检索结果-内蒙古大学图书馆

莲子心新碱对转化生长因子β1诱导的H1299细胞侵袭和迁移的抑制作用及其机制

中药新药与临床药理 2021年第10期32卷 1459-1467页

作者：张婉婷王歆竹米玉辉杨光明潘扬南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023

目的构建转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)H1299细胞上皮-间充质转化(EMT)模型,并探讨莲子心新碱(Neoliensine,NeoL)对其侵袭和迁移能力的抑制作用及潜在机制。方法用5、10、15 ng·... 详细信息

目的构建转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)H1299细胞上皮-间充质转化(EMT)模型,并探讨莲子心新碱(Neoliensine,NeoL)对其侵袭和迁移能力的抑制作用及潜在机制。方法用5、10、15 ng·mL^(-1)的TGF-β1诱导H1299细胞构建EMT模型;以15 ng·mL^(-1)的TGF-β1诱导H1299细胞作为EMT模型组,以法舒地尔(Fas)为阳性药,设置1、2、3μmol·L^(-1)的莲子心新碱实验组。采用倒置荧光显微镜观察诱导后的细胞形态;用CCK-8法检测莲子心新碱对H1299细胞的抑制率;Western Blot法检测细胞黏附因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)以及间充质标记物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及ROCK 1与P-Smad 2/3蛋白的表达;Transwell法检测莲子心新碱对TGF-β1诱导的H1299细胞侵袭、迁移的抑制作用;免疫荧光法检测H1299细胞内ROCK 1蛋白的表达及分布。结果TGF-β1诱导后H1299细胞形态呈现间充质特性。与对照组比较,随着TGF-β1浓度的升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05,P<0.01),N-cadherin与Vimentin表达明显升高(P<0.01,P<0.001),并且ROCK 1蛋白的表达也在这一过程中升高(P<0.05)。莲子心新碱可以抑制H1299细胞的活力,IC50为5.04μmol·L^(-1);同时与模型组比较,莲子心新碱抑制了TGF-β1促进的H1299细胞EMT过程及侵袭迁移作用(P<0.001),中、高剂量组明显增加E-cadherin蛋白的表达(P<0.05),明显减少N-cadherin和Vimentin蛋白的表达(P<0.001),还明显降低了H1299细胞内因TGF-β1诱导而升高的ROCK 1(P<0.001)和P-Smad2/3(P<0.001)蛋白的水平。免疫荧光结果显示莲子心新碱可以抑制TGF-β1诱导的H1299细胞胞质中ROCK 1蛋白的表达及分布。结论TGF-β1可以诱导H1299细胞发生EMT,莲子心新碱可以有效抑制这一过程,其机制可能是抑制了TGF-β1/Smad/RhoA/ROCK通路。

关键词：莲子心新碱(NeoL) H1299细胞 TGF-β1 ROCK 1 侵袭迁移

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莲子心新碱对肠系膜血管平滑肌收缩的抑制作用及分子机制

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南京中医药大学学报 2019年第3期35卷 313-318页

作者：张军利肖敏王鹏张弦潘扬杨光明南京中医药大学药学院江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023

目的研究莲子心新碱(Neo)对小鼠肠系膜血管及血管平滑肌细胞(VSMCs)收缩的抑制作用;并通过观察其对肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化和RhoA相关蛋白激酶(ROCK1)表达的影响,初步探讨引起该抑制的作用机制。方法采用离体微血管张力测定仪观察... 详细信息

目的研究莲子心新碱(Neo)对小鼠肠系膜血管及血管平滑肌细胞(VSMCs)收缩的抑制作用;并通过观察其对肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化和RhoA相关蛋白激酶(ROCK1)表达的影响,初步探讨引起该抑制的作用机制。方法采用离体微血管张力测定仪观察高钾溶液(KCl)对经Neo预处理后肠系膜血管收缩的影响,并通过Urea/glycerolPAGE法检测其MLC20磷酸化水平的变化。同时,利用成像分析技术考察高钾溶液对经Neo预处理后VSMCs收缩的影响,并通过细胞免疫荧光法测定VSMCs中ROCK1蛋白的表达水平。结果经Neo预处理后的肠系膜血管能明显抑制高钾溶液引起的收缩,其IC50值为6.019μmol/L;且可阻断高钾溶液产生MLC20磷酸化。另外,与模型组(KCl)VSMCs的长度(40.94±1.94)μm相比,药物组(Neo+KCl)VSMCs的长度(44.95±5.15)μm显著延长(P<0.01),其ROCK1蛋白的表达也明显下降。结论 Neo对肠系膜血管平滑肌收缩具有明显的抑制作用,其作用机制可能与阻断平滑肌MLC20磷酸化和下调其ROCK1蛋白表达有关。

关键词：莲子心新碱平滑肌收缩抑制作用 MLC20磷酸化 ROCK1

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镰形棘豆黄酮含药血清对人肺癌A549细胞活力、凋亡及周期的影响

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中药新药与临床药理 2019年第7期30卷 790-795页

作者：牛俐燃李冠聪张婉婷杨光明潘扬南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023

目的研究镰形棘豆黄酮提取物(OFF)含药血清对人肺腺癌A549细胞活力、细胞形态学、凋亡率及增殖周期的影响。方法将SD大鼠随机分为5组:空白对照组,阳性对照组(环磷酰胺CTX,40 mg·kg-1),OFF低剂量组(0.587 g·kg-1)、中剂量组(1.... 详细信息

目的研究镰形棘豆黄酮提取物(OFF)含药血清对人肺腺癌A549细胞活力、细胞形态学、凋亡率及增殖周期的影响。方法将SD大鼠随机分为5组:空白对照组,阳性对照组(环磷酰胺CTX,40 mg·kg-1),OFF低剂量组(0.587 g·kg-1)、中剂量组(1.174 g·kg-1)、高剂量组(2.348 g·kg-1);早晚各给药1次,连续4 d,制备含药血清。采用CCK-8法检测细胞活力;倒置显微镜观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞周期。结果在12、24、48 h给药时间内,OFF含药血清各剂量组的细胞活力随剂量递增呈抑制增强效果,且在24 h抑制作用最强,48 h抑制作用减弱,但与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P <0.001);倒置显微镜下观察, OFF含药血清作用24 h后,各剂量组的A549细胞均生长缓慢,细胞呈不规则形态。与空白对照组比较,OFF含药血清低、中、高剂量组的凋亡细胞比例上升,凋亡率分别为47.91%、55.09%、60.37%,差异均有统计学意义(P <0.001);OFF各剂量组的细胞周期中,G0/G1期细胞比例明显上升(P <0.01),S期(P<0.05,OFF高剂量组)及G2期(P<0.01,OFF中、高剂量组)比例下降。结论OFF含药血清对A549人肺腺癌细胞活力有较好的抑制作用,并能够诱导细胞凋亡,将细胞周期阻滞在G0/G1期。

关键词：镰形棘豆黄酮提取物含药血清 A549细胞细胞活力细胞凋亡细胞周期

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血根碱对小鼠肠系膜动脉血管平滑肌收缩的抑制作用及分子机制

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中药新药与临床药理 2019年第1期30卷 7-13页

作者：肖敏张军利王鹏杨光明潘扬南京中医药大学药学院江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023

目的研究血根碱(San)对小鼠肠系膜血管及血管平滑肌细胞(VSMCs)收缩的抑制作用;并观察其对RhoA相关蛋白激酶(ROCK1)表达的影响,探讨引起该抑制作用的作用机制。方法利用微血管张力测定仪(DMT),测定San对血管收缩工具药氯化钾(KCl)预收... 详细信息

目的研究血根碱(San)对小鼠肠系膜血管及血管平滑肌细胞(VSMCs)收缩的抑制作用;并观察其对RhoA相关蛋白激酶(ROCK1)表达的影响,探讨引起该抑制作用的作用机制。方法利用微血管张力测定仪(DMT),测定San对血管收缩工具药氯化钾(KCl)预收缩后微血管的张力影响,并计算血管平滑肌松弛作用的IC50值;进一步利用成像分析技术观测San对KCl预收缩VSMCs后的影响,最后通过蛋白免疫印迹以及细胞免疫荧光法测定San对VSMCs中ROCK1蛋白的表达水平的影响。结果与ROCK1抑制剂法舒地尔(Fas)比较(IC_(50)为14.34μmol·L^(-1)),San对KCl预收缩的肠系膜动脉的松弛作用较强,其IC50为1.098μmol·L^(-1),且呈现不(弱)可逆的趋势。进一步在细胞水平上验证,与模型组(KCl)VSMCs的长度(40.03±4.91)μm比较,药物组(KCl+San)VSMCs的长度(46.12±6.37)μm显著延长(P<0.01)。蛋白免疫印迹与免疫荧光结果发现San可显著抑制ROCK1蛋白表达(P<0.01)。结论 San对KCl诱导的肠系膜血管平滑肌收缩具有明显的抑制作用,其作用机制可能与调控ROCK1蛋白表达相关。

关键词：微血管张力测定血根碱血管平滑肌 ROCK1 抑制作用

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聚酰胺色谱法联合中压液相制备色谱法提取分离镰形棘豆中活性黄酮类成分

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世界中医药 2019年第2期14卷 278-282页

作者：牛俐燃李冠聪杨光明潘扬蔡宝昌南京中医药大学药学院南京210023 江苏省中药炮制重点实验室/国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所南京210023

目的:对藏药镰形棘豆中黄酮类成分进行提取分离,并将得到的黄酮化合物进行抗人肺腺癌A549细胞的活性筛选。方法:镰形棘豆药材浸提液经乙酸乙酯萃取,该萃取部位通过聚酰胺柱色谱梯度洗脱,结合中压液相制备色谱法进一步纯化分离,获得单一... 详细信息

目的:对藏药镰形棘豆中黄酮类成分进行提取分离,并将得到的黄酮化合物进行抗人肺腺癌A549细胞的活性筛选。方法:镰形棘豆药材浸提液经乙酸乙酯萃取,该萃取部位通过聚酰胺柱色谱梯度洗脱,结合中压液相制备色谱法进一步纯化分离,获得单一黄酮化合物,通过高效液相色谱法(HPLC)、质谱法(MS)及核磁共振波谱法(NMR)对化合物进行分析、鉴定;采用CCK-8法,检测黄酮化合物对人肺腺癌A549细胞的抑制作用。结果:从镰形棘豆的乙酸乙酯部位分离得到2个黄酮类单体,鉴定为7-羟基二氢黄酮及2',4'-二羟基二氢查尔酮,HPLC分析两者纯度均大于98%; CCK-8法结果显示,7-羟基二氢黄酮及2',4'-二羟基二氢查尔酮均能显著抑制A549细胞活力,并呈量效关系,48 h的IC50值分别为137. 6μg/m L和63. 83μg/m L。结论:分离得到的2个黄酮成分对A549细胞均有良好的抑制作用,为后期抗肺癌机制研究提供了实验基础。聚酰胺柱色谱法具有富集黄酮的作用,适用于分离黄酮类成分,聚酰胺色谱法联合中压制备液相色谱法,提取分离镰形棘豆中黄酮类成分,简便易行,为分离黄酮类成分提供参考。

关键词：镰形棘豆黄酮化合物聚酰胺色谱法中压制备色谱法 A549细胞质谱法

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分子对接虚拟筛选六味地黄方中α-葡萄糖苷酶抑制剂

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中国实验方剂学杂志 2018年第5期24卷 64-70页

作者：徐青青肖敏王鹏杨光明潘扬南京中医药大学药学院南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室南京210023

目的：传统名方六味地黄方（LWDH）对治疗2型糖尿病具有较好疗效,α-葡萄糖苷酶（α-GC）是2型糖尿病发生发展的关键靶点,该文采用虚拟筛选技术分析LWDH中抑制α-GC活性的有效成分。方法：从文献中获取LWDH中己知的21种主要化学成分及... 详细信息

目的：传统名方六味地黄方（LWDH）对治疗2型糖尿病具有较好疗效,α-葡萄糖苷酶（α-GC）是2型糖尿病发生发展的关键靶点,该文采用虚拟筛选技术分析LWDH中抑制α-GC活性的有效成分。方法：从文献中获取LWDH中己知的21种主要化学成分及代谢产物结构组成配体分子库,采用分子对接法将配体与α-GC的C端,N端分别逐一对接后,进行复合物自由结合能的数据分析;并以α-GC抑制剂阿卡波糖（ACR）的结合能作为阈值,预测LWDH中抑制α-GC活性潜在的有效成分。结果：与ACR和α-GC之N端,C端的结合能（-38.38,-36.38 J·mol-1）相比较,分别有2种LWDH的主要成分与α-GC的N端或C端结合能较低,其作用力主要为氢键和范德华力,且这几种成分均属于组成药物泽泻中的四环三萜类化合物。结论：基于分子对接的虚拟筛选可推断LWDH中抑制α-葡萄糖苷酶活性的有效物质,为深入开展六味地黄方治疗2型糖尿病的机理研究提供了科学数据。

关键词：六味地黄方虚拟筛选 α-葡萄糖苷酶抑制剂分子对接 2型糖尿病

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镰形棘豆脂溶性生物碱含药血清对人肺癌A549细胞活力、凋亡及周期的影响

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中药新药与临床药理 2018年第5期29卷 535-539页

作者：程海清牛俐燃李冠聪杨光明潘扬南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023

目的研究藏药镰形棘豆脂溶性生物碱(OFLA)含药血清对人肺腺癌A549细胞活力、凋亡及生长周期的影响。方法将SD大鼠随机分为5组:空白对照组,OFLA低、中、高剂量组(90,135,270 mg·kg^(-1))和阳性药组(环磷酰胺,36 mg·kg^(-1)),... 详细信息

目的研究藏药镰形棘豆脂溶性生物碱(OFLA)含药血清对人肺腺癌A549细胞活力、凋亡及生长周期的影响。方法将SD大鼠随机分为5组:空白对照组,OFLA低、中、高剂量组(90,135,270 mg·kg^(-1))和阳性药组(环磷酰胺,36 mg·kg^(-1)),连续给药5 d,制备含药血清。采用CCK-8法检测细胞活力;Annexin-VFITC/PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期。结果与空白对照组比较,OFLA各给药组的A549细胞活力在12,24,48 h均明显降低(P<0.01),不同浓度的OFLA含药血清均对A549细胞的活力有不同程度的抑制作用,呈现剂量依赖性,并且与作用时间呈正相关趋势。作用24 h后,OFLA各给药组均出现不同程度的细胞凋亡,低、中、高剂量组的细胞凋亡率分别为41.1%、57.6%、60.9%,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.001)。与空白对照组比较,OFLA含药血清中、高剂量组的G0/G1期细胞比例显著提高(P<0.05,P<0.01),S期细胞比例显著降低(P<0.05)。结论 OFLA可以抑制人肺癌A549细胞的活力,诱导细胞凋亡以及延缓细胞周期进程,将细胞生长周期阻滞在G0/G1期。

关键词：镰形棘豆含药血清 A549细胞细胞活力细胞凋亡细胞周期

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基于ROS/NF-κB信号通路的天南星凝集素致炎机制及炮制对蛋白的影响

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中华中医药杂志 2018年第5期33卷 1740-1746页

作者：王卫毛善虎单雪莲程梓烨陈云郁红礼吴皓南京中医药大学药学院南京210023 江苏省中药炮制重点实验室南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210023 国家中医药管理局中药炮制传承基地南京210023

目的:研究天南星科有毒中药天南星凝集素蛋白(AEL)的致炎机制及炮制对蛋白的影响。方法:通过体外培养RAW264.7巨噬细胞,经不同浓度AEL刺激1h后,ELISA法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放,Western blot... 详细信息

目的:研究天南星科有毒中药天南星凝集素蛋白(AEL)的致炎机制及炮制对蛋白的影响。方法:通过体外培养RAW264.7巨噬细胞,经不同浓度AEL刺激1h后,ELISA法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放,Western blot法检测p-IκB、IκB、p-p65、p65蛋白的表达,倒置荧光显微镜及荧光酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位及胞内游离钙离子水平;加入ROS的阻断剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)后,采用ELISA和Western blot法检测TNF-α、IL-1β及p-IκB、IκB、p-p65、p65蛋白表达的变化。采用8%白矾溶液炮制AEL,ELISA法检测炮制前后炎性因子TNF-α、IL-1β释放的变化。结果:AEL刺激巨噬细胞可导致炎性因子TNF-α、IL-1β大量释放,促进p-IκB、p-p65水平升高,导致巨噬细胞中ROS水平升高,线粒体膜电位降低以及胞内游离钙离子水平升高。当加入ROS的阻断剂NAC后,可明显降低ROS的生成,同时抑制了IκB、p65的磷酸化以及炎性因子TNF-α、IL-1β的大量释放。AEL经8%白矾溶液炮制后,能显著降低巨噬细胞炎性因子TNF-α、IL-1β的大量释放。结论:AEL刺激巨噬细胞后可诱导氧化应激,生成过量ROS,进而激活NF-κB炎性信号通路并导致炎性因子大量释放。AEL经白矾炮制后毒性降低,推测凝集素蛋白在白矾溶液中发生变性或降解,这可能是矾制天南星减毒的机制之一。

关键词：天南星凝集素炮制减毒炎性反应活性氧核因子-κB

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聚酰胺色谱法联合中压液相制备色谱法提取分离镰形棘豆中活性黄酮类成分

聚酰胺色谱法联合中压液相制备色谱法提取分离镰形棘豆中活性黄酮...

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世界中医药大会第五届夏季峰会

作者：牛俐燃李冠聪杨光明潘扬蔡宝昌南京中医药大学药学院江苏南京 210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京 210023 南京中医药大学药学院江苏南京 210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京 210023

目的对藏药镰形棘豆中黄酮类成分进行提取分离,并将得到的黄酮化合物进行抗人肺腺癌A549 细胞的活性筛选.方法镰形棘豆药材浸提液经乙酸乙酯萃取,该萃取部位通过聚酰胺柱色谱梯度洗脱,结合中压液相制备色谱法进一步纯化分离,获得单一... 详细信息

目的对藏药镰形棘豆中黄酮类成分进行提取分离,并将得到的黄酮化合物进行抗人肺腺癌A549 细胞的活性筛选.方法镰形棘豆药材浸提液经乙酸乙酯萃取,该萃取部位通过聚酰胺柱色谱梯度洗脱,结合中压液相制备色谱法进一步纯化分离,获得单一黄酮化合物,通过高效液相色谱法(HPLC)、质谱法(MS)及核磁共振波谱法(NMR)对化合物进行分析、鉴定;采用CCK-8 法,检测黄酮化合物对人肺腺癌A549 细胞的抑制作用.结果从镰形棘豆的乙酸乙酯部位分离得到两个黄酮类单体,鉴定为7-羟基二氢黄酮及2',4'-二羟基二氢查尔酮,HPLC 分析两者纯度均大于98％;CCK-8 法结果显示,7-羟基二氢黄酮及2',4'-二羟基二氢查尔酮均能显著抑制A549 细胞活力,并呈量效关系,48 h 的IC50 值分别为137.6 μg/mL 和63.83 μg/mL.结论分离得到的两个黄酮成分对A549 细胞均有良好的抑制作用,为后期抗肺癌机制研究提供了实验基础.聚酰胺柱色谱法具有富集黄酮的作用,适用于分离黄酮类成分,聚酰胺色谱法联合中压制备液相色谱法,提取分离镰形棘豆中黄酮类成分,简便易行,为分离黄酮类成分提供参考.

关键词：镰形棘豆黄酮化合物聚酰胺色谱法中压制备色谱法 A549细胞

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镰形棘豆黄酮抑制肺癌细胞活力及初步的机制研究

镰形棘豆黄酮抑制肺癌细胞活力及初步的机制研究

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中华中医药学会中药炮制分会2018年学术年会

作者：牛俐燃李冠聪张婉婷杨光明潘扬南京中医药大学药学院江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室南京中医药大学药学院南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023

采用血清药理学方法,研究镰形棘豆中黄酮提取物(OFF)含药血清,对人肺腺癌A549活力、细胞形态学、凋亡率及增殖周期的影响.SD大鼠随机分为：正常对照组,阳性对照组(环磷酰胺CTX,40mg·kg-1),低剂量组(58mg·mL-1),中剂量组(117 m... 详细信息

采用血清药理学方法,研究镰形棘豆中黄酮提取物(OFF)含药血清,对人肺腺癌A549活力、细胞形态学、凋亡率及增殖周期的影响.SD大鼠随机分为：正常对照组,阳性对照组(环磷酰胺CTX,40mg·kg-1),低剂量组(58mg·mL-1),中剂量组(117 mg·mL-1),高剂量组(235 mg·mL-1);早晚各给药1次,连续4天,制备各组含药血清后用于细胞实验.应用CCK-8法检测细胞活力;倒置显微镜观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞周期.

关键词：镰形棘豆黄酮提取物 A549细胞血清药理学抗癌机制

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