南京210023 江苏苏中药业集团制药有限公司江苏姜堰225500

黄蜀葵花为中国民间草药,是锦葵科秋葵属黄蜀葵[Abelmoschus manihot(L.)Medic.]的干燥花冠,已报道其具有抗抑郁活性。本文从黄蜀葵花中分离纯化得到主要黄酮类化合物,并探索其中5种化合物抗抑郁活性及其作用机制。采用D101大孔树脂柱... 详细信息

黄蜀葵花为中国民间草药,是锦葵科秋葵属黄蜀葵[Abelmoschus manihot(L.)Medic.]的干燥花冠,已报道其具有抗抑郁活性。本文从黄蜀葵花中分离纯化得到主要黄酮类化合物,并探索其中5种化合物抗抑郁活性及其作用机制。采用D101大孔树脂柱、聚酰胺柱和Sephadex LH-20柱对黄酮类成分进行分离与纯化,经UHPLC与NMR等技术鉴定,得到8个黄酮类化合物,为杨梅素-3-O-β-D-葡糖苷(1)、棉皮素-8-O-β-D-葡糖苷酸(2,G-8-G)、棉皮素-3'-O-β-D-葡糖苷(3)、槲皮素-3'-葡糖苷(4,Q-3-G)、异槲皮苷(5,IQT)、金丝桃苷(6,HY)、杨梅黄酮(7)和槲皮素(8,QT)。采用小鼠分别灌胃化合物2、4、5、6和8(15、30、60 mg·kg^(-1))24 h后,观察悬尾实验(tail suspension test,TST)和强迫游泳实验(forced swimming test,FST),并采用Western blot技术检测小鼠海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸受体激酶B(Trk B)和磷酸化的真核延伸因子2(p-e EF2)的表达。结果表明,化合物2和4能够显著缩短小鼠在FST和TST中的不动时间,显著增加BDNF和Trk B的表达,减少p-e EF2的表达。可见,化合物2和4可上调BDNF表达而发挥其抗抑郁活性。

关键词：锦葵科秋葵属抗抑郁黄酮类化合物脑源性神经营养因子酪氨酸受体激酶B

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牛耳枫提取物的抗炎作用

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中成药 2017年第9期39卷 1771-1776页

作者：宋青朱粉霞李冬玉张浩陈家全西安交通大学第一附属医院妇产科陕西西安710061 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室江苏南京210028 中国药科大学分析化学教研室江苏南京210009

目的研究牛耳枫Daphniphyllum calycinum Benth提取物的体内外抗炎作用及其作用机制。方法以脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7模型和小鼠内毒素血症模型观察牛耳枫提取物对NO、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素IL-1β及IL-10水... 详细信息

目的研究牛耳枫Daphniphyllum calycinum Benth提取物的体内外抗炎作用及其作用机制。方法以脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7模型和小鼠内毒素血症模型观察牛耳枫提取物对NO、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素IL-1β及IL-10水平的影响。MTT法检测牛耳枫提取物对RAW264.7巨噬细胞的毒性。50只雌性BALB/c小鼠灌胃牛耳枫提取物,14 d后小鼠腹腔注射LPS,用Griess和ELISA试剂盒对血清中NO、TNF-α、IL-1β及IL-10水平进行测定,免疫组化法研究小鼠肝脏中NO和TNF-α蛋白的表达。结果牛耳枫提取物可显著抑制NO、TNF-α、IL-1β及IL-10的释放,免疫组化结果显示提取物可抑制一氧化氮合成酶(i NOS)和TNF-α蛋白的表达。结论牛耳枫提取物抗炎作用显著,其机制可能与减少炎症因子的释放有关。

关键词：牛耳枫抗炎脂多糖 RAW264.7巨噬细胞内毒素血症

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基于斑马鱼模型筛选壮骨关节丸毒性药味高效筛选

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世界科学技术-中医药现代化 2017年第1期19卷 133-141页

作者：陈颖王茉景莉君张宁陈书琴韦英杰南京中医药大学第三临床医学院江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室中国人民解放军93038部队医院

目的:采用斑马鱼模型高效筛选壮骨关节丸中有毒性的药味。方法:将受精后1天(1 day post fertilization,1dpf)的斑马鱼胚胎暴露于壮骨关节丸及方中12种药味不同浓度水煎液和醇提液中,观察记录给药后2-6 dpf或2-8 dpf的死亡数量,于3 dpf... 详细信息

目的:采用斑马鱼模型高效筛选壮骨关节丸中有毒性的药味。方法:将受精后1天(1 day post fertilization,1dpf)的斑马鱼胚胎暴露于壮骨关节丸及方中12种药味不同浓度水煎液和醇提液中,观察记录给药后2-6 dpf或2-8 dpf的死亡数量,于3 dpf显微检视斑马鱼幼鱼状态,SPSS软件计算6 dpf的斑马鱼半数致死浓度LC50。结果:斑马鱼暴露于壮骨关节丸及补骨脂、续断、乳香没药、独活和木香的水、醇提取液,以及鸡血藤和狗脊的醇提液毒性较大,致鱼卵黄囊肿大、变形或变黑,提示与肝毒相关,6 dpf鱼的LC50为33.2-392.7μg·m L-1(已折算为生药量,下同);淫羊藿水、醇提取液均在1 500μg·m L-1致鱼卵黄囊肿大、变黑,LC50为1 100-1 350μg·m L-1,有一定毒性;鸡血藤和狗脊的水煎液,以及骨碎补、桑寄生和熟地黄的水、醇提取液未致鱼脏器明显改变,LC50大于1 500μg·m L-1,故安全性较好。结论:斑马鱼模型高效辨识了壮骨关节丸不同药味毒性差异,可实现复杂中药中潜在毒性物质的在体、实时、动态、规模化的高效筛选。

关键词：壮骨关节丸斑马鱼毒性药味肝毒性

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二至丸抗氧化活性与抑制斑马鱼骨质疏松作用研究

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海峡药学 2017年第11期29卷 12-15页

作者：陈吴越陈颖栾会玲韦英杰南京师范大学附属中学南京210003 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药口服释药系统重点研究室南京210028 中国药科大学中药药理教研室南京211198

目的研究二至丸(EZW)提取物的体外抗氧化活性和抑制斑马鱼骨质疏松的作用。方法通过体外实验测定EZW对DPPH·及羟基自由基的清除作用以考察其抗氧化活性。建立泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松的模型,进一步考察EZW对斑马鱼骨质疏松的改... 详细信息

目的研究二至丸(EZW)提取物的体外抗氧化活性和抑制斑马鱼骨质疏松的作用。方法通过体外实验测定EZW对DPPH·及羟基自由基的清除作用以考察其抗氧化活性。建立泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松的模型,进一步考察EZW对斑马鱼骨质疏松的改善作用。结果EZW均能有效清除DPPH和羟基自由基,呈浓度依赖性,其中对DPPH自由基的清除力最强。泼尼松龙模型组斑马鱼头部骨骼染色面积和染色光密度值均比溶媒对照组明显减少;与模型组比较,EZW 6.25μg生药/m L组和依替膦酸二钠组均能显著抑制泼尼松龙诱导的斑马鱼头部骨骼染色面积和累计光密度值的下降。结论 EZW具有显著的体外抗氧化活性和抑制泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松的作用,进一步验证了斑马鱼骨质疏松模型的高效及可操作性强的优势。

关键词：二至丸抗氧化泼尼松龙斑马鱼骨质疏松

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