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中国中药杂志 2020年第11期45卷 2546-2551页

作者：李书晖郁红礼吴皓张元斌王卫南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

为探究法半夏炮制过程对其毒性成分凝集素蛋白的影响,阐释法半夏炮制解毒的科学内涵,该研究采用Western blot法半定量分析炮制前后半夏中活性凝集素蛋白的含量;以甘草汁、石灰水以及两者混合溶液浸泡的方法分别处理半夏及凝集素蛋白,考... 详细信息

为探究法半夏炮制过程对其毒性成分凝集素蛋白的影响,阐释法半夏炮制解毒的科学内涵,该研究采用Western blot法半定量分析炮制前后半夏中活性凝集素蛋白的含量;以甘草汁、石灰水以及两者混合溶液浸泡的方法分别处理半夏及凝集素蛋白,考察炮制不同时间对毒性蛋白凝集素蛋白含量的影响;采用SDS-PAGE凝胶电泳分析炮制前后溶液及沉淀中凝集素蛋白的条带变化;采用MALDI-TOF技术对炮制前后的蛋白进行相对分子质量定性分析比较。结果显示,生半夏中含凝集素蛋白5.01%,而法半夏中仅含0.04%,表明炮制后活性凝集素含量显著降低;石灰水浸泡1 d、甘草汁浸泡3 d后,生品中凝集素含量显著降低,混合溶液浸泡的影响最大。定性分析发现,使用石灰水浸泡后,凝集素蛋白被分解为小分子的肽段,甘草汁浸泡,可促使凝集素蛋白变性沉淀。法半夏炮制过程中辅料甘草汁和石灰水浸泡均可破坏毒性成分凝集素蛋白结构,显著降低毒性成分凝集素蛋白的含量,此为法半夏炮制解毒机制之一。

关键词：半夏毒性成分炮制凝集素蛋白

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甘草汁炮制半夏对毒性成分凝集素蛋白的影响

甘草汁炮制半夏对毒性成分凝集素蛋白的影响

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第十四届全国中医药博士生学术论坛

作者：陶兴宝曹纬国吴皓重庆中医药学院中药系重庆 402760 重庆中医药学院博士后工作站重庆 400011 重庆中医药学院中药系重庆 402760 南京中医药大学药学院南京 210023 江苏省中药炮制重点实验室南京 210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京 210023

目的：研究法半夏炮制过程中炮制辅料甘草汁浸泡对其毒性成分凝集素蛋白的影响.方法：以Western Blot法考察甘草汁(醇沉上清液、醇沉沉淀、甘草酸溶液)浸泡对凝集素蛋白含量的影响.采用SDS-PAGE法结合银染技术测定甘草汁及甘草酸溶液浸... 详细信息

目的：研究法半夏炮制过程中炮制辅料甘草汁浸泡对其毒性成分凝集素蛋白的影响.方法：以Western Blot法考察甘草汁(醇沉上清液、醇沉沉淀、甘草酸溶液)浸泡对凝集素蛋白含量的影响.采用SDS-PAGE法结合银染技术测定甘草汁及甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后上清液与沉淀中的蛋白组成;以MALDI-TOF MS/MS技术检测甘草汁及甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后上清液及沉淀中肽段分子量分布;以等电点沉淀法测定凝集素蛋白等电点,并测定其Zeta电位变化考察甘草汁及甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后对其等电点的影响;同时,采用透射电镜观察甘草汁及甘草酸溶液浸泡对凝集素蛋白聚合作用的影响.结果：甘草汁、甘草汁醇沉上清液及甘草酸溶液浸泡均可使凝集素蛋白含量显著降低(P＜0.05).甘草汁及甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后的上清液和沉淀均在12 kDa位置出现凝集素蛋白对应的条带,且上清液对应的凝集素蛋白条带与沉淀对应的凝集素蛋白条带相比明显变浅.凝集素蛋白的等电点pH约为5～6,甘草汁及甘草酸溶液的pH分别为5.25、5.62.甘草酸溶液浸泡凝集素蛋白后其Zeta电位接近于0,达到等电点而沉淀.甘草汁、甘草酸溶液及甘草汁石灰水共同浸泡凝集素蛋白后出现大量聚集体,形成超分子自组装复合物结构而加速其沉淀.结论：甘草汁在法半夏炮制过程中解毒机制为甘草汁中甘草酸浸泡凝集素蛋白可使其达到等电点,促进其超分子自组装,改变溶解度而沉淀.甘草汁与石灰水在炮制过程中以协同作用形成超分子自组装复合物而解毒.

关键词：半夏甘草汁凝集素蛋白炮制解毒机理

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半夏水煎液不同部位拮抗小鼠呼吸道炎症作用及其效应部位成分分析

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中国中药杂志 2021年第22期46卷 5912-5921页

作者：薛凡郁红礼刘睿吴皓张元斌刘东方张萍陈盛君李松南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 南京中医药大学江苏省海洋药用生物资源研究与开发重点实验室江苏南京210023 南京中医药大学江苏省中药资源产业化过程协同创新中心江苏南京210023 中国食品药品检定研究院北京100050 江阴天江药业有限公司江苏江阴214400 嘉善县中医医院浙江嘉兴314100

探究半夏水煎液治疗呼吸道炎症的物质基础及作用机制。采用香烟烟雾联合脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠呼吸道炎症模型,以小鼠肺泡灌洗液(broncho-alveolar lavage fluid,BALF)中炎症因子IL-6、IL-8表达水平,肺组织p38、Iκ... 详细信息

探究半夏水煎液治疗呼吸道炎症的物质基础及作用机制。采用香烟烟雾联合脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠呼吸道炎症模型,以小鼠肺泡灌洗液(broncho-alveolar lavage fluid,BALF)中炎症因子IL-6、IL-8表达水平,肺组织p38、IκB蛋白及其磷酸化水平为指标;采用香烟提取物(cigarette smoke extraction,CSE)诱导的支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cell,16-HBE)损伤模型,以胞内IL-6、IL-8 mRNA表达水平及炎症信号通路关键蛋白p38、IκB蛋白及其磷酸化水平为指标,评价半夏水煎液不同部位的抗炎作用。结果表明,半夏水煎液具有显著的拮抗小鼠呼吸道炎症的作用,能下调呼吸道炎症小鼠及CSE诱导16-HBE细胞炎症因子IL-6、IL-8表达水平,抑制p38、IκB蛋白磷酸化;半夏水煎液的二氯甲烷、乙酸乙酯部位具有显著的拮抗炎症作用,其他部位无明显作用。同时构建半夏成分结构数据库,采用HPLC-TOF-MS和Nano-LC-MS/MS对效应部位成分进行成分组成分析,结果显示2个效应部位的成分组成类型相似,故合并2个部位后以阳离子交换树脂分为生物碱部位与非生物碱部位。体外效应研究结果显示,半夏的非生物碱部位具有显著的抗炎效应,但生物碱部位无明显作用。质谱分析结果显示,半夏非生物碱部位含有172种多肽和7种有机酸。以BCA法测定半夏非生物碱部位中肽质量分数为63.5%,以电位滴定法测定有机酸质量分数为9.92%。半夏水煎液可通过抑制p38、IκB磷酸化,阻断MAPK、NF-κB信号通路活化发挥拮抗小鼠呼吸道炎症作用,其效应成分可能与其所含的肽类、有机酸类成分相关。

关键词：半夏呼吸道炎症 p38 MAPK/NF-κB 非生物碱部位

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炮制辅料生石灰的质量标准研究

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时珍国医国药 2020年第11期31卷 2638-2640页

作者：李书晖郁红礼吴皓张元斌南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

目的建立辅料生石灰的质量标准,以保证法半夏的炮制辅料生石灰的质量稳定。方法收集了市售不同厂家的生石灰14批,对其进行了理化鉴别研究,同时测定了酸中不溶物、灼烧减量以及镁和碱金属含量,以此三项作为生石灰的检查项,并以乙二胺四... 详细信息

目的建立辅料生石灰的质量标准,以保证法半夏的炮制辅料生石灰的质量稳定。方法收集了市售不同厂家的生石灰14批,对其进行了理化鉴别研究,同时测定了酸中不溶物、灼烧减量以及镁和碱金属含量,以此三项作为生石灰的检查项,并以乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)滴定生石灰中的钙离子,并以钙离子折算的氧化钙含量作为生石灰中的氧化钙含量。结果初步制定了炮制辅料生石灰的质量标准。结论初步制定的中药炮制辅料生石灰质量标准,方法简便可靠,为中药炮制辅料生石灰的质量标准研究奠定基础。

关键词：辅料生石灰氧化钙质量标准

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甘遂醋制前后萜类成分效应部位抗腹水、泻下作用及组成变化研究

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南京中医药大学学报 2020年第5期36卷 647-654页

作者：刘东方郁红礼薛凡张元斌吴皓崔小兵王迅靳荐凯南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 江苏省中医院/南京中医药大学附属医院江苏南京210029

目的探究甘遂醋制前后抗腹水、泻下作用及组成变化。方法将甘遂用二氯甲烷和95%乙醇依次提取,获得二氯甲烷部位及非二氯甲烷部位。采用癌性腹水小鼠模型,以腹水量、粪便含水量、尿量及肠道水通道蛋白(AQP)1、AQP3的蛋白表达水平为指标,... 详细信息

目的探究甘遂醋制前后抗腹水、泻下作用及组成变化。方法将甘遂用二氯甲烷和95%乙醇依次提取,获得二氯甲烷部位及非二氯甲烷部位。采用癌性腹水小鼠模型,以腹水量、粪便含水量、尿量及肠道水通道蛋白(AQP)1、AQP3的蛋白表达水平为指标,筛选甘遂效应部位,考察甘遂醋制前后效应部位二氯甲烷提取部位的抗腹水及泻下作用变化。同时对二氯甲烷部位及非二氯甲烷部位,以及醋制前后二氯甲烷部位各成分的相对含量变化进行质谱分析。结果与模型组相比,生甘遂总提物组、二氯甲烷提取部位高剂量组小鼠腹水量和十二指肠、空肠、回肠及结肠AQP1、AQP3蛋白的表达量均显著降低,粪便含水量显著增加,对尿量无影响;非二氯甲烷部位组无明显降低腹水及增加粪便含水量的作用,表明甘遂二氯甲烷部位是其主要效应部位;与模型组相比,醋品二氯甲烷部位高剂量组仍可显著降低癌性腹水小鼠的腹水量,增加粪便含水量,显著降低十二指肠、空肠、回肠中AQP1、AQP3蛋白表达,但对结肠AQP1和AQP3蛋白表达量无显著影响。与生品二氯甲烷部位组相比,醋制后甘遂二氯甲烷部位组小鼠腹水量显著升高,粪便含水量显著降低。此外,甘遂对腹水中癌细胞存活率没有影响,不能促使其凋亡。质谱分析发现,甘遂中萜类成分主要富集于二氯甲烷部位中,且醋制后二氯甲烷部位16个萜类成分中12个成分相对含量减少,4个成分含量增加。结论甘遂醋制后仍保留“泻水逐饮”功效,但泻下作用缓和,效应的变化可能与所含萜类成分的组成变化有关。

关键词：甘遂醋制癌性腹水模型 AQP1 AQP3

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基于GC-MS技术研究炮制对白术芍药散中挥发性成分的影响

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南京中医药大学学报 2020年第1期36卷 94-101页

作者：孙戡平谢莉秦昆明金俊杰杨超刘晓蔡宝昌南京中医药大学药学院江苏南京210023 南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 南京海昌中药集团有限公司江苏南京210061 南京海源中药饮片有限公司江苏南京210061

目的采用GC-MS技术针对白术芍药散挥发性成分组成进行鉴别分析,同时与药材未经炮制即配伍入药的情况进行比较,探讨药物炮制过程对白术芍药散中挥发性成分的影响。方法利用水蒸气蒸馏法提取白术芍药散的挥发油,稀释后经GC-MS进行成分分... 详细信息

目的采用GC-MS技术针对白术芍药散挥发性成分组成进行鉴别分析,同时与药材未经炮制即配伍入药的情况进行比较,探讨药物炮制过程对白术芍药散中挥发性成分的影响。方法利用水蒸气蒸馏法提取白术芍药散的挥发油,稀释后经GC-MS进行成分分析鉴别,结合NIST 11数据库和Wiley谱库对样品中成分匹配定性,并利用归一化法计算各成分相对含量。结果经数据整理分析得炮制前后样品同时匹配出145种成分,其中萜烯烃及含氧萜烯类化合物居多,炮制后消失的成分15种,新出现成分17种。结论饮片是否经过炮制后配伍入药对于白术芍药散挥发性成分的组成具有一定影响,古籍中所载白术芍药散应采用炮制品进行组方用药具有现实的客观原因与深刻的科学内涵。

关键词：白术芍药散炮制挥发性成分 GC-MS 汤剂

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醋制对商陆促利尿作用的影响及其机制研究

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南京中医药大学学报 2019年第2期35卷 156-159页

作者：程梓烨郁红礼吴皓王卫张元斌单雪莲陈云李书晖曹婧南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

目的探索毒性中药商陆醋制前后对机体利尿作用及相关指标的影响。方法灌胃给予盐水负荷模型大鼠商陆醋制前后的水煎液,测定给药5h内尿量变化、血浆抗利尿激素(ADH)、醛固酮(ALD)、心房钠尿肽(ANP)含量及肾脏水通道蛋白AQP2、AQP3、AQP4... 详细信息

目的探索毒性中药商陆醋制前后对机体利尿作用及相关指标的影响。方法灌胃给予盐水负荷模型大鼠商陆醋制前后的水煎液,测定给药5h内尿量变化、血浆抗利尿激素(ADH)、醛固酮(ALD)、心房钠尿肽(ANP)含量及肾脏水通道蛋白AQP2、AQP3、AQP4表达水平。结果商陆醋制前后均能导致大鼠尿量显著增加(P<0.01),醋制品较生品组大鼠尿量有显著增强(P<0.05);商陆生品仅高剂量可显著降低血浆ADH水平(P<0.01),同时有降低ALD、增加ANP水平的趋势,但无显著性差异;商陆醋品则可显著降低血浆ADH、ALD水平,升高ANP含量(P<0.05～0.01);商陆生品可显著抑制肾脏中AQP2、AQP3和AQP4蛋白表达(P<0.05～0.01),醋制后可显著抑制AQP2、AQP3蛋白表达水平(P<0.01),对AQP4蛋白表达与模型组相比无显著性影响,且醋制品较生品抑制AQP3蛋白表达更显著(P<0.05)。结论商陆经醋制后仍具有较强的利尿作用,且分子水平的效应比生品更强。商陆利尿作用的机制除与其改变机体体液代谢相关的激素水平外,还可能与其抑制肾脏远曲小管和集合管AQPs蛋白表达,进而抑制水的重吸收有关。

关键词：商陆醋制利尿作用抗利尿激素醛固酮心房钠尿肽水通道蛋白

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炮制对天南星科4种有毒中药毒性成分凝集素蛋白的影响

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中国中药杂志 2019年第24期44卷 5398-5404页

作者：郁红礼王卫吴皓沈敏张元斌李书晖南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 苏州卫生职业技术学院江苏苏州215009

为研究炮制对天南星4种有毒中药半夏、掌叶半夏、天南星、白附子中毒性成分凝集素蛋白的影响,该研究采用Western blot(蛋白质印迹)法半定量分析4种有毒中药生品及其不同炮制品中凝集素蛋白含量,并以生姜汁浸泡、白矾水浸泡以及单独加热... 详细信息

为研究炮制对天南星4种有毒中药半夏、掌叶半夏、天南星、白附子中毒性成分凝集素蛋白的影响,该研究采用Western blot(蛋白质印迹)法半定量分析4种有毒中药生品及其不同炮制品中凝集素蛋白含量,并以生姜汁浸泡、白矾水浸泡以及单独加热煮制的方法分别处理4种生品及4种凝集素蛋白,考察不同辅料及加热方法对凝集素蛋白的影响。结果显示,掌叶半夏、半夏、天南星和白附子生品中各凝集素蛋白的质量分数分别为7.3%,4.9%,2.7%,2.3%,清半夏中半夏凝集素的质量分数为0.027%,姜半夏、制天南星和制白附子中均检测不到活性凝集素蛋白,表明炮制后活性凝集素含量显著降低;且随着白矾水浸泡时间或加热时间的延长,生品中凝集素含量逐渐降低。而单独生姜汁浸泡对生品中凝集素蛋白的含量几乎无影响。不同辅料及加热煮制的方法直接处理凝集素蛋白对其产生的影响与对生品产生的影响一致。故复制法以白矾浸泡及加热煮制的炮制方法可促使有毒中药中毒性成分活性凝集素蛋白的含量降低,这是有毒中药毒性下降的关键。该研究以Western blot法检测天南星科有毒中药毒蛋白凝集素蛋白的含量水平可作为炮制程度的评价方法。

关键词：天南星科毒性炮制凝集素蛋白

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生、炒酸枣仁水提液指纹图谱对比研究

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南京中医药大学学报 2019年第5期35卷 585-589页

作者：刘晓朱晓钗谢莉朱小芳蔡宝昌南京中医药大学药学院江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 南京海昌中药集团有限公司江苏南京210061

目的分别建立生、炒酸枣仁水提液的指纹图谱,拟从整体水平表征酸枣仁炒制前后化学成分发生的变化,同时以此指导酸枣仁的炒制工艺优化。方法采用Hypersil GOLD C18色谱柱,0.1%甲酸水溶液乙腈为流动相进行梯度洗脱,体积流量1 mL/min,检测... 详细信息

目的分别建立生、炒酸枣仁水提液的指纹图谱,拟从整体水平表征酸枣仁炒制前后化学成分发生的变化,同时以此指导酸枣仁的炒制工艺优化。方法采用Hypersil GOLD C18色谱柱,0.1%甲酸水溶液乙腈为流动相进行梯度洗脱,体积流量1 mL/min,检测波长280 nm,分别测定不同产地不同批次生、炒酸枣仁水提液的指纹图谱,利用中药指纹图谱相似度评价系统(2012A版)进行相似度比较,同时使用主成分分析方法对2种酸枣仁样品分别进行模式识别。结果同时建立了生、炒酸枣仁的水提液指纹图谱共有模式,确定了生酸枣仁水提液样品中的10个共有峰和炒酸枣仁水提液样品中的12个共有峰,并利用模式识别方法对生、炒酸枣仁加以区分。对比标准图谱,确定在130~150℃的炒制温度范围内,酸枣仁炒制最佳时间为7 min。结论采用指纹图谱结合模式识别的方式能够有效区分生、炒酸枣仁水提液样品,同时为酸枣仁的质量评价与炮制工艺优化提供参考。

关键词：酸枣仁指纹图谱炮制工艺主成分分析

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狼毒醋制前后对小鼠肠道毒性及结肠水通道蛋白表达的影响

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中国中药杂志 2018年第12期43卷 2516-2521页

作者：刘莲郁红礼王奎龙吴皓王卫张元斌于生尹厚庆南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023

为研究狼毒炮制前后毒性变化规律,以氯仿为提取溶剂,富集狼毒二萜类成分毒性部位,并将氯仿提取后药渣以95%乙醇及水依次提取,得非氯仿部位;并以相同方法提取狼毒醋制后的氯仿提取部位。小鼠灌胃给药,以粪便含水量、十二指肠及结肠含水... 详细信息

为研究狼毒炮制前后毒性变化规律,以氯仿为提取溶剂,富集狼毒二萜类成分毒性部位,并将氯仿提取后药渣以95%乙醇及水依次提取,得非氯仿部位;并以相同方法提取狼毒醋制后的氯仿提取部位。小鼠灌胃给药,以粪便含水量、十二指肠及结肠含水量及小鼠结肠组织的水通道蛋白AQP1,AQP3,AQP4蛋白表达水平为指标,考察氯仿提取部位与非氯仿部位,及醋制前后狼毒的肠道毒性变化。研究结果显示,狼毒氯仿毒性部位可导致小鼠粪便及十二指肠、结肠肠道含水量显著升高,并导致结肠AQP1蛋白表达水平显著降低,AQP3,AQP4蛋白表达水平显著增高,且氯仿部位的肠道毒性作用显著高于非氯仿部位;醋制后粪便含水量、十二指肠及结肠含水量均显著下降,结肠中AQPs蛋白表达趋向正常。结果表明狼毒氯仿毒性部位可导致小鼠腹泻、肠道水肿,其肠道毒性作用与其干扰结肠中水通道蛋白的表达、促使肠道水液转运失常相关;醋制能够降低狼毒的肠道毒性,表明中药传统醋制法炮制狼毒的科学性。

关键词：狼毒醋制法肠道毒性水通道蛋白醋制减毒

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