检索结果-内蒙古大学图书馆

解放军医学杂志 2016年第2期41卷 168-174页

作者：范翠花兰风华张朵南京军区福州总医院全军计划生育优生优育研究所福州350025

精原干细胞(SSC)既具有自我更新能力又能分化成精子,是雄性动物体内唯一能将遗传信息传递给子代的成体干细胞。最新研究发现,SSC在体外特殊培养条件下能够去分化形成胚胎样多潜能干细胞,进而转分化生成3个胚层来源的细胞。上述研究主要... 详细信息

精原干细胞(SSC)既具有自我更新能力又能分化成精子,是雄性动物体内唯一能将遗传信息传递给子代的成体干细胞。最新研究发现,SSC在体外特殊培养条件下能够去分化形成胚胎样多潜能干细胞,进而转分化生成3个胚层来源的细胞。上述研究主要是在非灵长类动物体内进行的。本文主要针对非灵长类动物SSC的生物学特性、分离纯化、培养、鉴定、移植等进行简要的概述,并对其多潜能性及可塑性的研究进展进行讨论,旨在探讨SSC在男性不育症治疗和人类再生医学领域的应用潜能。

关键词：精原干细胞多潜能性可塑性

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男性吸烟对辅助生殖治疗结局的影响

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解放军医药杂志 2015年第7期27卷 74-77页

作者：陈国勇洪新如宋岩峰张群芳黄吴键南京军区福州总医院全军计划生育优生优育研究所福州350025

目的探讨男性吸烟对辅助生殖治疗结局的影响。方法选择2011—2013年就诊的男方吸烟行辅助生殖治疗951例,分为大量吸烟(>10支/d)组287例和少量吸烟(≤10支/d)组664例。对两组辅助生殖治疗过程中的相关指标进行比较。结果两组男性生育... 详细信息

目的探讨男性吸烟对辅助生殖治疗结局的影响。方法选择2011—2013年就诊的男方吸烟行辅助生殖治疗951例,分为大量吸烟(>10支/d)组287例和少量吸烟(≤10支/d)组664例。对两组辅助生殖治疗过程中的相关指标进行比较。结果两组男性生育力指标、妊娠率及流产率比较差异无统计学意义(P>0.05),但大量吸烟组无胎心发生风险高于少量吸烟组(P<0.05)。结论男性吸烟对辅助生殖治疗结局影响不明显,但可能影响胚胎早期心血管发育。

关键词：吸烟男性生殖技术妊娠结局

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构建睾丸特异性乳酸脱氢酶真核表达载体稳定转染HeLa细胞并成功表达

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第12期30卷 1322-1325页

作者：崔兆磊郑德柱刘耀华陈良远张朵曾章新林天寿兰风华南京军区福州总医院全军计划生育优生优育研究所福建福州350025 南京军区福州总医院生殖医学中心福建福州350025

睾丸（精子）特异性乳酸脱氢酶（testis-specific lactate dehydrogenase）,是上世纪60年代发现的乳酸脱氢酶同工酶之一,早期称乳酸脱氢酶-X,现称乳酸脱氢酶C4（lactatedehydrogenase C4,LDHC4）。LDHC4的合成受LDHC基因的控制,该基因... 详细信息

睾丸（精子）特异性乳酸脱氢酶（testis-specific lactate dehydrogenase）,是上世纪60年代发现的乳酸脱氢酶同工酶之一,早期称乳酸脱氢酶-X,现称乳酸脱氢酶C4（lactatedehydrogenase C4,LDHC4）。LDHC4的合成受LDHC基因的控制,该基因开放读码框为999 bp,

关键词：乳酸脱氢酶C4 LDHC 真核表达 HeLa细胞稳定转染

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睾丸特异性乳酸脱氢酶真核表达载体的构建及稳定转染HeLa细胞系的建立

睾丸特异性乳酸脱氢酶真核表达载体的构建及稳定转染HeLa细胞系的...

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中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会

作者：崔兆磊郑德柱刘耀华陈良远张朵林天寿兰风华南京军区福州总医院全军计划生育优生优育研究所南京军区福州总医院妇产科优生优育实验室

目的:构建人睾丸特异性乳酸脱氢酶LDHC基因真核表达载体,并建立其稳定转染的He La细胞系。方法:采用PCR技术从人睾丸λTripEx cDNA文库中钓取LDHC序列,连接插入至p CMV-C-EGFP真核表达载体并对重组质粒进行酶切及测序鉴定;阳离子聚合物... 详细信息

目的:构建人睾丸特异性乳酸脱氢酶LDHC基因真核表达载体,并建立其稳定转染的He La细胞系。方法:采用PCR技术从人睾丸λTripEx cDNA文库中钓取LDHC序列,连接插入至p CMV-C-EGFP真核表达载体并对重组质粒进行酶切及测序鉴定;阳离子聚合物介导重组质粒转染He La细胞后,用G418抗生素筛选稳定转染细胞系;荧光显微镜观察稳转细胞系中LDHC-EGFP融合蛋白的表达分布,RT-PCR及Western blotting检测LDHC mRNA及蛋白的表达;睾丸特异性乳酸脱氢酶活性染色鉴定融合蛋白的催化活性。结果:PCR产物经琼脂糖电分析,结果在约1000bp见1条明显的DNA条带,与预期1016bp大小一致。双酶切和测序鉴定表明p CMV-LDHC-EGFP真核表达质粒构建成功。经G418筛选后,荧光显微镜可见LDHC-EGFP融合蛋白在筛选细胞系的胞质和胞核中均有分布,且胞质信号强于胞核;RT-PCR和Westernblotting表明,稳转的He La细胞系中LDHCm RNA及蛋白的表达明显升高;睾丸特异性乳酸脱氢酶活性染色显示,p CMV-LDHC-EGFP稳转组可出现宽而深紫黑色的着色条带,而其他两对照组染色条带浅细,呈淡紫色。可见重组载体编码的外源性LDHC4-EGFP融合蛋白具有生物学活性,能催化特异性底物α-羟基戊酸显色,与两对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建p CMV-LDHC-EGFP真核表达载体,并建立稳定转染的He La细胞系,可表达正常催化活性的LDHC-EGFP融合蛋白。

关键词：乳酸脱氢酶C4 LDHC 真核表达 He La细胞稳定转染

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基于MLPA和外显子组测序的杜氏/贝氏肌营养不良症分子诊断新方法研究

基于MLPA和外显子组测序的杜氏/贝氏肌营养不良症分子诊断新方法...

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中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会

作者：丘丽萍林炎鸿严爱贞周春燕郭小艳兰风华南京军区福州总医院全军计划生育优生优育研究所

杜氏/贝氏肌营养不良症（Duchenne/Becker muscular dystrophy,DMD/BMD）可分为两种类型,即DMD和BMD。DMD这是最常见致死性的X-连锁隐性遗传性肌病,以进行性肌萎缩无力伴小腿腓肠肌假性肥大为主要典型临床特征。约75%DMD患者存在一个或... 详细信息

杜氏/贝氏肌营养不良症（Duchenne/Becker muscular dystrophy,DMD/BMD）可分为两种类型,即DMD和BMD。DMD这是最常见致死性的X-连锁隐性遗传性肌病,以进行性肌萎缩无力伴小腿腓肠肌假性肥大为主要典型临床特征。约75%DMD患者存在一个或多个外显子大片段缺失或重复,剩余约25%被认为存在微小突变,包括点突变、小的插入缺失、复杂的微小重排等。在多数情况下,微小突变会导致翻译的提前终止,形成功能不全的截短蛋白,从而引起疾病的发生。将多重连接依赖性探针扩增技术（multiplexligation-dependentprobe amplification,MLPA）应用于DMD/BMD的分子诊断。对来自18个家庭临床上怀疑为DMD的患者进行了MLPA分析,在6个患者的DMD基因中检测出1至多个外显子缺失（其中2例为新生突变）,1例为外显子重复突变。应用MLPA对两个DMD高风险的孕妇进行了产前分子诊断,结果在其中一个胎儿的DMD基因中检测到与先证者一样的缺失突变,而另一个未测到与先证者一样的突变。对一具有典型DMD/BMD的临床表现,但MLPA未检测到DMD基因外显子缺失（或重复）的患者,利用第二代测序技术,对其外显子组进行序列测定。在其DMD基因上发现一个突变:X1950196/G,并通过Sanger测序法验证了这一突变。该突变位于DMD基因的关键剪接供体位点上,可能会影响所在内含子的识别和剪接。通过生物信息学工具对这突变进行预测,发现该突变点所在的5’端剪接供体位点失效了,并可能导致剪接方式的改变。为进一步研究这一突变的致病机制,我们利用杂种小基因剪接试验（hybrid minigene splicing assay,HMSA）,从细胞水平上分析病人和正常人DMD基因中该突变相关位置可变剪接的变化情况。将与该突变相关的侧翼序列插入到pcDNATM3.1/Hygro（+）载体中,并瞬时转染HeLa细胞,取其总RNA,采用RT-PCR技术分析可变剪接产物的表达情况。与正常对照相比,RT-PCR产物的序列测定显示:病人由于突变导致其剪接位点散失,产生两种转录产物:一种是相应内含子保留,为主要产物;另外一种利用相应替代性剪接供体位点。这两种情况与在生物信息学预测的结果相符。两种转录产物在翻译时其相应肽链C端氨基酸序列有所改变、终止密码提前出现,不能形成具有功能的蛋白质。

关键词：杜氏/贝氏肌营养不良症抗肌萎缩蛋白基因多重连接依赖式探针扩增技术外显子组测序可变剪接

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FMR1基因的可变剪接及其意义

FMR1基因的可变剪接及其意义

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中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会

作者：富显果廖娟郭小艳严爱贞张朵郑德柱兰风华南京军区福州总医院全军计划生育优生优育研究所

脆性X综合征(fragile X syndrome, FXS)是一种常见的遗传性智力低下疾病。其致病基因——脆性X智力障碍1基因(fragile X mental retardation1 gene,FMR1)定位克隆于Xq27.3,长38Kb,由17个外显子和16个内含子组成,编码一个选择性RNA结合蛋... 详细信息

脆性X综合征(fragile X syndrome, FXS)是一种常见的遗传性智力低下疾病。其致病基因——脆性X智力障碍1基因(fragile X mental retardation1 gene,FMR1)定位克隆于Xq27.3,长38Kb,由17个外显子和16个内含子组成,编码一个选择性RNA结合蛋白,称为脆性X智力障碍蛋白(fragile X mental retardation protein, FMRP)。已有的研究表明,FMR1基因存在复杂的可变剪接表达,且可变剪接参与了FMR1基因功能和活性的调节。但是,对不同异构体的生理功能仍知之甚少。为了研究物种间FMR1基因的可变剪接表达差异,本研究利用公认的比较基因组学分析工具,对不同物种FMR1基因保守序列、内含子序列、可变剪接表达谱进行比较分析,并对FMR1基因各外显子进行选择压力分析,籍此预测可变剪接对FMR1基因的影响。结果表明,各物种间FMR1基因存在不同程度的可变剪接,并存在物种特异性剪接方式;可变剪接与FMR1的功能进化密切相关,特别是外显子12的剪接。为进一步研究人类FMR1的可变剪接表达,本研究利用T克隆-测序技术,对人不同组织细胞FMR1基因可剪表达谱进行分析,发现了两种新的可变剪接产物,结合本课题组之前发现的新的剪接产物,表明人类FMR1基因可变剪接远比已知的要复杂得多;含有编码区全长序列的剪接产物(ISO1)的表达丰度较低,而人体中主要的剪接产物是ISO17和ISO7,均涉及外显子12跳跃的剪接,但不同组织中两者的比例并不一致。本课题组在之前的研究中发现并证实了一个FMR1基因新型外显子,为了研究该外显子的插入对FMRP的影响,本研究利用分子克隆技术,构建含全长编码区序列真核表达载体:pEGFP-N2-FMR1和含新型外显子的FMR1基因真核表达载体:pEGFP-N2-△FMR1。重组质粒转染HEK293T胞和He La细胞后,荧光显微镜观察GFP融合蛋白表达。结果发现,含新型外显子的融合蛋白细胞内定位发生了改变。为了进一步研究该外显子的插入对FMRP功能的影响,本研究利用分子克隆技术,构建含新型外显子的FMR1基因慢病毒过表达载体:pLEX-MCS-△FMR1,并通过基因芯片技术检测含新型外显子转录本过表达对相关基因表达的影响。结果发现117个差异表达基因,其中,SLC7A11基因可能参与FMRP相关信号通路的调控。本研究可为进一步研究可变剪接对FMRP功能的影响打下基础,并对FXS的发病机制的研究提供新的方向。

关键词： FMR 可变剪接比较基因组学真核表达基因芯片

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MLPA在早期自然流产胚胎绒毛染色体异常快速检测中的应用

MLPA在早期自然流产胚胎绒毛染色体异常快速检测中的应用

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中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会

作者：钟福春涂向东郑德柱林炎鸿兰风华南京军区福州总医院全军计划生育优生优育研究所

为探讨MLPA在早期自然流产胚胎绒毛染色体异常检测中的应用价值,收集2012年12月至2013年12月在南京军区福州总医院妇产科确诊为早期自然流产的病例共26例,清宫后获取其胚胎绒毛组织,应用MLPA亚端粒检测试剂盒进行MLPA检测,并与G显带核... 详细信息

为探讨MLPA在早期自然流产胚胎绒毛染色体异常检测中的应用价值,收集2012年12月至2013年12月在南京军区福州总医院妇产科确诊为早期自然流产的病例共26例,清宫后获取其胚胎绒毛组织,应用MLPA亚端粒检测试剂盒进行MLPA检测,并与G显带核型分析进行比较。26例早期自然流产绒毛样本均在15±3天内进行了绒毛细胞培养,G显带核型分析,成功24例(成功率92.3%),1例由于绒毛组织污染而培养失败(3.8%),1例由于分裂相少、染色体形态差而核型分析失败(3.8%)。全部样均在3日内进行MLPA检测(成功率为100%),G显带核型分析失败的2例样本也得到结果。两种方法均诊断成功的24例样本中,结果完全一致共19例(79.2%),包括10例正常核型,7例非整倍体,1例男性三倍体(69,XXY),1例46,XY/46,XX嵌合体。结果不完全一致1例(4.2%),G显带核型分析除发现4三体外,还检出其合并Y染色体臂间倒位。结果完全不一致4例(16.7%),G显带核型分析诊断为女性三倍体(69,XXX),而MLPA显示为正常女性(46,XX)。在10例正常核型,8例非整倍体中,MLPA诊断非整倍体的灵敏度和特异度均为100%。两种方法均诊断成功的24例样本中,MLPA诊断异常核型的灵敏度和特异度分别为100%和71.4%。与G显带核型分析相比,MLPA检测早期自然流产胚胎绒毛染色体异常具有实际临床应用价值,尤其对G显带核型分析失败的样本。

关键词： MLPA 早期自然流产非整倍体 G显带核型分析

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X-连锁肾上腺-脑白质营养不良患者ABCD1基因突变分析及ALDP突变体的真核表达

X-连锁肾上腺-脑白质营养不良患者ABCD1基因突变分析及ALDP突变体...

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中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会

作者：张林王志红兰风华南京军区福州总医院全军计划生育优生优育研究所

X-连锁肾上腺-脑白质营养不良(X-linked adrenoleukodystrophy, X-ALD)是一种遗传异质性疾病,其疾病基因——ABCD1基因定位于染色体Xq28,编码1个含745个氨基酸残基的蛋白质,称为ABCD1蛋白,又称ALD蛋白(ALD protein,ALDP)。其生化特点是... 详细信息

X-连锁肾上腺-脑白质营养不良(X-linked adrenoleukodystrophy, X-ALD)是一种遗传异质性疾病,其疾病基因——ABCD1基因定位于染色体Xq28,编码1个含745个氨基酸残基的蛋白质,称为ABCD1蛋白,又称ALD蛋白(ALD protein,ALDP)。其生化特点是极长链饱和脂肪酸(very long chain fatty acids,VLCFAs),特别是二十六烷酸(C26:0)及二十四烷酸(C24:0)在不同组织和体液中的积累。病变主要侵犯脑白质、肾上腺等组织,临床上主要表现为听力、视力、智力及运动障碍等中枢神经系统症状以及肾上腺皮质功能减退的症状。尽管该病的研究历史较长,但治疗仍是X-ALD患者面临的最大难题,除造血干细胞移植外,目前尚无有效方法可以逆转神经系统病变,阻止病情发展。因此对高危妇女进行突变筛查,继而对女性携带者进行产前分子诊断或胚胎植入前遗传学诊断,是减少该病患儿出生率的有效方法。对X-ALD患者及其家系成员的ABCD1基因进行突变分析,不仅可为X-ALD患者提供明确的诊断,而且可为该家系遗传咨询、产前诊断提供依据。本研究首先从RNA途径着手,应用逆转录PCR技术,对5个家系的先证者或其母亲的ABCD1基因编码区进行序列测定查找突变位点,再通过基因组DNA途径进行突变位点验证。产前诊断采用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点分析方法排除母体基因组DNA污染后,应用DNA测序或PCR-限制性酶切方法对5个胎儿的羊水基因组DNA进行突变分析。结果显示:在5个家系的先证者或先证者母亲分别发现5个不同位点的ABCD1基因突变,依次为c.796G>A,c.521A>G,c.1523C>T,c.1534G>A,c.1252C>T。产前诊断结果显示:5个胎儿均为男性,胎儿1、2、3、4存在与先证者相同的突变,胎儿5未检测到与先证者5相同的突变。由此推断胎儿1、2、3、4为ALD半合子;胎儿5为正常半合子。为探讨ABCD1基因突变对ALDP结构和功能的影响,本研究选择H283R和P534R两个突变进行研究。首先采用生物信息学方法,进行ALDP突变序列致病性及突变体结构稳定性预测;再利用分子克隆技术,进行突变蛋白的功能研究。本研究成功构建野生型ABCD1基因慢病毒载体:PLEX-ABCD1,定点诱变构建2个突变型重组载体:PLEX-ABCD1-H283R和PLEX-ABCD1-P534R,并与其他包装载体共转染293T细胞成功包装病毒。收集的病毒感染宿主细胞,免疫荧光及免疫印迹结果提示,H283R和P534R突变可能造成ALDP突变体稳定性下降,易被蛋白酶体水解,从而导致ALDP表达量降低或不表达,但是未观察到ALDP定位的改变。本研究从功能学实验的角度评估ABCD1基因突变对ALDP结构和功能的影响,可深化对ALD发病机制的认识,并为设计更好的ALD诊断、预防和治疗方法提供实验依据。

关键词： X-连锁肾上腺-脑白质营养不良 ABCD1基因 ALDP 生物信息学真核表达

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一例6q16间隙性缺失患儿遗传鉴定

一例6q16间隙性缺失患儿遗传鉴定

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中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会

作者：涂向东林娟张晓连晓惠丛学文颜钰莹南京军区福州总医院全军计划生育优生优育技术研究所

Prader-Willi–like syndrome是一组类似Prader-Willi syndrome表型的遗传综合征。15q11-13区域父源性基因组印迹正常,致病基因可能位于1p、6q、9q,14q和FarX等区域。临床表现:肌张力减退、认知障碍,新生儿吮吸困难、生长缓慢、精神发... 详细信息

Prader-Willi–like syndrome是一组类似Prader-Willi syndrome表型的遗传综合征。15q11-13区域父源性基因组印迹正常,致病基因可能位于1p、6q、9q,14q和FarX等区域。临床表现:肌张力减退、认知障碍,新生儿吮吸困难、生长缓慢、精神发育迟缓,18个月至2岁食欲过盛,严重肥胖。成年后学习障碍,注意力不集中,语言表达不清晰。身材矮小,短小的四肢,性腺机能减退,轻微到中度精神发育迟缓和行为障碍,表型与Prader-Willi syndrome极为相似。我们对一例智力低下、生长发育迟缓患儿及其双亲进行染色体畸变分析。方法采用染色体G显带分析、单核苷酸多态性芯片(single nucleotide polymorphisms array, SNP-array)等技术,分析该患者及父母染色体及相关基因的异常。结果染色体G显带检测显示患儿染色体核型为46,XX,del(6)(q16),母亲核型为46,XX,父亲为46,XY。SNP-Array显示患儿6q16.1-q21区带14.6Mbp大小的杂合性缺失,造成SIM1等59个基因缺失。据文献报道:6q16.1-q21区域是与Prader-Willi–like syndrome有关的区域,其中SIM1基因在肾脏和中枢神经系统表达,对下丘脑视上核和视旁核的发育至关重要,被认为是调节饮食和体重的重要候选基因,与肥胖有关,GRLK2基因为谷氨酸受体,调节大部份大脑兴奋性神经传递,可能与精神发育迟缓及行为异常有关。MCHR2基因是一种神经肽,在控制摄食行为和能量代谢中发挥重要作用,可能与喂养行为控制和能量新陈代谢有关。POPDC3基因可能与心脏发育有关。GRLK2基因可能与孤独症有关。结论:我们在国内首次报道1例6q16间隙性缺失病例,并认为患儿喂养困难,脑发育不全,生长发育迟缓与相关基因杂合性缺失有关。染色体核型分析、SNP-Array等技术联合应用可以更好地从基因组水平上分析染色体重排及病因。

关键词：染色体精神发育迟缓

来源：评论

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运用长链RT-PCR技术对一个完全型雄激素不敏感综合征家系的AR基因突变分析

运用长链RT-PCR技术对一个完全型雄激素不敏感综合征家系的AR基因...

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中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会

作者：张晓曾健林炎鸿涂向东南京军区福州总医院全军计划生育优生优育技术研究所

目的通过对1例完全型雄激素不敏感综合征(complete androgen insensitivity syndrome,CAIS)患者及该家系其他成员的雄激素受体(androgen receptor,AR)基因进行分析,寻找潜在的突变位点,并进一步分析其发病原因。方法提取患者及其家系成... 详细信息

目的通过对1例完全型雄激素不敏感综合征(complete androgen insensitivity syndrome,CAIS)患者及该家系其他成员的雄激素受体(androgen receptor,AR)基因进行分析,寻找潜在的突变位点,并进一步分析其发病原因。方法提取患者及其家系成员的外周血全基因组DNA和总RNA,应用PCR技术扩增位于X染色体AR基因的7个外显子,对扩增产物直接进行DNA序列测定,寻找突变位点,应用PCR-限制性酶切方法分析相应的基因组片段,进一步确证AR的突变位点;运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增AR基因再次验证AR的突变位点。结果该患者及其舅舅AR基因在第7外显子核苷酸序列2520位点一个碱基G被碱基A替换引起错义突变,致使第840位密码子CGT突变为CAT,即精氨酸被组氨酸替代,该突变可能诱导雄激素受体结合能力发生功能上的变异,导致CAIS的发生。患者母亲的一个AR等位基因第840位密码子(外显子7)存在CGT→CAT改变,另一个等位基因未发现突变,即母亲为突变携带者。结论 AR基因第7外显子核苷酸序列2520位点碱基G引起的错义突变是一种导致CAIS的基因突变方式,为该家系产前诊断提供了诊断依据。首次运用长链RT-PCR技术扩增AR基因,为以后CAIS的分子诊断提供了新的方法。

关键词： CAIS 长链RT-PCR 突变

来源：评论

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