寡基因病(oligogenic disease)是由一个疾病基因决定并由几个修饰基因(modifiergene)共同作用的一类遗传病,它是连接单基因病和多基因病的桥梁。作为一种寡基因病,脊肌萎缩症(spinal muscularatrophy,SMA)是一组最常见的常染色体隐性遗传病,其在活婴中的发病率约为1/10000,人群中携带者频率为1/30～1/50。临床上主要表现为下运动神经元性、进行性、对称性肌无力和萎缩,近端重于远端,下肢重于上肢。根据发病年龄和病程分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ和Ⅳ型四种。该病的疾病基因为SMN1基因(survival of motor neuron gene1),其重要的修饰基因之一SMN2与SMN1高度同源:在编码区只存在1个碱基的差别(位于第7外显子)。研究表明,约95%的SMA患者存在SMN1基因第7外显子(E7)纯合缺失,其余5%的SMA患者中存在SMN1基因的微小突变(subtle mutation)。修饰基因SMN2基因的拷贝数与SMA表型存在负性相关。本实验室建立了一套SMA临床分子诊断体系,为SMA家系提供完整可靠的遗传评估和诊断服务。接诊的32个SMA家系(其中9个家系的先证者已死亡)均来自中国大陆,其中包括23例患者(临床上均符合SMA诊断标准,Ⅰ型9例,Ⅱ型1 1例,Ⅲ型3例),62位患者父母,以及来自15个家系的18例胎儿。经家系成员知情同意后对患者进行SMN1基因的纯合性缺失分析,采用PCR-RFLP和位点特异性PCR两种方法相互左证;采用MLPA技术对患者父母进行SMN1和SMN2基因的拷贝数分析;采用MLPA技术、RT-PCR以及T克隆技术等分别从DNA和RNA水平双途径检测杂合性缺失患者SMN1基因的微小突变。在23个标准SMA家系(先证者未死亡的家系)中,21例患者为SMN1基因的纯合缺失,剩余的2例患者均为SMN1基因的杂合缺失,且分别存在错义突变S230L和无义突变L228X;21例患者SMN2基因拷贝数的增加与SMA表型的严重程度(从Ⅰ型到Ⅲ型)存在显著性差异(P<0.05);对于9个先证者已死亡的家系,8个家系的父母均只存在1个SMN1拷贝,即典型的携带者;其余1个家系的母亲只存在1个SMN1拷贝,父亲存在2个SMN1拷贝,其中一个拷贝存在移码突变22 23insA;对15个家系的18例胎儿行产前分子诊断,其中5例为SMN1基因的纯合缺失,7例只存在1个SMN1拷贝,6例存在2个SMN1拷贝。我们所建立的"脊肌萎缩症临床分子诊断体系"在遗传病分子诊断方面意义重大,所建立的实验技术和方法也为其他遗传病的分子诊断工作提供了重要的借鉴。
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