检索结果-内蒙古大学图书馆

南京中医药大学学报 2022年第12期38卷 1110-1115页

作者：刘欢欢张婷王敏于银萍苏联麟季德陆兔林李林南京中医药大学药学院江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

目的建立一种基于补血活性的生物学评价方法,通过与当归的主要药效相关联,对其内在品质进行评价。方法以氯化血红素为标准品,用联苯胺染色法测定当归作用于K562细胞后的血红蛋白含量,通过量反应平行线测定法计算效价,完成方法学考察并... 详细信息

目的建立一种基于补血活性的生物学评价方法,通过与当归的主要药效相关联,对其内在品质进行评价。方法以氯化血红素为标准品,用联苯胺染色法测定当归作用于K562细胞后的血红蛋白含量,通过量反应平行线测定法计算效价,完成方法学考察并以此比较不同产地、不同炮制方法当归饮片的效价。结果当归样品可靠性检验显示,回归项有显著差异(P<0.01);方法学考察中重复性和精密度RSD分别为1.13%、4.73%;不同产地当归饮片补血效价为399.61~8920.32 U·mg^(-1),不同炮制方法当归饮片补血效价排序为生当归>土炒当归>酒当归,不同入药部位当归饮片补血效价排序为当归身>当归头>当归须。结论所建立的当归饮片补血生物效价方法稳定可靠,方法学考察结果符合《中国药典》2020年版“中药生物活性测定指导原则”相关要求,可用于不同产地、不同炮制方法、不同入药部位的当归饮片补血疗效的评价,为进一步完善当归质量评价与控制提供了新思路和新方法。

关键词：当归补血活性生物效价血红蛋白

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补骨脂炮制前后水煎液致雌性ICR小鼠胆汁瘀积性肝损伤作用比较

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中草药 2022年第5期53卷 1434-1441页

作者：符映均吴育梅春梅华政颖李伟东南京中医药大学南通附属医院药剂科江苏南通226000 南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

目的探讨补骨脂炮制前后致雌性ICR小鼠胆汁瘀积性肝损伤的差异。方法采用高效液相色谱仪检测补骨脂炮制前后化学成分含量变化。雌性ICR小鼠连续30 d ig生、盐补骨脂水煎液,末次给药24 h后,取血清,采用全自动生化仪检测肝损伤相关指标丙... 详细信息

目的探讨补骨脂炮制前后致雌性ICR小鼠胆汁瘀积性肝损伤的差异。方法采用高效液相色谱仪检测补骨脂炮制前后化学成分含量变化。雌性ICR小鼠连续30 d ig生、盐补骨脂水煎液,末次给药24 h后,取血清,采用全自动生化仪检测肝损伤相关指标丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和总胆红素(total bilirubin,TBIL)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)、总胆汁酸(total bile acid,TBA)水平;取肝脏、脾脏和肾脏,称定质量并计算脏器指数,采用苏木素-伊红(HE)染色法进行肝脏病理组织学检查;采用ELISA法检测血清中雌二醇(estradiol,E2)、促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)以及肝脏中法尼醇受体(farnesoid X receptor,FXR)、雌激素硫酸转移酶1E1(sulfotransferase 1E1,SULT1E1)和E2含量。结果补骨脂经盐炙后补骨脂苷、异补骨脂苷、新补骨脂异黄酮含量下降,其余8种成分含量均升高,其中补骨脂素、异补骨脂素、corylifol A升高较为明显。雌性小鼠ig生、盐补骨脂水煎液30 d后出现生殖器损伤,小鼠阴道口红肿,有水样浸润。与对照组比较,生、盐补骨脂组小鼠血清ALT、AST、ALP活性及DBIL、TBIL、TBA水平均显著升高(P<0.05、0.01、0.001),盐炙后补骨脂致肝损伤较生品更严重;肝脏FXR、SULT1E1含量显著降低(P<0.01、0.001),血清E2、FSH、IL-6和肝脏E2含量均显著升高(P<0.05、0.01、0.001)。盐补骨脂与生补骨脂比较,IL-6升高更明显,FXR、SULT1E1下降更明显。结论补骨脂素、异补骨脂素和Corylifol A可能是补骨脂药效成分同时也可能是其主要毒性成分,盐补骨脂较生补骨脂更易造成肝损伤。

关键词：补骨脂盐炙胆汁瘀积性肝损伤雌激素样作用补骨脂素异补骨脂素 corylifol A 补骨脂苷异补骨脂苷新补骨脂异黄酮

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黄芪和蜜炙黄芪中糖类组分和非糖类组分的差异性研究

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中草药 2023年第5期54卷 1586-1596页

作者：赵婷婷裴科于子涵曹岗李慧峰孔祥鹏张朔生孙琳刘玉杰蔡皓山西中医药大学中药与食品工程学院中药炮制山西省重点实验室山西晋中030619 南京中医药大学药学院国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 浙江中医药大学药学院中药炮制研究中心浙江杭州131005 山西中医药大学中药与食品工程学院山西省现代中药工程实验室山西晋中030619

目的比较研究黄芪蜜炙后多糖、单糖、寡糖及非糖类小分子成分的整体变化。方法结合糖组学和代谢组学,运用超高效液相-二极管阵列检测器(ultra high performance liquid-photodiode array detector,UPLC-PDA)、高效液相-蒸发光散射检测器... 详细信息

目的比较研究黄芪蜜炙后多糖、单糖、寡糖及非糖类小分子成分的整体变化。方法结合糖组学和代谢组学,运用超高效液相-二极管阵列检测器(ultra high performance liquid-photodiode array detector,UPLC-PDA)、高效液相-蒸发光散射检测器(ultra high performance liquid-evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)、高效凝胶渗透色谱-蒸发光散射检测器(high performance gel permeation chromatography-evaporative light scattering detector,HPGPC-ELSD)和超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(ultra high performance liquid chromatography-quadrupole/electrostatic field orbit-trap high resolution mass spectrometr,UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)等对黄芪和蜜炙黄芪的多糖、单糖、寡糖以及非糖小分子组分进行分析。结果黄芪和蜜炙黄芪中均可以找到3种相对分子质量的多糖,但3种多糖的重均相对分子质量、相对分子质量分布以及3种多糖各自的占比存在差异。黄芪和蜜炙黄芪多糖均含有甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖7种单糖,但两者物质的量比稍有不同(黄芪vs蜜炙黄芪=0.70∶0.20∶0.85∶5.67∶0.44∶2.04∶0.32 vs 0.79∶0.15∶0.73∶7.10∶0.31∶1.71∶0.35)。在黄芪和蜜炙黄芪中均能检测到寡糖蔗糖,蜜炙后蔗糖含量显著下降(P<0.01)。黄芪和蜜炙黄芪均含有游离单糖果糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖醛酸和岩藻糖,蜜炙黄芪中的果糖、甘露糖、葡萄糖含量均显著高于黄芪(P<0.05、0.01),而半乳糖醛酸的含量显著低于黄芪(P<0.05),岩藻糖含量在黄芪蜜炙后无显著变化。从黄芪和蜜炙黄芪中共筛选出20个差异性非糖小分子成分,主要为皂苷类和黄酮类成分。代表性成分定量分析表明,与黄芪相比,蜜炙黄芪中的黄酮类成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花苷的含量显著降低(P<0.05、0.01),皂苷类成分黄芪甲苷含量显著增加(P<0.01)。呋喃醛衍生物5-羟甲基糠醛在黄芪中未检测到,在蜜炙黄芪中的含量显著升高(P<0.001)。结论黄芪和蜜炙黄芪的糖类组分与非糖类组分存在显著差异,这可能是造成黄芪蜜炙后补中益气功效增强的主要原因。

关键词：黄芪蜜炙黄芪代谢组学糖组学毛蕊异黄酮葡萄糖苷芒柄花素 5-羟甲基糠醛

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润目灵护眼液治疗苯扎氯铵诱导的干眼症及其作用机制研究

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南京中医药大学学报 2023年第1期39卷 70-78页

作者：宋健涛刘鑫祁兴华张巧陈忆菁朱慧裴科段煜蔡皓南京中医药大学药学院江苏南京210023 南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 南京中医药大学网络管理与信息化办公室江苏南京210023 山西中医药大学中药与食品工程学院山西晋中030619

目的探究润目灵护眼液经超声雾化机雾化后对过度蒸发性干眼症的治疗效果及作用机制。方法16只新西兰兔随机分为空白对照组、模型组、原方组和考察组,每组4只,采用苯扎氯铵滴眼法诱导过度蒸发性兔干眼症模型,经超声雾化机给予润目灵护眼... 详细信息

目的探究润目灵护眼液经超声雾化机雾化后对过度蒸发性干眼症的治疗效果及作用机制。方法16只新西兰兔随机分为空白对照组、模型组、原方组和考察组,每组4只,采用苯扎氯铵滴眼法诱导过度蒸发性兔干眼症模型,经超声雾化机给予润目灵护眼液,通过检测兔眼泪液的分泌量、泪膜的破裂时间和角膜的荧光染色,以评价润目灵组方对兔干眼症模型的干预作用。免疫荧光染色法检测兔眼结膜黏蛋白-5亚型AC(MUC5AC)的表达情况;在光学显微镜下观察兔眼角膜和结膜的病理情况;ELISA法检测兔眼泪腺和房水中TNF-α和IL-6的含量。Western blot法检测兔眼角膜中JNK/P38通路以及MMP-9和MUC5AC蛋白的表达水平,以评价润目灵护眼液对兔干眼症模型的治疗作用。结果经HPLC测定,原方组中绿原酸、金丝桃苷、木犀草苷的浓度分别为0.12363、0.01725、0.09583 mg·mL^(-1)。通过优化提取工艺,考察组中绿原酸、金丝桃苷、木犀草苷的含量显著提升,浓度分别为0.22518、0.04211、0.18310 mg·mL^(-1)。与模型组相比,原方组与考察组兔眼泪液的分泌量增加(P<0.05),兔眼泪膜的稳定性增强(P<0.05),且考察组泪液分泌量高于原方组(P<0.05);与模型组相比,原方组与考察组兔眼结膜中的MUC5AC表达水平升高(P<0.05),且考察组中被MUC5AC抗体染色的结膜细胞多于原方组(P<0.05);与模型组相比,原方组与考察组中兔眼角膜及结膜中的上皮细胞得到修复,兔眼泪腺和房水中的炎症因子含量降低(P<0.01),且考察组房水中IL-6的表达水平低于原方组(P<0.05);与模型组相比,原方组与考察组兔眼角膜中的JNK/P38通路相关蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)、MUC5AC表达水平升高(P<0.05,P<0.01)以及MMP-9表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。同时,与原方组相比,考察组兔眼角膜中的P-P38/P38、P-P65/P65、MMP-9以及MUC5AC的改善效果更加明显(P<0.05)。结论干眼症的发病机制可能与炎症通路具有相关性,其中润目灵方中含有的金丝桃苷、木犀草苷以及绿原酸等成分可以增加兔眼泪液的分泌量,维持泪膜的稳定性,并有效改善眼表的损伤和抑制眼表炎症的表达,从而达到治疗干眼症的效果。

关键词：干眼症润目灵护眼液炎症反应黏蛋白炎症细胞因子

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甘草汁炮制半夏对毒性成分凝集素蛋白的影响

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中华中医药杂志 2023年第5期38卷 2245-2250页

作者：陶兴宝曹纬国吴皓重庆中医药学院中药系重庆402760 重庆中医药学院博士后工作站重庆400011 南京中医药大学药学院南京210023 江苏省中药炮制重点实验室南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210023

目的:研究法半夏炮制过程中炮制辅料甘草汁浸泡对其毒性成分凝集素蛋白的影响。方法:以WesternBlot法考察甘草汁(醇沉上清液、醇沉沉淀、甘草酸溶液)浸泡对凝集素蛋白含量的影响。采用SDS-PAGE法结合银染技术测定甘草汁及甘草酸溶液浸... 详细信息

目的:研究法半夏炮制过程中炮制辅料甘草汁浸泡对其毒性成分凝集素蛋白的影响。方法:以WesternBlot法考察甘草汁(醇沉上清液、醇沉沉淀、甘草酸溶液)浸泡对凝集素蛋白含量的影响。采用SDS-PAGE法结合银染技术测定甘草汁及甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后上清液与沉淀中的蛋白组成;以MALDITOF MS/MS技术检测甘草汁及甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后上清液及沉淀中肽段分子量分布;以等电点沉淀法测定凝集素蛋白等电点,并测定其Zeta电位变化考察甘草汁及甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后对其等电点的影响;同时,采用透射电镜观察甘草汁及甘草酸溶液浸泡对凝集素蛋白聚合作用的影响。结果:甘草汁、甘草汁醇沉上清液及甘草酸溶液浸泡均可使凝集素蛋白含量显著降低(P<0.05)。甘草汁及甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后的上清液和沉淀均在12 kDa位置出现凝集素蛋白对应的条带,且上清液对应的凝集素蛋白条带与沉淀对应的凝集素蛋白条带相比明显变浅。凝集素蛋白的等电点pH约为5~6,甘草汁及甘草酸溶液的pH分别为5.25、5.62。甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后其Zeta电位接近于0,达到等电点而沉淀。甘草汁、甘草酸溶液及甘草汁石灰水共同浸泡凝集素蛋白后出现大量聚集体,形成超分子自组装复合物结构而加速其沉淀。结论:甘草汁在法半夏炮制过程中解毒机制为甘草汁中甘草酸浸泡凝集素蛋白可使其达到等电点,促进其超分子自组装,改变溶解度而沉淀。甘草汁与石灰水在炮制过程中以协同作用形成超分子自组装复合物而解毒。

关键词：半夏甘草汁凝集素蛋白炮制解毒机理

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狼毒(月腺大戟)主要萜类效应成分模拟醋制前后对巨噬细胞致炎毒性及肾脏细胞AQPs表达的差异研究

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南京中医药大学学报 2023年第3期39卷 238-247页

作者：张元斌郁红礼刘冰冰吴皓崔小兵刘璐袁媛李锦飞南京中医药大学药学院江苏南京210023 宁波市第一医院药学部浙江宁波315010 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

目的探究狼毒效应部位中主要萜类成分模拟醋制前后毒、效作用变化,阐释狼毒醋制解毒存效的机制,探寻狼毒醋品质量标志物。方法将狼毒萜类成分Eupractenoid A(EA)、Jolkinolide B(JNB)、Fischeria A(FA)采用模拟醋制法在160℃加6%冰醋酸... 详细信息

目的探究狼毒效应部位中主要萜类成分模拟醋制前后毒、效作用变化,阐释狼毒醋制解毒存效的机制,探寻狼毒醋品质量标志物。方法将狼毒萜类成分Eupractenoid A(EA)、Jolkinolide B(JNB)、Fischeria A(FA)采用模拟醋制法在160℃加6%冰醋酸加热40 min,以Western blot法分析3种萜类成分醋制前后对巨噬细胞RAW264.7中TNF-α和IL-1β蛋白表达水平影响的差异;以Western blot法分析3种萜类成分醋制前后对肾小管上皮细胞HK-2中AQP1及肾集合管上皮细胞mIMCD3中AQP2、3、4蛋白表达水平影响的差异。结果EA、JNB、FA可诱导巨噬细胞炎症因子TNF-α和IL-1β蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。EA、JNB、FA醋制后致炎毒性均显著下降。EA主要转化产物Euphebracteolatin A(EHTA)无明显促炎毒性。药效评价显示,EA及其模拟醋制产物可显著抑制AQP1、3、4蛋白表达(P<0.05),EA醋制后对AQP1、2、4蛋白表达的抑制作用显著增强(P<0.05)。EHTA对肾细胞AQP1、2、3蛋白表达的抑制作用显著强于EA(P<0.05),对AQP4蛋白表达的抑制作用与EA相比无显著性差异,表明EA醋制可增强药效。JNB可显著抑制AQP1、3蛋白表达(P<0.05)。其模拟醋制产物可显著抑制AQP1、2、3、4蛋白表达,且JNB醋制后对AQP2、3、4蛋白表达的抑制作用显著增强(P<0.05),表明JNB醋制后药效增强。FA醋制后对AQPs调节作用显著降低(P<0.05),但高剂量组仍起作用。结论狼毒主要萜类效应成分经模拟醋制后致炎毒性减弱,但醋制后药效总体呈现增强或保留。同时EA转化产物EHTA无明显促炎毒性,药效作用强于其转化前体EA,可作为狼毒醋制品质量控制指标。

关键词：狼毒萜类成分模拟醋制解毒存效促炎 AQPs

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基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS和整合网络药理学的川芎酒制后增强抗脑缺血损伤作用机制分析

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中国实验方剂学杂志 2022年第12期28卷 164-173页

作者：裴科宁燕蔡皓曹丽珑赵婷婷于子涵曹岗王颖莉张朔生山西中医药大学中药与食品工程学院山西省现代中药工程实验室山西晋中030619 浙江中医药大学药学院中药炮制研究中心杭州310053 南京中医药大学药学院国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210023

目的:分析川芎酒制前后水提物中差异性成分,探讨川芎酒制增强抗脑缺血损伤的分子作用机制。方法:采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS),基于化合物质谱信息并结合对照品、参考文献比对,定性分析... 详细信息

目的:分析川芎酒制前后水提物中差异性成分,探讨川芎酒制增强抗脑缺血损伤的分子作用机制。方法:采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS),基于化合物质谱信息并结合对照品、参考文献比对,定性分析川芎水提物的主要化学成分,采用化学模式识别方法筛选川芎酒制前后的差异性成分。基于此,通过在线数据库对差异化合物的潜在靶点进行预测,搜索脑缺血疾病相关靶点。运用Cytoscape 3.6.0建立川芎酒制前后差异成分-作用靶点-疾病网络图;使用STRING 11.5构建交集靶点蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;通过DAVID 6.8对差异性成分抗脑缺血的潜在靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;同时,将相对含量较高且酒制后峰面积升高的化合物与其对应靶点进行分子对接,以验证酒制增效机制。结果:从川芎中共鉴定出71个化学成分,筛选出34个差异性成分,对应潜在靶点603个,与769个疾病靶点做交集后共得到60个交集靶点。通过PPI网络分析得到7个关键靶点,包括JUN、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、胱天蛋白酶-3(CASP3)、基质金属蛋白酶9(MMP9);肿瘤坏死因子(TNF)信号通路为主要的差异信号通路。分子对接结果显示,各差异成分(洋川芎内酯K、洋川芎内酯F、3-正丁基苯酞、Z,Z′-6,8′,7,3′-双藁本内酯、阿魏酸、Z-藁本内酯)和其对应靶点均具有较好的结合活性。结论:川芎酒制增效机制可能与抑制炎症反应的作用增强有关。

关键词：川芎酒制脑缺血超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS) 网络药理学分子对接

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商陆总皂苷对癌性腹水模型小鼠的祛腹水作用及机制初探

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中国中药杂志 2022年第16期47卷 4411-4417页

作者：王彩霞郁红礼吴皓陶兴宝谢雨薇程砚秋曾平王贺鹏张萍崔小兵南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 中国食品药品检定研究院北京100050

为研究商陆皂苷类成分祛腹水药效作用及其机制,采用H22腹水小鼠模型,取ICR雄性小鼠腹腔注射H22细胞混悬液,将造模成功小鼠随机分为模型组、阳性药组(呋塞米,6 mg·kg^(-1))、商陆总提物组和总皂苷组(1.29 g·kg^(-1)),另取雄性... 详细信息

为研究商陆皂苷类成分祛腹水药效作用及其机制,采用H22腹水小鼠模型,取ICR雄性小鼠腹腔注射H22细胞混悬液,将造模成功小鼠随机分为模型组、阳性药组(呋塞米,6 mg·kg^(-1))、商陆总提物组和总皂苷组(1.29 g·kg^(-1)),另取雄性小鼠10只作为空白组。空白组和模型组小鼠灌胃给予含0.5%CMC-Na的生理盐水,阳性药组、商陆总提物组和总皂苷组小鼠灌胃给予相应剂量药物,每日1次,连续给药8 d,考察商陆总皂苷对模型小鼠腹水量、给药后5 h内尿量和粪便含水量的影响,同时以血清抗利尿激素(ADH)、肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)相关激素肾素(renin)、血管紧张素2(AngⅡ)和醛固酮(ALD)含量,肾脏组织中水通道蛋白(aquaporin,AQP)1~AQP4表达量,结肠AQP1、AQP3表达量及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路相关蛋白的表达量为指标,探索商陆总皂苷祛腹水作用的机制。结果表明,商陆总皂苷可以增加腹水模型小鼠尿量和粪便含水量,减少腹水量;显著降低肾脏AQP1~AQP4和结肠AQP1、AQP3的表达;显著降低血清ADH、renin、AngⅡ和ALD水平;同时可显著降低腹水模型小鼠肾脏p-PI3K和p-Akt蛋白的表达。商陆总皂苷通过利尿和泻下作用发挥祛腹水功效,其作用机制可能与抑制RAAS、ADH活性;抑制PI3K/Akt信号通路磷酸化从而抑制肾脏和结肠AQPs表达有关。

关键词：商陆总皂苷腹水水通道蛋白 PI3K/Akt 肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)

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半夏凝集素蛋白单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA的建立

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中国中药杂志 2022年第22期47卷 6076-6081页

作者：谢雨薇郁红礼吴皓陶兴宝王贺鹏程砚秋王彩霞曾平刘冰冰张萍崔小兵南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 中国食品药品检定研究院北京100050

为测定半夏及其炮制品中内源性毒性物质半夏凝集素蛋白(Pinellia ternata lectin, PTL)的含量,该文采用杂交瘤细胞技术制备PTL特异性单克隆抗体,并建立了PTL抗原定量双抗夹心ELISA检测方法,检测条件为:捕获抗体工作浓度为2.5μg·mL... 详细信息

为测定半夏及其炮制品中内源性毒性物质半夏凝集素蛋白(Pinellia ternata lectin, PTL)的含量,该文采用杂交瘤细胞技术制备PTL特异性单克隆抗体,并建立了PTL抗原定量双抗夹心ELISA检测方法,检测条件为:捕获抗体工作浓度为2.5μg·mL-1,检测抗体稀释倍数为1∶450,包被条件为4℃过夜,封闭时间、抗原及检测抗体孵育时间均为90 min,辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(streptavidin-horseradish peroxidase, SA-HRP)孵育时间为15 min。该方法对PTL抗原的定量限为0.375 ng·mL-1;线性范围为75.000~4 800.000 pg·mL-1,R~2=0.997 1;加样回收率在90.0%~110.0%;试验内和试验间精密性变异系数分别在2.0%~3.0%、2.0%~8.5%。采用该方法测定3批半夏及其炮制品中PTL含量,测得半夏中PTL质量分数均值为35.42 mg·g^(-1),其炮制品清半夏、法半夏、姜半夏中PTL质量分数均值分别为1.15 mg·g^(-1)、16.53μg·g^(-1)和122.63 ng·g^(-1),表明炮制后PTL含量显著下降。该文建立的PTL抗原定量双抗夹心ELISA检测方法线性较好,反应灵敏,准确度高,为半夏炮制过程中PTL含量检测提供一种简便有效的监测方法。

关键词：半夏凝集素蛋白单克隆抗体双抗夹心ELISA

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基于“部位扣除”的黄芪温热效应导致“上火”反应的物质基础及机制研究

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中草药 2022年第14期53卷 4350-4364页

作者：曹丽珑裴科刘瑞宁燕赵婷婷于子涵吴陈成邵翔宇张朔生王颖莉胡美变蔡皓山西中医药大学中药与食品工程学院山西省现代中药工程实验室山西晋中030619 浙江中医药大学药学院中药炮制研究中心浙江杭州310053 南京中医药大学药学院国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

目的探讨黄芪温热效应引起“上火”反应的物质基础及机制。方法对黄芪水煎液中黄酮和皂苷部位进行分离,采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱对已分离部位进行成分鉴别;将SD大鼠随机分为8组,分别给予蒸馏水及相应药物。以... 详细信息

目的探讨黄芪温热效应引起“上火”反应的物质基础及机制。方法对黄芪水煎液中黄酮和皂苷部位进行分离,采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱对已分离部位进行成分鉴别;将SD大鼠随机分为8组,分别给予蒸馏水及相应药物。以《中国药典》规定的日服剂量的4倍进行ig给药,连续30 d。观察大鼠状态,测定肛温、摄食量、粪便量、粪便含水量和唾液量;测定炎症因子、甲状腺功能、肾上腺功能与能量代谢的相关指标;检测各组肝脏中单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)、过氧化物酶体增殖激活受体辅助活化因子-1α(peroxisome proliferator-activated-recptor-γcoactivator-1α,PGC-1α)、核呼吸因子1(nuclear respiratory factor 1,NRF1)、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)的m RNA和蛋白表达量。结果多糖、黄酮和皂苷部位的分离度良好,多糖质量分数大于50%,皂苷、黄酮部位质量分数均大于80%,共鉴别出21种黄酮类成分和6种皂苷类成分。给药后与对照组相比,各组别大鼠体质量无显著差异;全成分组肛温明显升高(P<0.05);全成分组、多糖组粪便含水量显著降低(P<0.05、0.01),缺皂苷组粪便含水量显著升高(P<0.001);第28天唾液量多糖组、皂苷组、缺黄酮组显著降低(P<0.001);全成分组、多糖组、皂苷组和缺多糖组肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平显著升高(P<0.05、0.01、0.001),多糖组白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平显著升高(P<0.01),全成分组IL-1β水平显著升高(P<0.05);各组17-羟皮质类固醇(17-hydroxycorticosteroid,17-OHCS)含量均有上调趋势,其中全成分组、多糖组、皂苷组、缺多糖组和缺黄酮组有显著性差异(P<0.05、0.01);全成分组、缺皂苷组与缺黄酮组的Ca^(2+),Mg^(2+)-ATP酶活力与Na^(+),K^(+)-ATP酶活力升高,全成分组和多糖组琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)活力显著增加(P<0.05、0.01)。各组对AMPK、PGC-1α、NRF1、TFAM的m RNA和蛋白表达水平均有上调趋势,其中全成分组和多糖组的上调趋势优于其余各组。结论过量食用黄芪导致“上火”可能与多糖及皂苷部位引起的炎症反应、能量代谢增强有关,其机制与AMPK介导的PGC-1α/NFR1通路相关,其中多糖的影响较大。

关键词：黄芪 “上火”反应超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱能量代谢单磷酸腺苷活化蛋白激酶通路

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