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狼毒(月腺大戟)毒性部位诃子汤制前后肠道毒性变化与成分组成变化的相关性研究

中国中药杂志 2024年第9期49卷 2441-2450页

作者：林伟豪郁红礼吴皓王欣之崔小兵刘睿刘璐曹杰曾敏许艳青南京中医药大学药学院江苏省中药炮制重点实验室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心

为探究狼毒(月腺大戟)诃子汤制前后肠道毒性变化与成分组成变化的相关性,在整体动物模型水平灌胃给药,以小鼠的粪便含水量,肠道不同部位炎症因子及病理损伤情况为指标,比较月腺大戟生品二氯甲烷提取部位(二氯部位)、诃子汤制品二氯部位... 详细信息

为探究狼毒(月腺大戟)诃子汤制前后肠道毒性变化与成分组成变化的相关性,在整体动物模型水平灌胃给药,以小鼠的粪便含水量,肠道不同部位炎症因子及病理损伤情况为指标,比较月腺大戟生品二氯甲烷提取部位(二氯部位)、诃子汤制品二氯部位与模拟诃子汤制月腺大戟二氯部位的肠道毒性作用差异,考察诃子汤制对月腺大戟肠道毒性的影响。同时构建月腺大戟和诃子成分结构数据库,采用HPLC-TOF-MS分析这3个提取部位的二萜类成分与鞣质酚酸类成分组成变化。采用HPLC测定炮制前后月腺大戟饮片和炮制后锅壁残留物中的4种主要二萜类成分ent-11α-hydroxyabicta-8(14)、13(15)-dien-16,12-olide(HAO)、jolkinolide B(JNB)、fischeria A(FA)、jolkinolide E(JNE)的含量,考察诃子汤炮制是否对二萜类成分的含量与结构产生影响。结果表明,月腺大戟生品二氯部位组可显著增加小鼠的粪便含水量和各肠段炎症因子TNF-α和IL-1β释放水平,且发现肠道组织受损并伴随明显炎症细胞浸润,而与生品二氯部位组比较,模拟诃子汤制月腺大戟二氯部位组肠道组织损伤减轻,炎症细胞浸润减少,肠道毒性显著下降。质谱分析结果显示月腺大戟二氯部位模拟诃子汤制后二萜类成分含量无明显差异,但新增了大量来源于诃子的鞣质酚酸类等成分。HPLC结果显示,月腺大戟诃子汤炮制后4种萜类成分含量有不同程度下降,下降幅度在-0.35%~-19.74%,下降部分主要残留于锅壁,表明诃子汤制并未改变月腺大戟中毒性二萜类成分的结构。诃子汤中鞣质酚酸类成分拮抗作用是月腺大戟诃子汤炮制后肠道毒性下降的主要原因,民族药诃子汤炮制狼毒具有科学性。

关键词：月腺大戟诃子汤制模拟炮制肠道毒性二萜类成分成分变化

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基于近红外光谱分析技术对不同蒸制程度天麻的质量评价研究

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中草药 2025年第3期56卷 975-986页

作者：王彬董佳佳申柯李昱李铭轩张玖捌张云飞王俊蓉梅茜毛春芹陆兔林南京中医药大学药学院江苏南京210023 南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

目的探讨近红外光谱(near infrared spectroscopy,NIRS)技术在天麻Gastrodia elata质量评价中的应用,通过对不同蒸制程度的天麻进行判别分析,进一步构建天麻有效成分含量预测模型,为天麻质量评价提供新方法。方法建立天麻中天麻素(gastr... 详细信息

目的探讨近红外光谱(near infrared spectroscopy,NIRS)技术在天麻Gastrodia elata质量评价中的应用,通过对不同蒸制程度的天麻进行判别分析,进一步构建天麻有效成分含量预测模型,为天麻质量评价提供新方法。方法建立天麻中天麻素(gastrodin,GAS)、对羟基苯甲醇(p-hydroxybenzyl alcohol,HBA)、巴利森苷B(parishin B,PB)、巴利森苷C(parishin C,PC)、巴利森苷A(parishin A,PA)含量测定的高效液相色谱法,并以其测定值为参比。采集天麻样品的NIRS,结合线性判别分析(linear discriminant analysis,LDA)算法,建立不同蒸制时间的天麻定性判别模型。选择偏最小二乘法(partial least squares,PLS)等化学计量学方法建立有效成分的测定值与NIRS的定量校正模型,对建模过程的各个阶段进行优化,构建天麻各有效成分的最优PLS定量模型。结果基于LDA算法建立的天麻蒸制程度的定性判别模型准确度达到96.2%,混淆矩阵图与接收器工作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价模型的预测性能良好;天麻近红外原始光谱经标准正态变换(standard normal variate,SNV)或平滑法(savitzky-golay,SG)预处理后,以竞争性自适应重加权抽样-偏最小二乘法(competitive adaptive eeweighted sampling-partial least squares,CARS-PLS)构建的定量模型准确度较高,建立的GAS、HBA、PB、PC、PA最佳PLS定量模型的校正决定系数(R^(2)c)分别为0.9753、0.9864、0.9700、0.9636、0.9659,预测决定系数(R^(2)p)分别为0.9704、0.9840、0.9779、0.9786、0.9855,5个定量模型的预测偏差(residual prediction deviation,RPD)均大于6。表明NIRS定量模型预测值与测定值具有良好的线性关系,模型预测效果良好。结论所建立的天麻近红外LDA定性和CARS-PLS定量模型准确、可靠,可实现天麻蒸制程度的定性鉴别以及GAS、HBA、PB、PC、PA 5个有效成分含量的快速定量分析,为天麻的质量评价与控制提供新的参考。

关键词：天麻蒸制近红外光谱化学计量学质量评价天麻素对羟基苯甲醇巴利森苷B 巴利森苷C 巴利森苷A

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石灰水炮制半夏对毒性成分凝集素蛋白的影响研究

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中国中药杂志 2023年第4期48卷 951-957页

作者：陶兴宝吴皓南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

为探究法半夏炮制过程中炮制辅料石灰水浸泡对其毒性成分凝集素蛋白的影响,阐释法半夏炮制过程中石灰水解毒的科学内涵。以Western blot法考察不同pH石灰水(pH 10、11、12.4)、饱和氢氧化钠及碳酸氢钠溶液浸泡对凝集素蛋白含量的影响;采... 详细信息

为探究法半夏炮制过程中炮制辅料石灰水浸泡对其毒性成分凝集素蛋白的影响,阐释法半夏炮制过程中石灰水解毒的科学内涵。以Western blot法考察不同pH石灰水(pH 10、11、12.4)、饱和氢氧化钠及碳酸氢钠溶液浸泡对凝集素蛋白含量的影响;采用SDS-PAGE法结合银染技术测定不同pH石灰水浸泡凝集素蛋白后上清与沉淀中蛋白组成;以MALDI-TOF-MS/MS技术检测不同pH石灰水浸泡凝集素蛋白后上清及沉淀中肽段相对分子质量分布,圆二色谱检测浸泡过程中凝集素蛋白二级结构比例变化。结果显示,pH>12的石灰水及饱和氢氧化钠溶液浸泡均可使凝集素蛋白含量显著下降,而pH<12的石灰水及饱和碳酸氢钠溶液浸泡对凝集素蛋白含量无显著影响。pH>12的石灰水浸泡凝集素蛋白后其上清和沉淀均在12 kDa位置未检测到对应的凝集素蛋白条带和分子离子峰。这是由于pH>12的石灰水浸泡可使凝集素蛋白的二级结构比例发生明显改变,出现了不可逆变性过程,而pH<12的石灰水浸泡未使凝集素蛋白的二级结构比例发生明显改变,未出现变性过程。pH>12是法半夏炮制过程中石灰水解毒的关键条件。石灰水(pH>12)浸泡可使凝集素蛋白发生不可逆变性,致使半夏致炎毒性显著下降,起到炮制解毒的关键作用。

关键词：半夏石灰水凝集素蛋白炮制解毒机制

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基于Nrf2/HO-1信号通路的中药有效成分缓解肝损伤研究进展

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药物评价研究 2024年第7期47卷 1638-1644页

作者：罗美美朱星宇胡乐涛吴育李伟东南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室、国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 南京中医药大学南通附属医院临床研究中心江苏南通226000 南京中医药大学药学院江苏南京210023

近年研究已证实,氧化应激是造成肝损伤的重要因素,研究发现核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)可以通过调控氧化应激以缓解肝损伤。中药单体或中药复方可以通过调控该信号通路减少氧化应激、铁死亡、炎症和细胞焦亡的发生以... 详细信息

近年研究已证实,氧化应激是造成肝损伤的重要因素,研究发现核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)可以通过调控氧化应激以缓解肝损伤。中药单体或中药复方可以通过调控该信号通路减少氧化应激、铁死亡、炎症和细胞焦亡的发生以缓解肝损伤。对中药中的黄酮类、多糖、酚酸、甾体类等有效成分通过Nrf2/HO-1信号通路在氧化应激与肝损伤之间的相互作用进行综述,对于寻求靶向Nrf2/HO-1信号通路发挥缓解肝损伤作用的中药提供依据,同时为中药治疗肝损伤作用机制的深入研究提供参考。

关键词：中药核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路氧化应激肝损伤黄酮类多糖类酚酸甾体类

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蜜炙对黄芪成分、药效及应用的影响研究进展

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中国医院药学杂志 2024年第1期44卷 113-122页

作者：赵婷婷裴科于子涵李鸿昌孙琳曹岗张朔生胡美变刘玉杰蔡皓山西中医药大学中药与食品工程学院山西省中药炮制重点实验室山西晋中030619 浙江中医药大学药学院中药炮制研究中心浙江杭州310053 南京中医药大学药学院国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

蜜炙黄芪是黄芪经炼蜜闷润炒制而成,是唯一被纳入《中国药典》(2020年版)的黄芪炮制品,被广泛应用于临床。近年来对黄芪和蜜炙黄芪的研究较多,包括小分子成分的鉴定、蜜炙工艺的优化、蜜炙前后成分的变化及药效对比等方面。该文总结了... 详细信息

蜜炙黄芪是黄芪经炼蜜闷润炒制而成,是唯一被纳入《中国药典》(2020年版)的黄芪炮制品,被广泛应用于临床。近年来对黄芪和蜜炙黄芪的研究较多,包括小分子成分的鉴定、蜜炙工艺的优化、蜜炙前后成分的变化及药效对比等方面。该文总结了黄芪蜜炙的历史沿革,蜜炙工艺的优化和蜜炙对黄芪成分、药效及临床应用的影响,并指出黄芪蜜炙研究的不足,旨在为蜜炙黄芪的后续研究方向提供依据,为临床两味药的选择应用提供参考。

关键词：黄芪蜜炙黄芪历史沿革工艺化学成分药理临床应用

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基于FXR-SULT1E1通路探究盐补骨脂致小鼠胆汁淤积性肝损伤的性别差异

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中草药 2023年第9期54卷 2802-2811页

作者：吴育周浓梅春梅石芸华政颖李伟东南京中医药大学南通附属医院江苏南通226000 南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室、国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 重庆三峡学院重庆404120

目的从法尼醇受体(farnesoid X receptor,FXR)-硫酸基转移酶1E1(sulfotransferase 1E1,SULT1E1)通路探讨盐补骨脂致小鼠胆汁淤积性肝损伤性别差异的潜在机制。方法ICR雌性和雄性小鼠连续ig不同剂量(5、10、20 g/kg)的盐补骨脂水煎液30 d... 详细信息

目的从法尼醇受体(farnesoid X receptor,FXR)-硫酸基转移酶1E1(sulfotransferase 1E1,SULT1E1)通路探讨盐补骨脂致小鼠胆汁淤积性肝损伤性别差异的潜在机制。方法ICR雌性和雄性小鼠连续ig不同剂量(5、10、20 g/kg)的盐补骨脂水煎液30 d,采用HPLC仪检测补骨脂炮制后化学成分含量;采用全自动生化仪检测肝损伤相关指标;取肝脏、脾脏、肾脏、肺脏以及卵巢、睾丸,称定质量并计算脏器指数;采用苏木素-伊红(HE)染色法进行肝脏病理组织学检查;采用透射电镜观察盐补骨脂致胆汁淤积性肝损伤的显微结构变化;采用ELISA法检测血清中雌二醇(estradiol,E_(2))、促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)及FXR含量;采用免疫荧光染色法检测肝脏胆盐输出泵(bile salt export pump,Bsep)、多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2,Mrp2)和SULT1E1的表达;采用Western blotting检测肝脏FXR、Mrp2、胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7a1)、Bsep、SULT1E1、肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)和核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)蛋白表达。结果盐补骨脂给药后小鼠肝脏出现明显的肝细胞肿胀、胆管扩张、血清生化指标升高等病理变化,其中雌鼠更为严重(P<0.05、0.01、0.001)。免疫荧光实验显示给药后肝脏Bsep和Mrp2荧光强度均显著降低(P<0.05、0.001),但雌鼠更为明显;雌鼠肝脏中SULT1E1表达水平显著降低(P<0.001),而在雄鼠的肝脏中没有差异。ELISA结果显示雌鼠和雄鼠血清中E2、FSH和LH水平均显著升高(P<0.05、0.01、0.001),雌鼠更为明显。Western blotting结果显示,雌鼠给药后肝脏FXR、Mrp2、Bsep、SULT1E1、HNF4α和Nrf2表达明显降低(P<0.05、0.01、0.001),CYP7a1表达显著升高(P<0.01);雄鼠给药后FXR和Bsep表达明显降低(P<0.05、0.01)。结论盐补骨脂通过HNF4α调控FXR-SULT1E1信号通路,补骨脂下调了胆固醇和胆汁酸生物合成的关键酶SULT1E1,增加了胆汁淤积性肝损伤的风险,这可能是肝损伤性别差异的主要原因。

关键词：盐补骨脂法尼醇受体-硫酸基转移酶1E1通路肝细胞核因子4α 胆汁淤积性肝损伤雌激素性别差异

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网络药理学结合转录组学方法探讨防己黄芪汤治疗肾病综合征作用机制

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南京中医药大学学报 2023年第4期39卷 346-358页

作者：万浩婷刘晴刘路瑶谢林彤朱慧刘晓南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

目的基于转录组学与网络药理学方法探讨防己黄芪汤治疗肾病综合征的作用机制。方法收集网络药理学和转录组学的共同靶点,进行GO/KEGG功能富集分析。构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)并进行网络拓扑分析,确定潜在核心靶点。构建通路-靶点... 详细信息

目的基于转录组学与网络药理学方法探讨防己黄芪汤治疗肾病综合征的作用机制。方法收集网络药理学和转录组学的共同靶点,进行GO/KEGG功能富集分析。构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)并进行网络拓扑分析,确定潜在核心靶点。构建通路-靶点网络图,确定发挥关键作用的信号通路。采用qPCR、Western blot法和免疫荧光染色验证大鼠肾脏组织中核心靶点的mRNA和蛋白表达水平。结果PPI分析得到7个潜在核心靶点AKT1、AMPK、CPT1B、NF-κB1、P53、TGF-β1和TLR4,主要信号通路为AMPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、PPAR信号通路、NF-κB信号通路、TGF-β信号通路、P53信号通路、MAPK信号通路、JAK-STAT信号通路和FoxO信号通路。经动物体内实验验证,防己黄芪汤显著下调AKT1、CPT1B、NF-κB1、P53、TGF-β1、TLR4的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),上调AMPK的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论从网络药理学和转录组学角度初步阐明了防己黄芪汤治疗肾病综合征多成分、多靶点、多途径的整体调节特点,可为后续的药理学研究和临床应用提供依据与参考。

关键词：防己黄芪汤肾病综合征转录组学网络药理学作用机制

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蒙药京大戟奶制前后肠道毒性变化及成分分析

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南京中医药大学学报 2024年第3期40卷 278-288页

作者：刘璐郁红礼吴皓王欣之崔小兵曹玉林伟豪沈昌丽曹杰南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 南京市食品药品监督检验院江苏南京211198

目的探究蒙药京大戟奶制前后肠道毒性变化与成分组成变化的相关性。方法小鼠灌胃给予生品京大戟、牛奶浸泡京大戟(奶制)及水浸泡京大戟(水制)的95%乙醇提取物,以粪便含水量、小鼠各肠段炎症因子TNF-α和IL-1β水平为指标,考察京大戟奶... 详细信息

目的探究蒙药京大戟奶制前后肠道毒性变化与成分组成变化的相关性。方法小鼠灌胃给予生品京大戟、牛奶浸泡京大戟(奶制)及水浸泡京大戟(水制)的95%乙醇提取物,以粪便含水量、小鼠各肠段炎症因子TNF-α和IL-1β水平为指标,考察京大戟奶制前后的泻下作用及肠道致炎毒性变化;采用LC-MS/MS分析京大戟奶制前后95%醇提取物的成分组成变化。结果与空白组相比,京大戟生品、水制品可导致小鼠粪便含水量及各肠段TNF-α和IL-1β水平显著升高(P<0.05);与生品组相比,奶制品组各指标均显著下降(P<0.05),水制品组则无显著差异,表明水制不能起到减毒作用,辅料牛奶是降低京大戟毒性的关键辅料。质谱分析结果显示,京大戟中共鉴定出50个成分,其中萜类成分38个,酚酸类成分6个,其它成分6个,奶制后各成分含量均有不同程度的下降。对生、制品京大戟质谱数据进行主成分分析(Principal component analysis,PCA)及正交偏最小二乘法-判别分析(Partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)发现,生、制品成分可明显聚为2类,通过t检验筛选出生、制品的13个差异性成分,其中11个是萜类成分,表明京大戟奶制后萜类成分组成发生显著变化。炮制后牛奶辅料残液中检测出来源于京大戟的17个成分,其中16个为萜类成分,表明京大戟萜类成分在炮制浸泡过程中转移至辅料牛奶中。结论京大戟奶制后毒性降低、泻下作用缓和,其减毒机制可能与牛奶浸泡炮制过程中,萜类成分转移至牛奶中,饮片中毒性成分含量降低有关。

关键词：京大戟奶制肠道毒性萜类成分差异性成分

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黄芪和蜜炙黄芪中糖类组分和非糖类组分的差异性研究

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中草药 2023年第5期54卷 1586-1596页

作者：赵婷婷裴科于子涵曹岗李慧峰孔祥鹏张朔生孙琳刘玉杰蔡皓山西中医药大学中药与食品工程学院中药炮制山西省重点实验室山西晋中030619 南京中医药大学药学院国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 浙江中医药大学药学院中药炮制研究中心浙江杭州131005 山西中医药大学中药与食品工程学院山西省现代中药工程实验室山西晋中030619

目的比较研究黄芪蜜炙后多糖、单糖、寡糖及非糖类小分子成分的整体变化。方法结合糖组学和代谢组学,运用超高效液相-二极管阵列检测器(ultra high performance liquid-photodiode array detector,UPLC-PDA)、高效液相-蒸发光散射检测器... 详细信息

目的比较研究黄芪蜜炙后多糖、单糖、寡糖及非糖类小分子成分的整体变化。方法结合糖组学和代谢组学,运用超高效液相-二极管阵列检测器(ultra high performance liquid-photodiode array detector,UPLC-PDA)、高效液相-蒸发光散射检测器(ultra high performance liquid-evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)、高效凝胶渗透色谱-蒸发光散射检测器(high performance gel permeation chromatography-evaporative light scattering detector,HPGPC-ELSD)和超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(ultra high performance liquid chromatography-quadrupole/electrostatic field orbit-trap high resolution mass spectrometr,UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)等对黄芪和蜜炙黄芪的多糖、单糖、寡糖以及非糖小分子组分进行分析。结果黄芪和蜜炙黄芪中均可以找到3种相对分子质量的多糖,但3种多糖的重均相对分子质量、相对分子质量分布以及3种多糖各自的占比存在差异。黄芪和蜜炙黄芪多糖均含有甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖7种单糖,但两者物质的量比稍有不同(黄芪vs蜜炙黄芪=0.70∶0.20∶0.85∶5.67∶0.44∶2.04∶0.32 vs 0.79∶0.15∶0.73∶7.10∶0.31∶1.71∶0.35)。在黄芪和蜜炙黄芪中均能检测到寡糖蔗糖,蜜炙后蔗糖含量显著下降(P<0.01)。黄芪和蜜炙黄芪均含有游离单糖果糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖醛酸和岩藻糖,蜜炙黄芪中的果糖、甘露糖、葡萄糖含量均显著高于黄芪(P<0.05、0.01),而半乳糖醛酸的含量显著低于黄芪(P<0.05),岩藻糖含量在黄芪蜜炙后无显著变化。从黄芪和蜜炙黄芪中共筛选出20个差异性非糖小分子成分,主要为皂苷类和黄酮类成分。代表性成分定量分析表明,与黄芪相比,蜜炙黄芪中的黄酮类成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花苷的含量显著降低(P<0.05、0.01),皂苷类成分黄芪甲苷含量显著增加(P<0.01)。呋喃醛衍生物5-羟甲基糠醛在黄芪中未检测到,在蜜炙黄芪中的含量显著升高(P<0.001)。结论黄芪和蜜炙黄芪的糖类组分与非糖类组分存在显著差异,这可能是造成黄芪蜜炙后补中益气功效增强的主要原因。

关键词：黄芪蜜炙黄芪代谢组学糖组学毛蕊异黄酮葡萄糖苷芒柄花素 5-羟甲基糠醛

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甘草汁炮制半夏对毒性成分凝集素蛋白的影响

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中华中医药杂志 2023年第5期38卷 2245-2250页

作者：陶兴宝曹纬国吴皓重庆中医药学院中药系重庆402760 重庆中医药学院博士后工作站重庆400011 南京中医药大学药学院南京210023 江苏省中药炮制重点实验室南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210023

目的:研究法半夏炮制过程中炮制辅料甘草汁浸泡对其毒性成分凝集素蛋白的影响。方法:以WesternBlot法考察甘草汁(醇沉上清液、醇沉沉淀、甘草酸溶液)浸泡对凝集素蛋白含量的影响。采用SDS-PAGE法结合银染技术测定甘草汁及甘草酸溶液浸... 详细信息

目的:研究法半夏炮制过程中炮制辅料甘草汁浸泡对其毒性成分凝集素蛋白的影响。方法:以WesternBlot法考察甘草汁(醇沉上清液、醇沉沉淀、甘草酸溶液)浸泡对凝集素蛋白含量的影响。采用SDS-PAGE法结合银染技术测定甘草汁及甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后上清液与沉淀中的蛋白组成;以MALDITOF MS/MS技术检测甘草汁及甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后上清液及沉淀中肽段分子量分布;以等电点沉淀法测定凝集素蛋白等电点,并测定其Zeta电位变化考察甘草汁及甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后对其等电点的影响;同时,采用透射电镜观察甘草汁及甘草酸溶液浸泡对凝集素蛋白聚合作用的影响。结果:甘草汁、甘草汁醇沉上清液及甘草酸溶液浸泡均可使凝集素蛋白含量显著降低(P<0.05)。甘草汁及甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后的上清液和沉淀均在12 kDa位置出现凝集素蛋白对应的条带,且上清液对应的凝集素蛋白条带与沉淀对应的凝集素蛋白条带相比明显变浅。凝集素蛋白的等电点pH约为5~6,甘草汁及甘草酸溶液的pH分别为5.25、5.62。甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后其Zeta电位接近于0,达到等电点而沉淀。甘草汁、甘草酸溶液及甘草汁石灰水共同浸泡凝集素蛋白后出现大量聚集体,形成超分子自组装复合物结构而加速其沉淀。结论:甘草汁在法半夏炮制过程中解毒机制为甘草汁中甘草酸浸泡凝集素蛋白可使其达到等电点,促进其超分子自组装,改变溶解度而沉淀。甘草汁与石灰水在炮制过程中以协同作用形成超分子自组装复合物而解毒。

关键词：半夏甘草汁凝集素蛋白炮制解毒机理

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