目的探讨氢离子(H^(+))对CD8^(+)T细胞功能及哺乳动物雷帕霉素(Rapamycin)靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的影响。方法通过磁珠分选的方法从人外周血单个核细胞(PBMC)中分选出CD8^(+)T细胞,流式细胞术检测CD8^(+)...
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目的探讨氢离子(H^(+))对CD8^(+)T细胞功能及哺乳动物雷帕霉素(Rapamycin)靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的影响。方法通过磁珠分选的方法从人外周血单个核细胞(PBMC)中分选出CD8^(+)T细胞,流式细胞术检测CD8^(+)T细胞的百分比并验证其纯度。根据细胞培养基的不同pH值将培养基分为对照组(pH为7.2~7.4)、pH 6.7组和pH 6.5组。细胞计数法检测不同pH分组中CD8^(+)T细胞的增殖能力。流式细胞术检测经PMA/离子霉素刺激后不同pH分组CD8^(+)T细胞中细胞因子TNF-α和IFN-γ的表达水平,并进一步分析在Rapamycin作用下,CD8^(+)T细胞中TNF-α、IFN-γ水平以及S6蛋白磷酸化水平。qRT-PCR检测不同pH分组中CD8^(+)T细胞TNF-α和IFN-γmRNA的表达水平。Western blot检测不同pH分组CD8^(+)T细胞中mTOR信号通路相关蛋白AKT和S6的磷酸化水平。结果pH 6.7组和pH 6.5组中CD8^(+)T细胞的增殖能力显著低于对照组(P<0.05);CD8^(+)T细胞内细胞因子TNF-α和IFN-γmRNA水平显著低于对照组(P<0.05),其蛋白质表达水平与对照组相比亦显著降低(P<0.05),mTOR信号通路相关蛋白AKT和S6的磷酸化水平显著低于对照组(P<0.05)。经Rapamycin作用后,pH 6.5^(+)Rapamycin组中CD8^(+)T细胞S6蛋白磷酸化水平以及细胞因子TNF-α、IFN-γ的表达水平均显著低于对照^(+)Rapamycin组(P<0.05)。结论H^(+)可抑制CD8^(+)T细胞的功能,且与mTOR信号通路相关。
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