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中华中医药学会中药炮制分会2018年学术年会

作者：郁红礼王卫毛善虎吴皓单雪莲张元斌南京中医药大学药学院江苏省中药炮制重点实验室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心国家中医药管理局中药炮制传承基地江苏南京210023

天南星科有毒中药掌叶半夏具有强烈的促炎毒性,且促炎作用与其含有的凝集素(Pinellia pedatisecta lectin,PPL)密切相关.本论文主要研究PPL的促炎及致焦亡作用,研究结果显示PPL能够导致线粒体膜电位(MMP)的降低以及钙离子的升高,同时wes... 详细信息

天南星科有毒中药掌叶半夏具有强烈的促炎毒性,且促炎作用与其含有的凝集素(Pinellia pedatisecta lectin,PPL)密切相关.本论文主要研究PPL的促炎及致焦亡作用,研究结果显示PPL能够导致线粒体膜电位(MMP)的降低以及钙离子的升高,同时western-blot结果显示伴随活性氧(ROS)的过量生成,进而导致炎症相关MAPK和NF-κB信号通路的活化以及炎症因子IL-1β的释放.PPL也能够活化NLRP3炎性小体,表现为TXNIP的表达下调以及NLRP3/caspase-1β20/ASC的表达上调,同时,激光扫描共聚焦和免疫共沉淀实验结果显示,PPL能够导致TXNIP与NLRP3的结合,以及NLRP3与ASC和caspase-1的结合,表明NLRP3炎症信号通路被活化.此外,ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)可以抑制PPL导致的炎症信号通路的活化和IL-1β的释放.进一步研究发现,PPL能够导致细胞焦亡,且这一现象同样能够被NAC抑制.综上结果表明,PPL能够导致ROS-MAPKs/NF-κB和NLRP3炎症信号通路的活化,且这种作用与其诱导活性氧ROS的大量生成密切相关,表明ROS在PPL导致的炎症中发挥重要作用.

关键词：掌叶半夏凝集素 ROS MAPK和NF-κB/NLRP3通路 IL-1β 细胞焦亡

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山茱萸炮制过程中美拉德反应底物的含量变化

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食品与生物技术学报 2017年第8期36卷 884-889页

作者：杨光明张玉玲李萌潘扬蔡宝昌南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023

采用UPLC-MS/MS法检测游离氨基酸含量,色谱柱以键合相C18硅胶为基质,流动相为水-乙腈,梯度洗脱,流速0.8 m L/min;采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定还原糖含量,研究山茱萸炮制过程中参与美拉德反应的底物游离氨基酸和还原糖质量分数... 详细信息

采用UPLC-MS/MS法检测游离氨基酸含量,色谱柱以键合相C18硅胶为基质,流动相为水-乙腈,梯度洗脱,流速0.8 m L/min;采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定还原糖含量,研究山茱萸炮制过程中参与美拉德反应的底物游离氨基酸和还原糖质量分数的变化规律。山茱萸中共检测出15种游离氨基酸。各游离氨基酸的质量分数随着炮制时间的延长逐渐降低;还原糖质量分数在炮制中趋势不同于氨基酸,在炮制0~24 h逐渐降低,24~36 h还原糖质量分数有所上升,36 h后其质量分数变化趋于稳定。山茱萸中游离氨基酸和还原糖质量分数的变化与炮制中的美拉德反应密切相关,美拉德反应达到平衡时间与传统的炮制时间基本一致,这为炮制终点的判定提供了科学依据。

关键词：山茱萸炮制美拉德反应游离氨基酸还原糖

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基于ROS/NF-κB信号通路的天南星凝集素致炎机制及炮制对蛋白的影响

基于ROS/NF-κB信号通路的天南星凝集素致炎机制及炮制对蛋白的影...

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第九届全国中医药博士生学术论坛

作者：王卫毛善虎单雪莲程梓烨陈云郁红礼吴皓南京中医药大学药学院南京210023 南京中医药大学药学院南京210023 江苏省中药炮制重点实验室南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210023 国家中医药管理局中药炮制传承基地南京210023

目的：研究天南星科有毒中药天南星凝集素蛋白(AEL)的致炎机制及炮制对蛋白的影响. 方法：通过体外培养RAW264.7巨噬细胞,经不同浓度AEL刺激1h后,ELISA法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放,Western ... 详细信息

目的：研究天南星科有毒中药天南星凝集素蛋白(AEL)的致炎机制及炮制对蛋白的影响. 方法：通过体外培养RAW264.7巨噬细胞,经不同浓度AEL刺激1h后,ELISA法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放,Western blot法检测p-IκB、IκB、p-p65、p65蛋白的表达,倒置荧光显微镜及荧光酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位及胞内游离钙离子水平;加入ROS的阻断剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)后,采用ELISA和Western blot法检测TNF-α、IL-1β及p-IκB、IκB、p-p65、p65蛋白表达的变化.采用8％白矾溶液炮制AEL,ELISA法检测炮制前后炎性因子TNF-α、IL-1β释放的变化. 结果：AEL刺激巨噬细胞可导致炎性因子TNF-α、IL-1β大量释放,促进p-IκB、p-p65水平升高,导致巨噬细胞中ROS水平升高,线粒体膜电位降低以及胞内游离钙离子水平升高.当加入ROS的阻断剂NAC后,可明显降低ROS的生成,同时抑制了IκB、p65的磷酸化以及炎性因子TNF-α、IL-1β的大量释放.AEL经8％白矾溶液炮制后,能显著降低巨噬细胞炎性因子TNF-α、IL-1β的大量释放. 结论：AEL刺激巨噬细胞后可诱导氧化应激,生成过量ROS,进而激活NF-κB炎性信号通路并导致炎性因子大量释放.AEL经白矾炮制后毒性降低,推测凝集素蛋白在白矾溶液中发生变性或降解,这可能是矾制天南星减毒的机制之一.

关键词：天南星凝集素蛋白致炎机制活性氧核因子-κB 白矾炮制毒性作用

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藏药镰形棘豆醇提物酸碱分离及抗小鼠Lewis肺癌活性初步筛选

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中药新药与临床药理 2017年第5期28卷 623-627页

作者：李萌程海清杨光明牛俐燃潘扬南京中医药大学药学院江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023

目的筛选藏药镰形棘豆醇提物中对Lewis肺癌荷瘤小鼠具有抑瘤作用的活性部位。方法利用酸碱处理对镰形棘豆醇提物进行分离,并对所得碱性部位(AlF)和酸性部位(AcF)进行定性、定量分析。建立Lewis肺癌C57BL/6小鼠模型,随机分为模型组,环磷... 详细信息

目的筛选藏药镰形棘豆醇提物中对Lewis肺癌荷瘤小鼠具有抑瘤作用的活性部位。方法利用酸碱处理对镰形棘豆醇提物进行分离,并对所得碱性部位(AlF)和酸性部位(AcF)进行定性、定量分析。建立Lewis肺癌C57BL/6小鼠模型,随机分为模型组,环磷酰胺(CTX)组(20 mg·kg^(-1)),AlF高、低剂量组(180,90 mg·kg^(-1)),AcF高、低剂量组(180,90 mg·kg^(-1)),连续给药10 d;通过测定小鼠瘤体质量、抑瘤率、胸腺指数、脾指数来比较AlF、AcF的抑瘤作用;HE染色,显微镜下观察各组肿瘤细胞的形态学变化。结果 AcF主要含黄酮类成分,含量为18.9%;AlF主要为生物碱成分,含量为64.1%。AcF高剂量组降低雌性、雄性小鼠瘤体质量的作用明显,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05),抑瘤率分别为36.3%、32.8%;AlF高剂量组降低雌性小鼠瘤体质量的作用明显,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),抑瘤率为29.7%。与模型组比较,CTX组小鼠的脾脏、胸腺指数均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);而AcF、AlF各剂量组与模型组比较,脾脏、胸腺指数差异均无统计学意义(P>0.05)。肿瘤组织病理形态学观察显示AcF、AlF各给药组肿瘤细胞出现不同程度的坏死。结论镰形棘豆醇提物AlF、AcF均对Lewis肺癌荷瘤小鼠具有明显的抗肿瘤作用,黄酮类成分的作用比生物碱略强,其抗肿瘤机制还有待进一步研究。

关键词：镰形棘豆醇提物黄酮生物碱活性筛选 Lewis肺癌抑瘤率

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基于TLR4/NF-κB通路研究7-羟基二氢黄酮抗A549肺癌细胞作用机制

基于TLR4/NF-κB通路研究7-羟基二氢黄酮抗A549肺癌细胞作用机制

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第三届中国民族医药学会药用资源分会年会暨2018年民族药资源学术交流会

作者：牛俐燃李冠聪杨光明程海清潘扬南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023 南京中医药大学药学院江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023

目的：藏药镰形棘豆以抗炎圣药著称.7-羟基-二氢黄酮(7-HF),一种从镰形棘豆中提取的黄酮类化合物.本研究基于TLR4/NF-κB信号通路探究7-HF抗肺癌A549细胞的作用机制. 方法：采用CCK8法检测7-HF对A549细胞活力的影响.采用Annexin V-FI... 详细信息

目的：藏药镰形棘豆以抗炎圣药著称.7-羟基-二氢黄酮(7-HF),一种从镰形棘豆中提取的黄酮类化合物.本研究基于TLR4/NF-κB信号通路探究7-HF抗肺癌A549细胞的作用机制. 方法：采用CCK8法检测7-HF对A549细胞活力的影响.采用Annexin V-FITC/碘化丙酸(PI)染色及流式细胞术分析细胞凋亡.A549细胞由脂多糖(LPS)刺激,7-HF介导治疗,免疫印迹(WB)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测TLR4/NF-κB通路相关因子的表达. 结果：7-HF能够抑制A549细胞的增殖,并且呈剂量依赖性.Annexin V-FITC/PI染色结果显示,7HF通过诱导细胞凋亡抑制A549细胞的活力.此外,被LPS处理的A549细胞中,TLR4/NF-κB通路相关因子的表达上升,WB和ELISA显示7-HF能够显著下调这些因子的水平. 结论：7-HF能够抑制A549细胞的活力,诱导其细胞凋亡,抗癌机制可能与下调TLR4/NF-κB信号通路相关细胞因子表达有关.

关键词：肺癌镰形棘豆 7-羟基-二氢黄酮 Toll样受体核转录因子-κB 抗癌活性

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镰形棘豆对SMMC-7721细胞线粒体膜电位和凋亡相关蛋白表达的影响

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南京中医药大学学报 2017年第1期33卷 54-58页

作者：陈晓红程海清邓易杨光明潘扬南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 青海大学医学院青海西宁810001 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023

目的研究藏药镰形棘豆对SMMC-7721人肝癌细胞活性、线粒体膜电位,细胞色素C(Cyt C)及Caspase-3蛋白表达的影响与细胞凋亡的关系。方法以镰形棘豆总黄酮0.05、0.075、0.1g/L处理肝癌细胞SMMC-7721,24h后观察细胞的生长状况;镰形棘豆总黄... 详细信息

目的研究藏药镰形棘豆对SMMC-7721人肝癌细胞活性、线粒体膜电位,细胞色素C(Cyt C)及Caspase-3蛋白表达的影响与细胞凋亡的关系。方法以镰形棘豆总黄酮0.05、0.075、0.1g/L处理肝癌细胞SMMC-7721,24h后观察细胞的生长状况;镰形棘豆总黄酮作用于SMMC-7721细胞后,流式细胞仪检测细胞总体凋亡率和线粒体膜电位,Western blot检测对凋亡相关蛋白Cyt C及Caspase-3表达的影响。结果结果表明,镰形棘豆总黄酮抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长,呈浓度依赖关系;镰形棘豆作用后可观察到凋亡细胞的比例升高;可导致细胞的线粒体跨膜电位明显降低,与药物浓度呈负相关。中、高剂量组的细胞中Cyt C及Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论镰形棘豆总黄酮诱导SMMC-7721细胞的凋亡可能是通过线粒体途径,并且与影响Cyt C及Caspase-3的表达有关。为镰形棘豆抗肿瘤的作用机制的实验和临床研究提供依据。

关键词：镰形棘豆 SMMC-7721 线粒体膜电位细胞色素C Caspase-3 蛋白表达

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苍耳亭对卵清蛋白诱导大鼠过敏性鼻炎的影响

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徐州医科大学学报 2017年第8期37卷 498-501页

作者：柏璐李伟东朱星宇刘玲徐圣秋徐州市第一人民医院药剂科江苏徐州221002 南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点实验室江苏南京210029

目的研究苍耳亭对卵清蛋白诱导大鼠过敏性鼻炎的影响。方法采用卵清蛋白诱导大鼠过敏性鼻炎模型，将48只大鼠分成6组：正常组，模型组，苍耳亭高、中、低剂量组，富马酸酮替芬组。给药1周后，记录大鼠打喷嚏和挠鼻数，检测血清中免疫球... 详细信息

目的研究苍耳亭对卵清蛋白诱导大鼠过敏性鼻炎的影响。方法采用卵清蛋白诱导大鼠过敏性鼻炎模型，将48只大鼠分成6组：正常组，模型组，苍耳亭高、中、低剂量组，富马酸酮替芬组。给药1周后，记录大鼠打喷嚏和挠鼻数，检测血清中免疫球蛋白E（IgE）和白细胞介素-4（IL-4）的水平，剥取鼻中隔黏膜进行H-E染色及电镜观察。结果苍耳亭可明显减少过敏性鼻炎模型大鼠的打喷嚏和挠鼻数，降低血清中IgE和IL-4的水平，改善鼻黏膜的病理状况。结论苍耳亭对卵清蛋白诱导的过敏性鼻炎模型大鼠有积极的治疗作用。

关键词：苍耳亭卵清蛋白过敏性鼻炎大鼠

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女贞子生品及炮制品的HPLC指纹图谱研究

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中草药 2016年第5期47卷 760-766页

作者：杨光明陈晓红刘路陆兔林蔡宝昌南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 青海大学医学院青海西宁810001

目的建立女贞子生品及其炮制品的HPLC指纹图谱。方法采用Purospher®STAR RP18 Endcapped(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长282 nm,柱温25℃;采用《中药色谱指纹图谱相... 详细信息

目的建立女贞子生品及其炮制品的HPLC指纹图谱。方法采用Purospher®STAR RP18 Endcapped(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长282 nm,柱温25℃;采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.130723版)软件进行分析。结果优化了HPLC色谱条件,在女贞子生品及其炮制品的谱图中分别标定了19个共有指纹特征峰,确定了红景天苷、女贞苷、特女贞苷、橄榄苦苷、oleonuezhenide 5个化合物,建立了10个不同批次的女贞子生品及炮制品HPLC指纹图谱,相似度高。结论该方法快速、简便、准确,符合指纹图谱技术要求,可作为控制女贞子质量的分析方法。

关键词：女贞子制女贞子指纹图谱 HPLC 质量评价

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镰形棘豆脂溶性生物碱含药血清对人肺癌A549细胞凋亡的影响

镰形棘豆脂溶性生物碱含药血清对人肺癌A549细胞凋亡的影响

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中华中医药学会中药炮制分会2017年学术年会暨第二届雷公论坛

作者：程海清牛俐燃李冠聪杨光明潘扬南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023 南京中医药大学药学院江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023

研究藏药镰形棘豆脂溶性生物碱(OFLA)含药血清对人肺腺癌A549细胞活力、凋亡和生长周期的影响。 SD大鼠随机分为五组给药：空白对照组、OFLA低、中、高剂量组和阳性对照组(环磷酰胺， CTX)组，给药后麻醉取足量血，并制备各给药组的含... 详细信息

研究藏药镰形棘豆脂溶性生物碱(OFLA)含药血清对人肺腺癌A549细胞活力、凋亡和生长周期的影响。 SD大鼠随机分为五组给药：空白对照组、OFLA低、中、高剂量组和阳性对照组(环磷酰胺， CTX)组，给药后麻醉取足量血，并制备各给药组的含药血清。

关键词：镰形棘豆含药血清 A549细胞细胞活力细胞凋亡细胞周期

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镰形棘豆脂溶性生物碱含药血清对A549细胞活力、凋亡和生长周期的影响

镰形棘豆脂溶性生物碱含药血清对A549细胞活力、凋亡和生长周期的...

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第二届中国民族医药学会药用资源分会年会暨2017年民族药资源学术交流会

目的研究藏药镰形棘豆脂溶性生物碱(OFLA)含药血清对人肺腺癌A549细胞活力、凋亡和生长周期的影响.方法 SD大鼠随机分为空白对照组、低、中、高剂量给药组和环磷酰胺(CTX)组，给药后处死制备不同浓度含药血清.采用CCK-8比色法检测OFLA... 详细信息

目的研究藏药镰形棘豆脂溶性生物碱(OFLA)含药血清对人肺腺癌A549细胞活力、凋亡和生长周期的影响.方法 SD大鼠随机分为空白对照组、低、中、高剂量给药组和环磷酰胺(CTX)组，给药后处死制备不同浓度含药血清.采用CCK-8比色法检测OFLA含药血清对A549细胞作用12、24和48 h后活力的变化，并运用流式细胞仪检测含药血清作用24 h后对A549细胞凋亡率和细胞周期阻滞率的影响.结果不同给药剂量的OFLA含药血清均对A549细胞的活力有不同程度的抑制作用，其抑制作用与作用时间呈正相关趋势.与阳性药组相比，相同时间段的低、中、高剂量组抑制作用均稍弱;且高剂量组作用48 h后细胞活力为72.8％，与阳性对照组的细胞活力(69.3％)相近.与空白对照组相比，含药血清作用A549细胞24 h后，低、中、高剂量组细胞凋亡率均显著提高(P＜0.01或0.001);同时含药血清中、高剂量组的G0/G1期细胞数量也明显增加(P＜0.05或0.01).结论提示OFLA可降低人肺癌A549细胞的活力，其作用机制可能与诱导细胞凋亡有关，且可能将细胞生长周期阻滞于G0/G1期.

关键词：镰形棘豆含药血清 A549细胞细胞活力细胞凋亡细胞周期

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