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药学学报 2016年第6期51卷 972-978页

作者：李秀杨段素敏刘欢欢徐金娣孔铭刘红权李松林南京中医药大学附属中西医结合医院中药质量研究室江苏南京210028 江苏省中医药研究院中药代谢组研究室江苏南京210028 南京中医药大学附属中西医结合医院神经内科江苏南京210028

二氧化硫残留量是当前硫熏药材检控的法定指标,但该指标能否客观反映药材硫熏程度有待深入研究。牡丹皮硫熏后会产生特征含硫衍生物。本文采用UPLC-QTOF-MS/MS对硫熏牡丹皮中特征含硫衍生物进行确证,并对贮藏前后特征含硫衍生物的量与... 详细信息

二氧化硫残留量是当前硫熏药材检控的法定指标,但该指标能否客观反映药材硫熏程度有待深入研究。牡丹皮硫熏后会产生特征含硫衍生物。本文采用UPLC-QTOF-MS/MS对硫熏牡丹皮中特征含硫衍生物进行确证,并对贮藏前后特征含硫衍生物的量与二氧化硫残留量进行统计学分析。发现贮藏可导致药材中二氧化硫残留量显著下降,但特征含硫衍生物含量没有明显改变,说明二氧化硫残留量不一定能真正反映牡丹皮的硫熏程度,以特征含硫衍生物作为硫熏药材的检控指标更具适用性。

关键词：牡丹皮硫熏二氧化硫残留特征含硫衍生物 UPLC-QTOF-MS/MS

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提取浓缩对琼玉膏品质一致性的影响

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中草药 2016年第7期47卷 1106-1111页

作者：汤亚沈红武洁徐金娣李松林南京中医药大学附属中西医结合医院中药质量研究室江苏南京210028 江苏省中医药研究院中药代谢组研究室江苏南京210028

目的研究较长时间提取和浓缩对琼玉膏品质的影响,探讨琼玉膏主成分在提取和浓缩过程中的降解、转化机制。方法采用HPLC-MS方法同时测定琼玉膏中主要活性成分5-羟甲基糠醛、梓醇、密力特苷、毛蕊花糖苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂... 详细信息

目的研究较长时间提取和浓缩对琼玉膏品质的影响,探讨琼玉膏主成分在提取和浓缩过程中的降解、转化机制。方法采用HPLC-MS方法同时测定琼玉膏中主要活性成分5-羟甲基糠醛、梓醇、密力特苷、毛蕊花糖苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷20(S)-Rg3、人参皂苷Rg1、人参皂苷Ro和茯苓酸,比较不同提取和浓缩时间重复制备样品中10种成分质量分数标准差(SD)的累加值,考察提取和浓缩时间对琼玉膏品质的影响。结果随着提取和浓缩时间的延长,10种活性成分的总量和部分成分的相对质量分数显著改变,同时重复制备样品质量分数误差累加值随提取和浓缩时间延长呈下降趋势。结论提取和浓缩时间可显著影响琼玉膏活性成分转化程度,从而影响其品质的一致性。

关键词：琼玉膏提取浓缩品质 5-羟甲基糠醛梓醇密力特苷毛蕊花糖苷人参皂苷Re 人参皂苷Rb1 人参皂苷20(S)-Rg3 人参皂苷Rg1 人参皂苷Ro 茯苓酸一致性

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整合UPLC-QTOF-MS/MS全扫描和模拟MRM方法综合评价茯苓乙醇提取物与后续乙酸乙酯萃取物三萜酸类组分化学一致性

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药学学报 2019年第1期54卷 130-137页

作者：邹叶廷徐金娣龙芳张业清李松林南京中医药大学附属中西医结合医院中药质量研究室江苏南京210028 江苏省中医药研究院和中国中医科学院江苏分院中药代谢组研究室江苏南京210028 南京中医药大学附属中西医结合医院呼吸科江苏南京210028

本研究采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF-MS/MS)对茯苓乙醇提取物与后续乙酸乙酯萃取物中三萜酸类成分的化学一致性进行评价。通过全扫描高分辨质谱数据分析,对茯苓的乙醇提取物和后续乙酸乙酯萃取物中的化学组成... 详细信息

本研究采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF-MS/MS)对茯苓乙醇提取物与后续乙酸乙酯萃取物中三萜酸类成分的化学一致性进行评价。通过全扫描高分辨质谱数据分析,对茯苓的乙醇提取物和后续乙酸乙酯萃取物中的化学组成进行定性比较,结合文献及对照品数据对照,共鉴定出23个主要三萜酸类成分。利用模拟三重四级杆质谱(TQ-MS)的多反应监控(mMRM)模式对上述23个主要成分进行定量或相对定量分析,并计算三萜酸类组分在萃取过程中的转移率和富集率。结果表明,乙酸乙酯萃取物与乙醇提取物化学组成基本一致,萃取过程中三萜酸类成分转移率高,通过萃取可有效富集三萜酸类组分。本研究不但为科学评估后续乙酸乙酯萃取茯苓三萜酸类组分的必要性提供依据,而且为综合评价中药提取物在萃取前后的化学一致性提供了参考方法。

关键词：茯苓三萜酸萃取化学一致性 UPLC-QTOF-MS/MS

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整合糖组与代谢组学方法比较蒸制和酒炖熟地黄化学成分

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中草药 2021年第6期52卷 1591-1600页

作者：张晓亚徐金娣许军邹叶廷龙芳李松林南京中医药大学附属中西医结合医院中药质量研究室江苏南京210028 江苏省中医药研究院和中国中医科学院江苏分院中药代谢组研究室江苏南京210028 南京中医药大学附属中西医结合医院呼吸科江苏南京210028

目的对《中国药典》收载的蒸制和酒炖2种炮制法所得熟地黄的化学成分进行比较研究。方法整合基于HPLC(C18)-PDA、HPLC(NH2)-ELSD和高效凝胶渗透色谱(HPGPC)-ELSD的糖组学和基于UPLC-QTOF-MS/MS的代谢组学方法,对2种熟地黄的糖类组分(多... 详细信息

目的对《中国药典》收载的蒸制和酒炖2种炮制法所得熟地黄的化学成分进行比较研究。方法整合基于HPLC(C18)-PDA、HPLC(NH2)-ELSD和高效凝胶渗透色谱(HPGPC)-ELSD的糖组学和基于UPLC-QTOF-MS/MS的代谢组学方法,对2种熟地黄的糖类组分(多糖、寡糖和游离单糖)和非糖小分子组分进行分析比较。结果与蒸制地黄相比,酒炖地黄多糖相对分子质量范围更宽,较大相对分子质量多糖占比较高。2种熟地黄多糖均由甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,但其物质的量比稍有不同(2.57∶0.05∶1.00∶0.87∶0.10vs2.07∶0.07∶1.00∶1.05∶0.17)。2种熟地黄均含有寡糖水苏糖、甘露三糖和蜜二糖,但酒炖地黄中水苏糖含量显著高于蒸制地黄(P<0.01)。2种熟地黄均含有游离单糖葡萄糖、果糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖和阿拉伯糖,但酒炖地黄中葡萄糖(P<0.01)、鼠李糖(P<0.05)和甘露糖(P<0.05)含量均显著低于蒸制地黄,而半乳糖含量显著高于蒸制地黄(P<0.05)。2种熟地黄中共筛选到29个差异性非糖小分子成分,主要为环烯醚萜苷类、苯乙醇苷类和呋喃醛衍生物。代表性成分定量分析表明,与蒸制地黄相比,酒炖地黄中梓醇、益母草苷和地黄苷D含量较高(P<0.01),密力特苷(P<0.05)和5-羟甲基糠醛(P<0.01)含量较低。结论蒸制和酒炖地黄内在质量存在显著差异,这种内在质量差异是否会显著影响其药效仍有待深入研究。

关键词：熟地黄蒸制酒炖糖组学代谢组学 HPLC 高效凝胶渗透色谱 UPLC-QTOF-MS/MS 多糖寡糖游离单糖甘露糖半乳糖醛酸葡萄糖半乳糖阿拉伯糖水苏糖甘露三糖蜜二糖果糖鼠李糖环烯醚萜苷类苯乙醇苷类呋喃醛衍生物梓醇益母草苷地黄苷D 密力特苷 5-羟甲基糠醛

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重楼提取物抗骨肉瘤作用及机制研究

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中草药 2019年第1期50卷 120-128页

作者：任可周静李振麟钱士辉李贺王宸东南大学附属中大医院骨科江苏南京210009 南京中医药大学附属中西医结合医院中药质量与代谢组研究室江苏南京210028 江苏省中医药研究院中药质量与代谢组研究室江苏南京210028

目的探讨重楼提取物(PPEE)抗骨肉瘤作用及其机制。方法不同质量浓度的PPEE处理骨肉瘤细胞,采用MTT法、Hoechst 33342染色、流式细胞术、Matrigel培养、免疫印迹法分别检测细胞增殖抑制率、细胞凋亡、细胞周期、血管生成拟态(VM)形成及... 详细信息

目的探讨重楼提取物(PPEE)抗骨肉瘤作用及其机制。方法不同质量浓度的PPEE处理骨肉瘤细胞,采用MTT法、Hoechst 33342染色、流式细胞术、Matrigel培养、免疫印迹法分别检测细胞增殖抑制率、细胞凋亡、细胞周期、血管生成拟态(VM)形成及相关蛋白表达情况。裸鼠移植瘤模型观察PPEE的体内抑瘤效果。结果 PPEE对骨肉瘤细胞半数抑制浓度(IC50)为10～60μg/m L,对成骨细胞增殖影响较小。PPEE可浓度依赖性地将骨肉瘤143B细胞阻滞在G2/M期,上调细胞周期相关蛋白p-CDK1、p-Cdc25C、p-Chk2表达,下调cyclinB1表达;促进细胞凋亡,上调cleavedCaspase-3、8、9和PARP表达,上调Bax/Bcl-2;抑制细胞体外VM形成,下调FAK、Mig-7、MMP-2和MMP-9表达。体内实验显示PPEE能明显抑制骨肉瘤生长和体内VM形成,延长荷瘤裸鼠生存期。结论 PPEE在体内外均具有良好的抗骨肉瘤活性,其作用机制可能与诱导骨肉瘤细胞凋亡、阻滞细胞周期及破坏骨肉瘤VM形成有关。

关键词：云南重楼骨肉瘤凋亡细胞周期血管生成拟态

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硫熏白芍配方颗粒检控指标的探讨

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中草药 2017年第18期48卷 3728-3733页

作者：徐亚运孔铭李松林南京中医药大学附属中西医结合医院中药质量研究室江苏南京210000 江苏省中医药研究院中国中医科学院江苏分院代谢组研究室江苏南京210028

目的鉴于前期研究发现硫熏药材特征含硫衍生物比二氧化硫(SO_2)残留指标更具专属性和重现性,现探讨SO_2、芍药苷和芍药苷亚硫酸酯(硫熏特征含硫衍生物)作为硫熏白芍配方颗粒检控指标的可行性。方法采用《中国药典》2015年版SO_2残留测... 详细信息

目的鉴于前期研究发现硫熏药材特征含硫衍生物比二氧化硫(SO_2)残留指标更具专属性和重现性,现探讨SO_2、芍药苷和芍药苷亚硫酸酯(硫熏特征含硫衍生物)作为硫熏白芍配方颗粒检控指标的可行性。方法采用《中国药典》2015年版SO_2残留测定法和HPLC法,考察模拟硫熏白芍配方颗粒制剂过程中(提取、浓缩和干燥)SO_2残留和芍药苷及芍药苷亚硫酸酯的量转移规律。结果在硫熏白芍提取液、浓缩液和干浸膏中均能检测到SO_2残留、芍药苷和芍药苷亚硫酸酯,说明三者均可指示硫熏白芍配方颗粒制剂过程质量变化;但三者量转移规律不同,SO_2和芍药苷呈下降趋势,最终转移率分别为25.5%和91.8%,而芍药苷亚硫酸酯呈上升趋势,最终转移率为118.5%。对市售白芍配方颗粒检测可知,全部样品中均检测到芍药苷,凡测到SO_2残留的样品,也可检测到芍药苷亚硫酸酯。结论鉴于SO_2残留是安全性指标,而芍药苷和芍药苷亚硫酸酯分别反映了白芍配方颗粒内在质量和硫熏影响程度,故三者结合可科学评价硫熏白芍配方颗粒的品质,客观表征其安全性和有效性。

关键词：白芍配方颗粒硫磺熏蒸 SO2 芍药苷亚硫酸酯芍药苷 HPLC

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基于COI条形码的市售蝉蜕及其混淆品DNA分子鉴定研究

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中草药 2024年第6期55卷 2057-2065页

作者：张欢欢徐金娣周静贾聪玲吴啟南郭梦斐沈纪晨伍城颖李松林毛茜南京中医药大学附属中西医结合医院中药质量研究室江苏南京210028 江苏省中医药研究院/中国中医科院江苏分院中药代谢组研究室江苏南京210028 南京中医药大学药学院江苏南京210023

目的利用COI序列对中药材蝉蜕Cicadae Periostracum及其混淆品进行DNA条形码鉴定研究,为蝉蜕药材的快速准确鉴定提供新的技术手段。方法收集全国市售蝉蜕药材、基地自采蝉蜕及其混淆品总45份样本,同时采集江苏徐州黑蚱养殖基地不同树种... 详细信息

目的利用COI序列对中药材蝉蜕Cicadae Periostracum及其混淆品进行DNA条形码鉴定研究,为蝉蜕药材的快速准确鉴定提供新的技术手段。方法收集全国市售蝉蜕药材、基地自采蝉蜕及其混淆品总45份样本,同时采集江苏徐州黑蚱养殖基地不同树种中蝉卵样品5份作为对照。提取DNA,进行PCR扩增及双向测序,测序结果采用DNAMAN和SnapGene进行拼接校对,运用MEGA11.0进行比对分析,计算种内及种间Kimura 2-Parameter(K2P)遗传距离并构建邻接法(neighbor-joining,NJ)系统发育树。结果黑蚱种内遗传距离远小于种间最小遗传距离,NJ树结果显示,黑蚱蝉蜕样品全部聚集为独立的一支,支持率为99%。混淆品样品分别聚集为单独的一支,支持率均大于90%,表明基于COI序列的DNA条形码技术可以有效鉴别蝉蜕药材真伪。结论应用COI序列作为DNA条形码能够准确有效地鉴别蝉蜕及其混淆品。

关键词：蝉蜕混淆品 DNA条形码 COI序列分子鉴定

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粪便内中短链脂肪酸柱前衍生化UHPLC-QTOF-MS/MS分析方法研究

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药学学报 2020年第1期55卷 131-138页

作者：丛龙杰邵玉健沈红康东周徐金娣周姗姗李松林南京中医药大学附属中西医结合医院中药质量研究室江苏南京210028 江苏省中医药研究院和中国中医科学院江苏分院中药代谢组研究室江苏南京210028 延边大学吉林延吉133000

建立柱前衍生化超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS/MS)定性、定量表征小鼠粪便内中短链脂肪酸的方法,并用于评价其在抗生素处置前后小鼠粪便样品中的变化。动物实验方案获得江苏省中医药研究院动物实验伦理委员会的... 详细信息

建立柱前衍生化超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS/MS)定性、定量表征小鼠粪便内中短链脂肪酸的方法,并用于评价其在抗生素处置前后小鼠粪便样品中的变化。动物实验方案获得江苏省中医药研究院动物实验伦理委员会的批准。以3-硝基苯肼为衍生化试剂,对衍生化反应条件、色谱及质谱条件进行优化,建立了粪便中16个中短链脂肪酸的定性、定量方法。所有分析物在各自浓度范围内线性关系良好(R2>0.99),日内、日间精密度RSD均小于10%,重复性RSD小于6%,加样回收率介于80%~120%之间,样品36 h内稳定性RSD小于7%;联合抗生素处置后小鼠粪便内的中短链脂肪酸种类和含量均发生了明显改变。其中,甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、乳酸等含量明显降低,而庚酸和丁二酸的含量明显增加。该方法准确、可靠,可作为粪便内中短链脂肪酸的表征方法。

关键词：中短链脂肪酸 UPLC-QTOF-MS/MS 柱前衍生化粪便定性定量分析

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从肠道菌群调控角度探讨中药汤剂中多糖组分存在的意义

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药学学报 2022年第12期57卷 3480-3486页

作者：沈红伍城颖龙芳周静周姗姗许军李松林南京中医药大学附属中西医结合医院中药质量和代谢组研究室江苏南京210028 香港浸会大学中医药学院中国香港999077

汤剂为中药传统用药方式。汤剂中除小分子组分外,亦包含多糖等大分子组分。以往中药新药研发过程中常采用“醇沉除杂”工艺,去除多糖等口服不吸收“无效组分”,富集小分子“有效组分”,以改善制剂成型性。近年来,随着人们对肠道菌群与... 详细信息

汤剂为中药传统用药方式。汤剂中除小分子组分外,亦包含多糖等大分子组分。以往中药新药研发过程中常采用“醇沉除杂”工艺,去除多糖等口服不吸收“无效组分”,富集小分子“有效组分”,以改善制剂成型性。近年来,随着人们对肠道菌群与宿主健康/疾病的密切关系及中药多糖潜在益生元作用的认识不断加深,汤剂中多糖组分存在的价值越发值得关注。结合本课题组及文献研究进展,本综述在简述肠道菌群与健康/疾病关系的基础上,概述中药多糖通过调节肠道菌群干预机体代谢、肠功能、免疫、炎症、情志及肿瘤等疾病状态,通过肠道菌群介导影响共存小分子组分吸收、代谢和转运,以及肠道菌群调节作用的结构特异性,以此从肠道菌群调控角度探讨多糖组分在中药汤剂中存在的重要价值,为基于经典名方和临床验方的创新药物研发过程中重视多糖组分的存在提供启示。

关键词：汤剂多糖肠道菌群中药新药研发

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硫熏药材检控方法评述和创新研究策略探讨

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药物分析杂志 2017年第10期37卷 1739-1746页

作者：孔铭徐亚运李松林南京中医药大学附属中西医结合医院中药质量研究室南京210028 江苏省中医药研究院和中国中医科学院江苏分院代谢组研究室南京210028

硫熏是药材杀虫防霉养护方法之一,但过度硫熏会影响药材品质,从而影响药材药效和安全。对硫熏药材进行检控是保证药材安全、有效的前提。本文对当前硫熏药材检控方法进行评述,特别对SO_2残留量等检控方法存在的不足进行了较深入分析,对... 详细信息

硫熏是药材杀虫防霉养护方法之一,但过度硫熏会影响药材品质,从而影响药材药效和安全。对硫熏药材进行检控是保证药材安全、有效的前提。本文对当前硫熏药材检控方法进行评述,特别对SO_2残留量等检控方法存在的不足进行了较深入分析,对硫熏药材特征标志物检控方法研究以及硫熏药材检控指标选择策略进行探讨,为深入研究硫熏药材检控方法和修订检控标准提供新思路。

关键词：硫熏中药材二氧化硫残留特征标志物检控方法

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