目的:观察电针刺激"足三里"、"三阴交"对吗啡耐受模型小鼠脑干转录组及cAMP-CREB信号通路激活水平的影响。方法:将50只C57BL/6J小鼠随机分为空白对照+束缚组、模型+束缚组、模型+假电针组、模型+电针组、模型+阳性对照组5组,每组10只。除空白对照+束缚组外,其余各组均经皮下予盐酸吗啡注射液(10mg/kg),2次/日,连续7天建立吗啡耐受模型。模型+假电针组"足三里"、"三阴交"束缚后仅给予针刺;模型+电针组同穴位束缚后给予针刺同时施加电刺激,频率2/100Hz,电流强度按0.5mA10min、1.0mA 10min、1.5mA 10min施加;模型+阳性对照组给予加巴喷丁(50mg/kg,ip)。第0和第8天利用热辐射甩尾法检测吗啡连续累积剂量-镇痛效应;采用热辐射甩尾和热板实验连续检测吗啡镇痛效力。采用转录组二代测序技术比较模型+束缚组、模型+电针组转录组表达差异,并利用实时荧光定量PCR技术进行初步验证。利用GO分析及KEGG分析进行通路富集分析。利用酶联免疫吸附法分析各组小鼠脑干cAMP含量水平。利用蛋白免疫印迹技术分析各组小鼠脑干cAMP-CREB信号通路内PKA、Erk及Creb的磷酸化水平。结果:经吗啡连续给药,与第0天(7.368,6.859 to 7.894)相比,模型+束缚组出现了明显的ED50右移(38.17,30.41 to 47.10)。而模型+电针组与模型+束缚组相比,ED50曲线向左显著移动(18.00,13.37 to 24.12);在甩尾实验中,与模型+束缚组相比,模型+电针组吗啡镇痛效果更好(P<0.05);而在热板实验实验中,也得到类似结果(P<0.05)。模型+束缚组、模型+电针组之间存在53个差异基因(Fold change>2,P<0.05),其中与模型+束缚组相比,m RNA水平上调基因11个,下调基因42个;经GO分析及KEGG分析提示cAMP相关信号通路可能参与了电针干预吗啡耐受形成机制。与空白对照+束缚组相比,模型+束缚组cAMP含量水平显著增高(P<0.05);与模型+束缚组相比,模型+电针组cAMP水平显著降低(P<0.05);与空白对照+束缚组相比,模型+束缚组PKA、ERK和CREB的磷化水平显著上调(P<0.01,P<0.01,P<0.01);而与模型+束缚组相比,模型+电针组cAMPPKA、ERK和CREB的磷化水平明显下调(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。结论:电针刺激小鼠"足三里"、"三阴交"可明显阻碍吗啡耐受的形成和发展,其机制可能与调节cAMP-PKA/ERK-CREB信号通路激活水平有关。
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