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南京中医药大学学报 2019年第2期35卷 199-204页

作者：史悦华范汇森刘晓肖平沈卫星程海波孙东东东南大学附属中大医院江苏南京210009 江苏省中医药防治肿瘤协同创新中心国家中医药管理局名医验方评价与转化重点研究室江苏南京210023 南京中医药大学药学院江苏南京210023 南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

目的探讨黄连-乌梅药对与消癌解毒方水煎液中部分生物碱类成分的含量差异,并比较药对与全方对小鼠肠道菌群的影响。方法采用Extend-C18(100mm×2.1mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)进行梯度洗脱,流速0.3mL/min,柱温35℃,... 详细信息

目的探讨黄连-乌梅药对与消癌解毒方水煎液中部分生物碱类成分的含量差异,并比较药对与全方对小鼠肠道菌群的影响。方法采用Extend-C18(100mm×2.1mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)进行梯度洗脱,流速0.3mL/min,柱温35℃,进样量2μL;离子化模式为电喷雾离子化(ESI),以正离子模式检测,开展方法学验证和含量测定研究。按照给药不同将小鼠分为正常组、全方高浓度组、全方低浓度组、药对高浓度组和药对低浓度组,连续灌胃给药7d,每组分别收集粪便样本,进行16S rRNA基因测序。结果建立的含量测定方法在一定浓度范围内线性关系良好,方法学验证结果均符合相关要求,木兰花碱与非洲防己碱在黄连、药对以及全方中的含量分别为:(4.433±0.133)(8.905±0.154)mg/g,(3.545±0.033)(9.170±0.051)mg/g,(5.287±0.038)(13.861±0.690)mg/g。全方组和药对组中拟杆菌门Bacteroides的丰度均高于正常组,而全方组和药对组中厚壁菌门Firmicutes的丰度均低于正常组。药对高浓度组中的疣微菌门Verrucomicrobia和变形菌门Proteobacteria的丰度高于其他组。结论液质联用方法和相关参数简便、可靠,可用于有关成分的含量检测。与单味药中含量相比,经过药对配伍后,非洲防己碱含量增加,而木兰花碱含量则略有降低;经过全方配伍后,2种成分的含量均增加。此外,肠道菌群实验表明无论是药对还是全方在给药后,会不同程度地影响肠道菌群内部占比改变,其可能对调节肠道系统平衡,具有一定帮助作用,从而为进一步阐释黄连-乌梅在消癌解毒方中配伍机制提供了参考和依据。

关键词：黄连-乌梅配伍肠道菌群 16S rRNA基因测序含量测定

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基于ROS/NF-κB信号通路的天南星凝集素致炎机制及炮制对蛋白的影响

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中华中医药杂志 2018年第5期33卷 1740-1746页

作者：王卫毛善虎单雪莲程梓烨陈云郁红礼吴皓南京中医药大学药学院南京210023 江苏省中药炮制重点实验室南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210023 国家中医药管理局中药炮制传承基地南京210023

目的:研究天南星科有毒中药天南星凝集素蛋白(AEL)的致炎机制及炮制对蛋白的影响。方法:通过体外培养RAW264.7巨噬细胞,经不同浓度AEL刺激1h后,ELISA法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放,Western blot... 详细信息

目的:研究天南星科有毒中药天南星凝集素蛋白(AEL)的致炎机制及炮制对蛋白的影响。方法:通过体外培养RAW264.7巨噬细胞,经不同浓度AEL刺激1h后,ELISA法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放,Western blot法检测p-IκB、IκB、p-p65、p65蛋白的表达,倒置荧光显微镜及荧光酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位及胞内游离钙离子水平;加入ROS的阻断剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)后,采用ELISA和Western blot法检测TNF-α、IL-1β及p-IκB、IκB、p-p65、p65蛋白表达的变化。采用8%白矾溶液炮制AEL,ELISA法检测炮制前后炎性因子TNF-α、IL-1β释放的变化。结果:AEL刺激巨噬细胞可导致炎性因子TNF-α、IL-1β大量释放,促进p-IκB、p-p65水平升高,导致巨噬细胞中ROS水平升高,线粒体膜电位降低以及胞内游离钙离子水平升高。当加入ROS的阻断剂NAC后,可明显降低ROS的生成,同时抑制了IκB、p65的磷酸化以及炎性因子TNF-α、IL-1β的大量释放。AEL经8%白矾溶液炮制后,能显著降低巨噬细胞炎性因子TNF-α、IL-1β的大量释放。结论:AEL刺激巨噬细胞后可诱导氧化应激,生成过量ROS,进而激活NF-κB炎性信号通路并导致炎性因子大量释放。AEL经白矾炮制后毒性降低,推测凝集素蛋白在白矾溶液中发生变性或降解,这可能是矾制天南星减毒的机制之一。

关键词：天南星凝集素炮制减毒炎性反应活性氧核因子-κB

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决明子药理作用及其机制研究进展

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中药材 2018年第5期41卷 1247-1251页

作者：杨冰任娟秦昆明金俊杰郑艳萍蔡宝昌南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210046 南京海源中药饮片有限公司/江苏海昇药业有限公司江苏南京210061

决明子为临床常用中药,具有广泛的药理作用。该文主要就决明子降血压、降血脂、保肝、明目、抗氧化、抑菌等药理作用及作用机制方面的研究现状进行总结,并对决明子的应用前景进行了展望,目的是为深入研究决明子提供参考。

关键词：决明子药理作用机制

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基于ROS-MAPKs/NF-κB和NLRP3信号通路的掌叶半夏凝集素促炎机制研究

基于ROS-MAPKs/NF-κB和NLRP3信号通路的掌叶半夏凝集素促炎机制...

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中华中医药学会中药炮制分会2018年学术年会

作者：郁红礼王卫毛善虎吴皓单雪莲张元斌南京中医药大学药学院江苏省中药炮制重点实验室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心国家中医药管理局中药炮制传承基地江苏南京210023

天南星科有毒中药掌叶半夏具有强烈的促炎毒性,且促炎作用与其含有的凝集素(Pinellia pedatisecta lectin,PPL)密切相关.本论文主要研究PPL的促炎及致焦亡作用,研究结果显示PPL能够导致线粒体膜电位(MMP)的降低以及钙离子的升高,同时wes... 详细信息

天南星科有毒中药掌叶半夏具有强烈的促炎毒性,且促炎作用与其含有的凝集素(Pinellia pedatisecta lectin,PPL)密切相关.本论文主要研究PPL的促炎及致焦亡作用,研究结果显示PPL能够导致线粒体膜电位(MMP)的降低以及钙离子的升高,同时western-blot结果显示伴随活性氧(ROS)的过量生成,进而导致炎症相关MAPK和NF-κB信号通路的活化以及炎症因子IL-1β的释放.PPL也能够活化NLRP3炎性小体,表现为TXNIP的表达下调以及NLRP3/caspase-1β20/ASC的表达上调,同时,激光扫描共聚焦和免疫共沉淀实验结果显示,PPL能够导致TXNIP与NLRP3的结合,以及NLRP3与ASC和caspase-1的结合,表明NLRP3炎症信号通路被活化.此外,ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)可以抑制PPL导致的炎症信号通路的活化和IL-1β的释放.进一步研究发现,PPL能够导致细胞焦亡,且这一现象同样能够被NAC抑制.综上结果表明,PPL能够导致ROS-MAPKs/NF-κB和NLRP3炎症信号通路的活化,且这种作用与其诱导活性氧ROS的大量生成密切相关,表明ROS在PPL导致的炎症中发挥重要作用.

关键词：掌叶半夏凝集素 ROS MAPK和NF-κB/NLRP3通路 IL-1β 细胞焦亡

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山茱萸炮制过程中美拉德反应底物的含量变化

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食品与生物技术学报 2017年第8期36卷 884-889页

作者：杨光明张玉玲李萌潘扬蔡宝昌南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023

采用UPLC-MS/MS法检测游离氨基酸含量,色谱柱以键合相C18硅胶为基质,流动相为水-乙腈,梯度洗脱,流速0.8 m L/min;采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定还原糖含量,研究山茱萸炮制过程中参与美拉德反应的底物游离氨基酸和还原糖质量分数... 详细信息

采用UPLC-MS/MS法检测游离氨基酸含量,色谱柱以键合相C18硅胶为基质,流动相为水-乙腈,梯度洗脱,流速0.8 m L/min;采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定还原糖含量,研究山茱萸炮制过程中参与美拉德反应的底物游离氨基酸和还原糖质量分数的变化规律。山茱萸中共检测出15种游离氨基酸。各游离氨基酸的质量分数随着炮制时间的延长逐渐降低;还原糖质量分数在炮制中趋势不同于氨基酸,在炮制0~24 h逐渐降低,24~36 h还原糖质量分数有所上升,36 h后其质量分数变化趋于稳定。山茱萸中游离氨基酸和还原糖质量分数的变化与炮制中的美拉德反应密切相关,美拉德反应达到平衡时间与传统的炮制时间基本一致,这为炮制终点的判定提供了科学依据。

关键词：山茱萸炮制美拉德反应游离氨基酸还原糖

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基于ROS/NF-κB信号通路的天南星凝集素致炎机制及炮制对蛋白的影响

基于ROS/NF-κB信号通路的天南星凝集素致炎机制及炮制对蛋白的影...

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第九届全国中医药博士生学术论坛

作者：王卫毛善虎单雪莲程梓烨陈云郁红礼吴皓南京中医药大学药学院南京210023 南京中医药大学药学院南京210023 江苏省中药炮制重点实验室南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210023 国家中医药管理局中药炮制传承基地南京210023

目的：研究天南星科有毒中药天南星凝集素蛋白(AEL)的致炎机制及炮制对蛋白的影响. 方法：通过体外培养RAW264.7巨噬细胞,经不同浓度AEL刺激1h后,ELISA法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放,Western ... 详细信息

目的：研究天南星科有毒中药天南星凝集素蛋白(AEL)的致炎机制及炮制对蛋白的影响. 方法：通过体外培养RAW264.7巨噬细胞,经不同浓度AEL刺激1h后,ELISA法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放,Western blot法检测p-IκB、IκB、p-p65、p65蛋白的表达,倒置荧光显微镜及荧光酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位及胞内游离钙离子水平;加入ROS的阻断剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)后,采用ELISA和Western blot法检测TNF-α、IL-1β及p-IκB、IκB、p-p65、p65蛋白表达的变化.采用8％白矾溶液炮制AEL,ELISA法检测炮制前后炎性因子TNF-α、IL-1β释放的变化. 结果：AEL刺激巨噬细胞可导致炎性因子TNF-α、IL-1β大量释放,促进p-IκB、p-p65水平升高,导致巨噬细胞中ROS水平升高,线粒体膜电位降低以及胞内游离钙离子水平升高.当加入ROS的阻断剂NAC后,可明显降低ROS的生成,同时抑制了IκB、p65的磷酸化以及炎性因子TNF-α、IL-1β的大量释放.AEL经8％白矾溶液炮制后,能显著降低巨噬细胞炎性因子TNF-α、IL-1β的大量释放. 结论：AEL刺激巨噬细胞后可诱导氧化应激,生成过量ROS,进而激活NF-κB炎性信号通路并导致炎性因子大量释放.AEL经白矾炮制后毒性降低,推测凝集素蛋白在白矾溶液中发生变性或降解,这可能是矾制天南星减毒的机制之一.

关键词：天南星凝集素蛋白致炎机制活性氧核因子-κB 白矾炮制毒性作用

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异甘草素共晶的热力学研究

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中国新药杂志 2017年第18期26卷 2225-2229页

作者：黄雨婷迟宗良秦昆明范孟雪胡静蔡宝昌蔡挺南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室南京海昌中药集团有限公司江苏省企业研究生工作站中国药科大学

目的:探究异甘草素共晶在异丙醇溶剂中的形成热力学。方法:以异甘草素-烟酰胺及异甘草素-异烟酰胺共晶为模型,通过测定303K下异甘草素、烟酰胺及异烟酰胺在异丙醇中的溶解度,计算溶剂中共晶的溶度积和络合常数,并绘制出异甘草素-烟酰胺... 详细信息

目的:探究异甘草素共晶在异丙醇溶剂中的形成热力学。方法:以异甘草素-烟酰胺及异甘草素-异烟酰胺共晶为模型,通过测定303K下异甘草素、烟酰胺及异烟酰胺在异丙醇中的溶解度,计算溶剂中共晶的溶度积和络合常数,并绘制出异甘草素-烟酰胺及异甘草素-异烟酰胺三元相图。结果:2种异甘草素共晶在异丙醇中均符合1∶1溶液络合模型,但2种共晶体系在该条件下的三元相图有较大差异,异甘草素-烟酰胺共晶三相图的共晶区域偏离化学计量比线。常规方法不利于异甘草素共晶的形成。结论:共晶制备方法的优选具有参考意义。

关键词：共晶异甘草素烟酰胺异烟酰胺热力学

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镰形棘豆对SMMC-7721细胞线粒体膜电位和凋亡相关蛋白表达的影响

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南京中医药大学学报 2017年第1期33卷 54-58页

作者：陈晓红程海清邓易杨光明潘扬南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 青海大学医学院青海西宁810001 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023

目的研究藏药镰形棘豆对SMMC-7721人肝癌细胞活性、线粒体膜电位,细胞色素C(Cyt C)及Caspase-3蛋白表达的影响与细胞凋亡的关系。方法以镰形棘豆总黄酮0.05、0.075、0.1g/L处理肝癌细胞SMMC-7721,24h后观察细胞的生长状况;镰形棘豆总黄... 详细信息

目的研究藏药镰形棘豆对SMMC-7721人肝癌细胞活性、线粒体膜电位,细胞色素C(Cyt C)及Caspase-3蛋白表达的影响与细胞凋亡的关系。方法以镰形棘豆总黄酮0.05、0.075、0.1g/L处理肝癌细胞SMMC-7721,24h后观察细胞的生长状况;镰形棘豆总黄酮作用于SMMC-7721细胞后,流式细胞仪检测细胞总体凋亡率和线粒体膜电位,Western blot检测对凋亡相关蛋白Cyt C及Caspase-3表达的影响。结果结果表明,镰形棘豆总黄酮抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长,呈浓度依赖关系;镰形棘豆作用后可观察到凋亡细胞的比例升高;可导致细胞的线粒体跨膜电位明显降低,与药物浓度呈负相关。中、高剂量组的细胞中Cyt C及Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论镰形棘豆总黄酮诱导SMMC-7721细胞的凋亡可能是通过线粒体途径,并且与影响Cyt C及Caspase-3的表达有关。为镰形棘豆抗肿瘤的作用机制的实验和临床研究提供依据。

关键词：镰形棘豆 SMMC-7721 线粒体膜电位细胞色素C Caspase-3 蛋白表达

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女贞子生品及炮制品的HPLC指纹图谱研究

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中草药 2016年第5期47卷 760-766页

作者：杨光明陈晓红刘路陆兔林蔡宝昌南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 青海大学医学院青海西宁810001

目的建立女贞子生品及其炮制品的HPLC指纹图谱。方法采用Purospher®STAR RP18 Endcapped(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长282 nm,柱温25℃;采用《中药色谱指纹图谱相... 详细信息

目的建立女贞子生品及其炮制品的HPLC指纹图谱。方法采用Purospher®STAR RP18 Endcapped(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长282 nm,柱温25℃;采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.130723版)软件进行分析。结果优化了HPLC色谱条件,在女贞子生品及其炮制品的谱图中分别标定了19个共有指纹特征峰,确定了红景天苷、女贞苷、特女贞苷、橄榄苦苷、oleonuezhenide 5个化合物,建立了10个不同批次的女贞子生品及炮制品HPLC指纹图谱,相似度高。结论该方法快速、简便、准确,符合指纹图谱技术要求,可作为控制女贞子质量的分析方法。

关键词：女贞子制女贞子指纹图谱 HPLC 质量评价

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药物共晶筛选技术的研究进展

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国际药学研究杂志 2016年第4期43卷 682-687页

作者：黄雨婷徐嘉迟宗良范孟雪秦昆明蔡挺蔡宝昌南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210023 国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室南京210023 中国药科大学南京210009 南京海昌中药集团有限公司江苏省企业研究生工作站南京210061

近年来,药物共晶筛选技术成为改善药物溶解度、稳定性等性质的研究热点。该技术不改变药物分子结构,只是通过分子间作用力改变药物的理化性质,为难溶性药物的研发提供了新途径。共晶是具有新特性的药物组合,可获得知识产权。本文综述了... 详细信息

近年来,药物共晶筛选技术成为改善药物溶解度、稳定性等性质的研究热点。该技术不改变药物分子结构,只是通过分子间作用力改变药物的理化性质,为难溶性药物的研发提供了新途径。共晶是具有新特性的药物组合,可获得知识产权。本文综述了药物共晶筛选技术,为药物共晶的深入研发提供参考。

关键词：药物共晶筛选技术

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