检索结果-内蒙古大学图书馆

临床检验杂志 2004年第4期22卷 273-275页

作者：谢飞涂向东兰风华朱忠勇南京军区福州总医院解放军医学检验中心实验科福州352200

目的　构建基因工程菌株 ,以获得重组人II型丙氨酸氨基转移酶 (ALT2 )蛋白。方法　逆转录PCR法从人肌肉组织总RNA中扩增ALT2基因片段 ,插入原核表达载体pET - 2 8a ,构建成融合表达质粒pET2 8 ALT2 ,将其转化大肠杆菌BL2 1DE3,IPTG诱导... 详细信息

目的　构建基因工程菌株 ,以获得重组人II型丙氨酸氨基转移酶 (ALT2 )蛋白。方法　逆转录PCR法从人肌肉组织总RNA中扩增ALT2基因片段 ,插入原核表达载体pET - 2 8a ,构建成融合表达质粒pET2 8 ALT2 ,将其转化大肠杆菌BL2 1DE3,IPTG诱导表达。SDS PAGE、活力测定、活性染色及westernblot鉴定表达产物。结果　重组质粒pET2 8 ALT2测序和酶切结果与预期完全符合。IPTG诱导后 ,阳性菌体裂解物上清ALT2活性很高 ,PAGE出现一分子量 5 80 0 0蛋白条带 ,可被抗ALT1抗血清识别 ,酶活性染色显示有ALT活性。结论　已成功将ALT2基因克隆到pET 2 8a载体 ,ALT2蛋白得到可溶性高效表达。

关键词：人Ⅱ型丙氨酸氨基转移酶表达载体构建大肠杆菌表达

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人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶的可溶性表达及抗血清反应模式

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中华检验医学杂志 2004年第12期27卷 857-860页

作者：谢飞涂向东兰风华朱忠勇南京军区福州总医院解放军医学检验中心实验科福州350025

目的　克隆表达重组人I型丙氨酸氨基转移酶 (ALT1)蛋白及制备抗血清 ,探讨建立ALT1特异性检测方法思路。方法　逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增人ALT1cDNA ,插入pGEX 2T ,构建原核表达载体 pGEX 2T ALT1,并转入大肠杆菌进行表达。SDS P... 详细信息

目的　克隆表达重组人I型丙氨酸氨基转移酶 (ALT1)蛋白及制备抗血清 ,探讨建立ALT1特异性检测方法思路。方法　逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增人ALT1cDNA ,插入pGEX 2T ,构建原核表达载体 pGEX 2T ALT1,并转入大肠杆菌进行表达。SDS PAGE ,活力测定和活性染色鉴定表达产物。表达产物免疫小鼠所得抗血清对天然ALT1,重组ALT1及重组ALT2进行Westernblot分析。结果　重组质粒测序和酶切结果显示ALT1基因已经成功克隆到pGEX 2T载体。SDS PAGE和活性染色表明所表达蛋白具有天然活性。抗ALT1血清除识别重组ALT1外 ,还可识别天然蛋白和重组ALT2。结论　重组人ALT1得到高效可溶性表达。用目前方法制备的抗血清特异性不高 ,如建立ALT1的免疫学检测方法需要采用特异性识别ALT1的抗体 ,以避免交叉反应引起的假性升高。

关键词： ALT 丙氨酸氨基转移酶抗血清天然蛋白可溶性表达假性活性染色克隆表达特异性识别

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血清透明质酸在病毒性肝炎患者中的变化及其临床意义

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中华传染病杂志 1991年第3期9卷 173-174页

作者：高君敏陈之航南京军区军医学校解放军医学检验专科中心南京军区福州总医院

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人胰腺α-淀粉酶的cDNA克隆和原核表达的初步研究

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中华检验医学杂志 2004年第7期27卷 452-455页

作者：涂向东谢飞兰风华朱忠勇南京军区福州总医院全军医学检验中心实验科

目的获得人胰腺α-淀粉酶(AMY2A)基因并进行原核表达。方法采用基因工程技术,根据人AMY2A基因序列设计并合成特异性引物;从人胰腺组织中提取总RNA,反转录成CDNA第一链;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人胰腺AMY2A基因,经BamH Ⅰ和Kpn... 详细信息

目的获得人胰腺α-淀粉酶(AMY2A)基因并进行原核表达。方法采用基因工程技术,根据人AMY2A基因序列设计并合成特异性引物;从人胰腺组织中提取总RNA,反转录成CDNA第一链;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人胰腺AMY2A基因,经BamH Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切、连接并插入原核表达载体pGEX-5T,构建pGEX-5T-AMY2A重组表达载体,在大肠杆菌BL21中异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达AMY2A蛋白。包涵体经尿素变性、复性及谷胱苷肽琼脂糖柱亲和层析纯化、AMY2A酶活性测定和免疫印迹分析。结果重组质粒测序和酶切结果显示AMY2A基因已正确插入pGEX-5T,重组蛋白、复性及纯化产物SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)在84 000处有一条明显的蛋白表达条带,AMY2A检测具有酶活性,免疫印迹分析表明重组蛋白具有人胰腺淀粉酶抗原性。结论作者已克隆并在大肠杆菌中初步表达并获得纯化的谷胱苷肽转移酶(GST)-AMY2A融合蛋白。

关键词：人胰腺α-淀粉酶 cDNA克隆原核表达基因工程技术纯化

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变性HPLC法在肾上腺脑白质营养不良分子诊断中的应用

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中华检验医学杂志 2007年第2期30卷 157-160页

作者：王志红黄梁浒兰风华南京军区福州总医院全军医学检验中心实验科福州350025

目的对4个肾上腺脑白质营养不良(ALD)家系进行基因突变分析。方法应用变性 HPLC 技术检测了4个 ALD 家系的 ABCD1基因,并通过核苷酸序列分析确证突变位点。结果所有患儿的母亲,患儿2、患儿3、患儿4弟弟及其表弟与正常对照的 PCR 产物混... 详细信息

目的对4个肾上腺脑白质营养不良(ALD)家系进行基因突变分析。方法应用变性 HPLC 技术检测了4个 ALD 家系的 ABCD1基因,并通过核苷酸序列分析确证突变位点。结果所有患儿的母亲,患儿2、患儿3、患儿4弟弟及其表弟与正常对照的 PCR 产物混合物,均出现变性HPLC 洗脱双峰,而正常对照均为单峰,提示相应基因片段存在突变位点。上述出现异源双峰的 PCR产物经直接测序,证实了相关突变的存在:患儿1母亲为 fs Glu 471突变携带者;患儿2存在 S108X 突变;患儿3存在 R617C 突变;患儿4弟弟和表弟均存在 A141T 突变。结论变性 HPLC 能有效地检测ABCD1基因突变,并为进一步地基因突变筛查与产前诊断提供依据。

关键词：肾上腺脑白质营养不良分子诊断技术基因色谱法,高压液相

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一例遗传性凝血因子Ⅴ缺乏症发病机制研究

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中华血液学杂志 2001年第9期22卷 453-456页

作者：谢飞程烽朱晓辉宋昌礼兰风华朱忠勇南京军区福州总医院全军医学检验中心实验科 350025

目的　研究遗传性凝血因子Ⅴ (FⅤ )缺乏症的发病机制。方法　通过免疫学方法和发色底物法检测血浆和血小板中的FⅤ含量 ,采用PCR产物直接测序和限制性酶切分析FⅤ基因 ,应用分子模建对所鉴定突变的生物结构病理学进行研究。结果　先证... 详细信息

目的　研究遗传性凝血因子Ⅴ (FⅤ )缺乏症的发病机制。方法　通过免疫学方法和发色底物法检测血浆和血小板中的FⅤ含量 ,采用PCR产物直接测序和限制性酶切分析FⅤ基因 ,应用分子模建对所鉴定突变的生物结构病理学进行研究。结果　先证者血浆和血小板中FⅤ均缺乏。先证者FⅤ基因第 176 3位核苷酸存在A→C突变 (176 3A→C ,EMBLAJ2 972 5 4)。模建分析表明 ,该突变将导致分子内部形成空洞 ,并可能破坏Tyr5 30与Glu330之间形成的氢键。结论　 176 3A→C突变将导致FⅤ稳定性降低。

关键词：凝血因子V 基因突变分子模拟遗传性凝血因子V缺乏症发病机制

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精液中生精细胞染色体的直接低渗制备与初步应用

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临床检验杂志 1997年第5期15卷 268-270页

作者：叶树俊黄宇烽崔英霞商学军徐建平王咏梅南京鼓楼医院检验科南京军区南京总医院解放军医学检验中心

对３８例正常男性进行精液生精细胞染色体的直接低渗制备和Ｇ显带核型分析，成功率为６８．４％。正常组中总畸变率为３．７１％，不育男性中总畸变率分别为无精症组１５．３％，少精症组６．５％，妻流产组７．７％，精索静脉曲张组６... 详细信息

对３８例正常男性进行精液生精细胞染色体的直接低渗制备和Ｇ显带核型分析，成功率为６８．４％。正常组中总畸变率为３．７１％，不育男性中总畸变率分别为无精症组１５．３％，少精症组６．５％，妻流产组７．７％，精索静脉曲张组６．２５％，均较正常人组增加，在流产组中，染色体以数目畸变为主。

关键词：生精细胞染色体流产精液男性不育症

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男性生精障碍的细胞遗传学和分子遗传学检测

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中国男科学杂志 2006年第1期20卷 28-31页

作者：涂向东谢飞张宝珍兰风华朱忠勇南京军区福州总医院全军医学检验中心实验科福州350025

目的从遗传学角度分析男性生精障碍的病因,为临床提供治疗和遗传咨询的依据。方法对91例无精子症患者和42例严重少精子症患者,采用外周血染色体核型分析和Y染色体AZF区域微缺失联合检测。结果91例原发性无精子症患者中,染色体数量异常... 详细信息

目的从遗传学角度分析男性生精障碍的病因,为临床提供治疗和遗传咨询的依据。方法对91例无精子症患者和42例严重少精子症患者,采用外周血染色体核型分析和Y染色体AZF区域微缺失联合检测。结果91例原发性无精子症患者中,染色体数量异常者16例,占总数17.5%;染色体平衡易位5例,占总数5%;10例AZF区域STS位点缺失,占总数11%;二项检测异常发生率为34%。42例严重少精子症患者检出染色体平衡易位4例,占总数9.5%;AZF区域STS位点缺失5例,占总数11.9%,二项检测异常发生率为21.4%。结论染色体核型分析和Y染色体微缺失是男性生精障碍重要的遗传检测指标。

关键词：男性生精障碍细胞遗传学分子生物学

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常染色体异常三个家系

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中华医学遗传学杂志 2006年第3期23卷 363-364页

作者：涂向东张宝珍南京军区福州总医院全军医学检验中心实验科细胞遗传室福州350025

家系1 患儿,男,1岁,面容特殊.斜视,眼眶深陷,睑裂倾斜,眼距过宽,瞳孔偏心靠近虹膜的内缘.眉毛紧皱,嘴向下倾斜.额骨前突,不能坐立,不能行走,手掌与手指相比过长,指间关节异常.

关键词：常染色体异常家系小儿染色体核型分析细胞遗传学检查智力发育迟缓语言发育迟缓关节异常近亲婚配有害物质接触史

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染色体倒位10例

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中华医学遗传学杂志 2006年第6期23卷 702-703页

作者：涂向东张宝珍南京军区福州总医院全军医学检验中心实验科细胞遗传室福州350025

例1 女,28岁,结婚4年流产2次,均为孕50天左右.夫妻表型及智力正常,双方家庭均无遗传病史.孕期无有害物质接触史,妇科检查无异常.外周血染色体核型分析,其核型为46,XX,inv(10)(pter→p15∷q11→p15∷q11→qter),丈夫表型及染色体核型正常。

关键词：染色体倒位染色体核型分析遗传病史有害物质妇科检查接触史外周血 inv

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