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中药新药与临床药理 2019年第7期30卷 790-795页

作者：牛俐燃李冠聪张婉婷杨光明潘扬南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023

目的研究镰形棘豆黄酮提取物(OFF)含药血清对人肺腺癌A549细胞活力、细胞形态学、凋亡率及增殖周期的影响。方法将SD大鼠随机分为5组:空白对照组,阳性对照组(环磷酰胺CTX,40 mg·kg-1),OFF低剂量组(0.587 g·kg-1)、中剂量组(1.... 详细信息

目的研究镰形棘豆黄酮提取物(OFF)含药血清对人肺腺癌A549细胞活力、细胞形态学、凋亡率及增殖周期的影响。方法将SD大鼠随机分为5组:空白对照组,阳性对照组(环磷酰胺CTX,40 mg·kg-1),OFF低剂量组(0.587 g·kg-1)、中剂量组(1.174 g·kg-1)、高剂量组(2.348 g·kg-1);早晚各给药1次,连续4 d,制备含药血清。采用CCK-8法检测细胞活力;倒置显微镜观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞周期。结果在12、24、48 h给药时间内,OFF含药血清各剂量组的细胞活力随剂量递增呈抑制增强效果,且在24 h抑制作用最强,48 h抑制作用减弱,但与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P <0.001);倒置显微镜下观察, OFF含药血清作用24 h后,各剂量组的A549细胞均生长缓慢,细胞呈不规则形态。与空白对照组比较,OFF含药血清低、中、高剂量组的凋亡细胞比例上升,凋亡率分别为47.91%、55.09%、60.37%,差异均有统计学意义(P <0.001);OFF各剂量组的细胞周期中,G0/G1期细胞比例明显上升(P <0.01),S期(P<0.05,OFF高剂量组)及G2期(P<0.01,OFF中、高剂量组)比例下降。结论OFF含药血清对A549人肺腺癌细胞活力有较好的抑制作用,并能够诱导细胞凋亡,将细胞周期阻滞在G0/G1期。

关键词：镰形棘豆黄酮提取物含药血清 A549细胞细胞活力细胞凋亡细胞周期

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莲子心新碱对肠系膜血管平滑肌收缩的抑制作用及分子机制

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南京中医药大学学报 2019年第3期35卷 313-318页

作者：张军利肖敏王鹏张弦潘扬杨光明南京中医药大学药学院江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023

目的研究莲子心新碱(Neo)对小鼠肠系膜血管及血管平滑肌细胞(VSMCs)收缩的抑制作用;并通过观察其对肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化和RhoA相关蛋白激酶(ROCK1)表达的影响,初步探讨引起该抑制的作用机制。方法采用离体微血管张力测定仪观察... 详细信息

目的研究莲子心新碱(Neo)对小鼠肠系膜血管及血管平滑肌细胞(VSMCs)收缩的抑制作用;并通过观察其对肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化和RhoA相关蛋白激酶(ROCK1)表达的影响,初步探讨引起该抑制的作用机制。方法采用离体微血管张力测定仪观察高钾溶液(KCl)对经Neo预处理后肠系膜血管收缩的影响,并通过Urea/glycerolPAGE法检测其MLC20磷酸化水平的变化。同时,利用成像分析技术考察高钾溶液对经Neo预处理后VSMCs收缩的影响,并通过细胞免疫荧光法测定VSMCs中ROCK1蛋白的表达水平。结果经Neo预处理后的肠系膜血管能明显抑制高钾溶液引起的收缩,其IC50值为6.019μmol/L;且可阻断高钾溶液产生MLC20磷酸化。另外,与模型组(KCl)VSMCs的长度(40.94±1.94)μm相比,药物组(Neo+KCl)VSMCs的长度(44.95±5.15)μm显著延长(P<0.01),其ROCK1蛋白的表达也明显下降。结论 Neo对肠系膜血管平滑肌收缩具有明显的抑制作用,其作用机制可能与阻断平滑肌MLC20磷酸化和下调其ROCK1蛋白表达有关。

关键词：莲子心新碱平滑肌收缩抑制作用 MLC20磷酸化 ROCK1

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血根碱对小鼠肠系膜动脉血管平滑肌收缩的抑制作用及分子机制

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中药新药与临床药理 2019年第1期30卷 7-13页

作者：肖敏张军利王鹏杨光明潘扬南京中医药大学药学院江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023

目的研究血根碱(San)对小鼠肠系膜血管及血管平滑肌细胞(VSMCs)收缩的抑制作用;并观察其对RhoA相关蛋白激酶(ROCK1)表达的影响,探讨引起该抑制作用的作用机制。方法利用微血管张力测定仪(DMT),测定San对血管收缩工具药氯化钾(KCl)预收... 详细信息

目的研究血根碱(San)对小鼠肠系膜血管及血管平滑肌细胞(VSMCs)收缩的抑制作用;并观察其对RhoA相关蛋白激酶(ROCK1)表达的影响,探讨引起该抑制作用的作用机制。方法利用微血管张力测定仪(DMT),测定San对血管收缩工具药氯化钾(KCl)预收缩后微血管的张力影响,并计算血管平滑肌松弛作用的IC50值;进一步利用成像分析技术观测San对KCl预收缩VSMCs后的影响,最后通过蛋白免疫印迹以及细胞免疫荧光法测定San对VSMCs中ROCK1蛋白的表达水平的影响。结果与ROCK1抑制剂法舒地尔(Fas)比较(IC_(50)为14.34μmol·L^(-1)),San对KCl预收缩的肠系膜动脉的松弛作用较强,其IC50为1.098μmol·L^(-1),且呈现不(弱)可逆的趋势。进一步在细胞水平上验证,与模型组(KCl)VSMCs的长度(40.03±4.91)μm比较,药物组(KCl+San)VSMCs的长度(46.12±6.37)μm显著延长(P<0.01)。蛋白免疫印迹与免疫荧光结果发现San可显著抑制ROCK1蛋白表达(P<0.01)。结论 San对KCl诱导的肠系膜血管平滑肌收缩具有明显的抑制作用,其作用机制可能与调控ROCK1蛋白表达相关。

关键词：微血管张力测定血根碱血管平滑肌 ROCK1 抑制作用

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正交优选小柴胡汤的提取工艺

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中药材 2012年第12期35卷 2036-2039页

作者：蔡皓庄延双刘晓蔡宝昌南京中医药大学药学院江苏南京210046 南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心/国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210029

目的:优选小柴胡汤的提取工艺。方法:采用水提取,HPLC法测定黄芩苷的含量,并用中国药典方法测定浸出物的含量,以黄芩苷的含量和浸出物的多少为考察指标,以加水量(8、10、12倍)、煎煮时间(30、40、60 min)、煎煮次数(1、2、3次)为主要影... 详细信息

目的:优选小柴胡汤的提取工艺。方法:采用水提取,HPLC法测定黄芩苷的含量,并用中国药典方法测定浸出物的含量,以黄芩苷的含量和浸出物的多少为考察指标,以加水量(8、10、12倍)、煎煮时间(30、40、60 min)、煎煮次数(1、2、3次)为主要影响因素,采用正交试验设计优选小柴胡汤的提取工艺。结果:用L9(34)正交法,筛选出的小柴胡汤的最佳提取工艺为:A1B2C2;通过方差分析确定了煎煮时间和煎煮次数为主要影响因素,对考察指标有显著性差异,加水量无显著性差异。结论:该优选确定的提取工艺合理可行,稳定可靠。

关键词：正交试验小柴胡汤提取工艺高效液相色谱法黄芩苷

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分子对接虚拟筛选六味地黄方中α-葡萄糖苷酶抑制剂

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中国实验方剂学杂志 2018年第5期24卷 64-70页

作者：徐青青肖敏王鹏杨光明潘扬南京中医药大学药学院南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室南京210023

目的：传统名方六味地黄方（LWDH）对治疗2型糖尿病具有较好疗效,α-葡萄糖苷酶（α-GC）是2型糖尿病发生发展的关键靶点,该文采用虚拟筛选技术分析LWDH中抑制α-GC活性的有效成分。方法：从文献中获取LWDH中己知的21种主要化学成分及... 详细信息

目的：传统名方六味地黄方（LWDH）对治疗2型糖尿病具有较好疗效,α-葡萄糖苷酶（α-GC）是2型糖尿病发生发展的关键靶点,该文采用虚拟筛选技术分析LWDH中抑制α-GC活性的有效成分。方法：从文献中获取LWDH中己知的21种主要化学成分及代谢产物结构组成配体分子库,采用分子对接法将配体与α-GC的C端,N端分别逐一对接后,进行复合物自由结合能的数据分析;并以α-GC抑制剂阿卡波糖（ACR）的结合能作为阈值,预测LWDH中抑制α-GC活性潜在的有效成分。结果：与ACR和α-GC之N端,C端的结合能（-38.38,-36.38 J·mol-1）相比较,分别有2种LWDH的主要成分与α-GC的N端或C端结合能较低,其作用力主要为氢键和范德华力,且这几种成分均属于组成药物泽泻中的四环三萜类化合物。结论：基于分子对接的虚拟筛选可推断LWDH中抑制α-葡萄糖苷酶活性的有效物质,为深入开展六味地黄方治疗2型糖尿病的机理研究提供了科学数据。

关键词：六味地黄方虚拟筛选 α-葡萄糖苷酶抑制剂分子对接 2型糖尿病

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莲子心新碱对转化生长因子β1诱导的H1299细胞侵袭和迁移的抑制作用及其机制

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中药新药与临床药理 2021年第10期32卷 1459-1467页

作者：张婉婷王歆竹米玉辉杨光明潘扬南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所江苏南京210023

目的构建转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)H1299细胞上皮-间充质转化(EMT)模型,并探讨莲子心新碱(Neoliensine,NeoL)对其侵袭和迁移能力的抑制作用及潜在机制。方法用5、10、15 ng·... 详细信息

目的构建转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)H1299细胞上皮-间充质转化(EMT)模型,并探讨莲子心新碱(Neoliensine,NeoL)对其侵袭和迁移能力的抑制作用及潜在机制。方法用5、10、15 ng·mL^(-1)的TGF-β1诱导H1299细胞构建EMT模型;以15 ng·mL^(-1)的TGF-β1诱导H1299细胞作为EMT模型组,以法舒地尔(Fas)为阳性药,设置1、2、3μmol·L^(-1)的莲子心新碱实验组。采用倒置荧光显微镜观察诱导后的细胞形态;用CCK-8法检测莲子心新碱对H1299细胞的抑制率;Western Blot法检测细胞黏附因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)以及间充质标记物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及ROCK 1与P-Smad 2/3蛋白的表达;Transwell法检测莲子心新碱对TGF-β1诱导的H1299细胞侵袭、迁移的抑制作用;免疫荧光法检测H1299细胞内ROCK 1蛋白的表达及分布。结果TGF-β1诱导后H1299细胞形态呈现间充质特性。与对照组比较,随着TGF-β1浓度的升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05,P<0.01),N-cadherin与Vimentin表达明显升高(P<0.01,P<0.001),并且ROCK 1蛋白的表达也在这一过程中升高(P<0.05)。莲子心新碱可以抑制H1299细胞的活力,IC50为5.04μmol·L^(-1);同时与模型组比较,莲子心新碱抑制了TGF-β1促进的H1299细胞EMT过程及侵袭迁移作用(P<0.001),中、高剂量组明显增加E-cadherin蛋白的表达(P<0.05),明显减少N-cadherin和Vimentin蛋白的表达(P<0.001),还明显降低了H1299细胞内因TGF-β1诱导而升高的ROCK 1(P<0.001)和P-Smad2/3(P<0.001)蛋白的水平。免疫荧光结果显示莲子心新碱可以抑制TGF-β1诱导的H1299细胞胞质中ROCK 1蛋白的表达及分布。结论TGF-β1可以诱导H1299细胞发生EMT,莲子心新碱可以有效抑制这一过程,其机制可能是抑制了TGF-β1/Smad/RhoA/ROCK通路。

关键词：莲子心新碱(NeoL) H1299细胞 TGF-β1 ROCK 1 侵袭迁移

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傅里叶变换红外光谱快速鉴别当归与硫磺熏蒸当归的研究

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中国中药杂志 2012年第8期37卷 1127-1132页

作者：娄雅静蔡皓刘晓裴科马晓青李松林蔡宝昌南京中医药大学药学院江苏南京210046 南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210029 南京中医药大学国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210029 江苏省中医药研究院中药分析和代谢组研究室江苏南京210028 南京海昌中药集团有限公司江苏南京210061

目的:利用傅里叶变换红外(FTIR)光谱法并结合二阶导数谱对当归与硫磺熏蒸当归进行快速鉴别。方法:采用傅里叶变换红外光谱法对当归与硫磺熏蒸当归的醇提物和水提物进行对比分析,并结合二阶导数进行进一步放大分析。结果:在红外光谱中非... 详细信息

目的:利用傅里叶变换红外(FTIR)光谱法并结合二阶导数谱对当归与硫磺熏蒸当归进行快速鉴别。方法:采用傅里叶变换红外光谱法对当归与硫磺熏蒸当归的醇提物和水提物进行对比分析,并结合二阶导数进行进一步放大分析。结果:在红外光谱中非熏当归与硫熏当归的醇提物和水提物均有差异,而通过具有高分辨力的二阶导数光谱对醇提物和水提物进行分析后,区分效果更加明显。红外光谱显示,在醇提物中,硫磺熏蒸后当归吸收峰明显减少,且有新吸收峰出现;水提物中,当归与硫磺熏蒸当归在1 000～400 cm-1波长的"指纹区"变化较明显。二阶导数光谱显示,在醇提物中,硫磺熏蒸当归在约3 578,3 541 cm-1吸收峰减弱和消失,约1 400～1 200 cm-1以及800～600 cm-1两者有较明显变化;水提物中,在约3 900～3 850 cm-1以及3 800～3 750 cm-1附近两者有差异。结论:利用傅里叶变换红外光谱法结合二阶导数可以高效、简便、准确地鉴别当归与硫磺熏蒸当归,为当归药材的质量控制提供鉴别依据。

关键词：当归硫磺熏蒸红外光谱二阶导数

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硫磺熏蒸前后中药菊花中金属元素及微量元素的ICP-AES检测

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药物分析杂志 2011年第6期31卷 1031-1034页

作者：马晓青蔡皓刘晓刘静静李松林宗杜强蔡宝昌南京中医药大学药学院南京210046 南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210029 南京中医药大学国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室南京210029 南京海昌中药集团南京210061

目的:对硫磺熏蒸前后中药菊花中金属元素和微量元素的含量进行分析研究。方法:采用微波消解法进行前处理,应用电感耦合等离子体发射光谱(ICP-AES)法测定含量。结果:中药菊花中Al、Fe、Mn、Zn等金属元素含量丰富,硫磺熏蒸前后S元素和Cu... 详细信息

目的:对硫磺熏蒸前后中药菊花中金属元素和微量元素的含量进行分析研究。方法:采用微波消解法进行前处理,应用电感耦合等离子体发射光谱(ICP-AES)法测定含量。结果:中药菊花中Al、Fe、Mn、Zn等金属元素含量丰富,硫磺熏蒸前后S元素和Cu元素的含量有显著性差异。结论:实验室自制硫磺熏蒸菊花药材,测试结果显示含有较多的S元素,推测中药菊花中S元素含量的增加可能与加工过程中使用硫磺熏蒸工艺有关,测定中药菊花中金属元素及微量元素的含量对于全面和客观评价其质量具有重要意义。

关键词：菊花金属元素微量元素微波消解电感耦合等离子体原子发射光谱法

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女贞子生品及炮制品的HPLC指纹图谱研究

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中草药 2016年第5期47卷 760-766页

作者：杨光明陈晓红刘路陆兔林蔡宝昌南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 青海大学医学院青海西宁810001

目的建立女贞子生品及其炮制品的HPLC指纹图谱。方法采用Purospher®STAR RP18 Endcapped(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长282 nm,柱温25℃;采用《中药色谱指纹图谱相... 详细信息

目的建立女贞子生品及其炮制品的HPLC指纹图谱。方法采用Purospher®STAR RP18 Endcapped(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长282 nm,柱温25℃;采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.130723版)软件进行分析。结果优化了HPLC色谱条件,在女贞子生品及其炮制品的谱图中分别标定了19个共有指纹特征峰,确定了红景天苷、女贞苷、特女贞苷、橄榄苦苷、oleonuezhenide 5个化合物,建立了10个不同批次的女贞子生品及炮制品HPLC指纹图谱,相似度高。结论该方法快速、简便、准确,符合指纹图谱技术要求,可作为控制女贞子质量的分析方法。

关键词：女贞子制女贞子指纹图谱 HPLC 质量评价

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大黄附子汤血清药物化学初步研究

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中草药 2013年第5期44卷 528-531页

作者：郭辉刘晓蔡皓李嬛吴丽蔡宝昌南京中医药大学药学院江苏南京210046 南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210046 南京中医药大学国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210046 南京海昌中药集团有限公司江苏南京210061

目的对大黄附子汤进行血清药物化学初步研究,通过分析入血成分探讨该复方发挥药效的物质基础。方法采用血清药物化学的研究方法,同时建立大黄附子汤及大鼠ig给予大黄附子汤后血清HPLC指纹图谱,通过分析比较分别给予大黄附子汤、单味生... 详细信息

目的对大黄附子汤进行血清药物化学初步研究,通过分析入血成分探讨该复方发挥药效的物质基础。方法采用血清药物化学的研究方法,同时建立大黄附子汤及大鼠ig给予大黄附子汤后血清HPLC指纹图谱,通过分析比较分别给予大黄附子汤、单味生药所得血清样品,初步鉴定大黄附子汤在大鼠血清中的移行成分。结果大鼠ig给予大黄附子汤后,血清中发现18个入血成分,其中14个为代谢产物;4个为原型成分。结论大黄附子汤入血成分主要来自大黄和附子,复方血清药物化学研究为深入阐述大黄附子汤药效物质基础提供依据。

关键词：大黄附子汤血清药物化学入血成分指纹图谱物质基础

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