检索结果-内蒙古大学图书馆

南京农业大学学报 2014年第4期37卷 31-38页

作者：许园园王燕柳李旺徐良王克磊张凤娇聂姗姗龚义勤南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺学院江苏南京210095 温州市农业科学院蔬菜科学研究所温州科技职业学院浙江温州325014

采用电子克隆与基因组步移策略分离出萝卜RsFPF1基因gDNA和cDNA及启动子序列,并进行表达特征分析及转基因功能验证。序列分析表明,RsFPF1基因长度为330 bp,编码109个氨基酸;蛋白同源分析表明,RsFPF1蛋白与拟南芥及白芥FPF1蛋白间亲缘关... 详细信息

采用电子克隆与基因组步移策略分离出萝卜RsFPF1基因gDNA和cDNA及启动子序列,并进行表达特征分析及转基因功能验证。序列分析表明,RsFPF1基因长度为330 bp,编码109个氨基酸;蛋白同源分析表明,RsFPF1蛋白与拟南芥及白芥FPF1蛋白间亲缘关系最近。RsFPF1基因5'上游启动子区序列长度为1 845 bp,采用PLACE和PlantCARE软件分析表明,该启动子序列含有典型调控元件及多个光响应顺式元件。半定量RT-PCR表达分析表明,开花前RsFPF1基因在茎尖表达量最高,开花后在花及花蕾中表达量最高。通过农杆菌介导的遗传转化获得转RsFPF1基因的烟草阳性植株,与野生型相比,转入RsFPF1基因的植株出现花期提前现象。结论:RsFPF1基因能够促进萝卜提早开花,其表达可能受光调控,在调控萝卜抽薹开花及花发生相关基因表达方面发挥着重要作用。

关键词：萝卜抽薹开花 RsFPF1基因启动子功能分析

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紫山药黄酮醇合成酶DaFLS1基因的克隆和表达分析

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江苏农业学报 2014年第6期30卷 1448-1455页

作者：闫瑞霞龚义勤殷剑美韩晓勇张培通柳李旺南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺学院江苏南京210095 江苏省农业科学院经济作物研究所江苏南京210014

为了解黄酮醇在紫山药中的合成特点,利用3'-和5'-RACE技术从紫山药中分离到黄酮醇合成酶Da FLS1基因编码序列(Gen Bank登录号:KJ022640)。Da FLS1基因编码序列全长为1 113 bp,其开放阅读框长度为1 005 bp,编码334个氨基酸。Da F... 详细信息

为了解黄酮醇在紫山药中的合成特点,利用3'-和5'-RACE技术从紫山药中分离到黄酮醇合成酶Da FLS1基因编码序列(Gen Bank登录号:KJ022640)。Da FLS1基因编码序列全长为1 113 bp,其开放阅读框长度为1 005 bp,编码334个氨基酸。Da FLS1蛋白质属于水溶性胞质不稳定蛋白质,无跨膜区和信号肽结构。保守区域分析结果显示,Da FLS1蛋白质属于α-酮戊二酸和二价铁离子依赖型的加氧酶家族[2OG-Fe(II)Oxygenase superfamily];Da FLS1氨基酸序列与水仙(AFS63900)同源性最近(75%),其次是洋葱(AAT68476,74%),与金鱼草(ABB53382)的同源性仅为66%。系统进化分析结果显示,紫山药与其他作物亲缘关系较远。Da FLS1在紫山药幼嫩叶片中表达水平最高,并且在紫山药幼叶中的表达有2个高峰期,而在其他组织中的表达量极低或不表达,即Da FLS1在紫山药中的表达情况符合黄酮醇合成酶基因(FLS)的特征。上述结果说明,得到的基因为紫山药黄酮醇合成酶基因Da FLS1,具有FLS基因的生物信息学特征和表达特征。

关键词：紫山药黄酮醇合成酶黄酮醇 Da FLS1基因

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利用转录组高通量测序进行萝卜抽薹开花相关miRNA及靶基因鉴定

利用转录组高通量测序进行萝卜抽薹开花相关miRNA及靶基因鉴定

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中国园艺学会十字花科蔬菜分会第十二届学术研讨会

作者：聂姗姗罗小波徐良李超张凤娇龚义勤谢洋柳李旺南京农业大学园艺学院作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室南京210095

MicroRNA(miRNA)是一类内源的非编码小分子RNA,在植物生长发育过程起调控作用.本研究通过高通量测序技术,利用萝卜营养生长和生殖生长期叶片构建两个sRNA文库,以鉴定萝卜抽薹开花相关miRNA.结果显示,在两个文库中共鉴定出134个已知miRNA... 详细信息

MicroRNA(miRNA)是一类内源的非编码小分子RNA,在植物生长发育过程起调控作用.本研究通过高通量测序技术,利用萝卜营养生长和生殖生长期叶片构建两个sRNA文库,以鉴定萝卜抽薹开花相关miRNA.结果显示,在两个文库中共鉴定出134个已知miRNA和62个新型miRNA,分属于35和38个miRNA家族.差异表达分析鉴定到66个抽薹开花相关miRNA,包括42个已知和24个新型miRNA.利用qRT-PCR技术对9个miRNA及8个靶基因表达模式进行了验证;对43个miRNA家族的128个潜在靶基因进行了功能注释和分析,结果表明许多功能基因参与了萝卜抽薹开花过程和生长发育.本研究结果为解析miRNA介导的萝卜抽薹开花调控网络机制提供了重要参考.

关键词：萝卜抽薹开花微小RNA 靶基因高通量测序

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不结球白菜响应ABA和低温基因WRKY18的克隆及表达分析

不结球白菜响应ABA和低温基因WRKY18的克隆及表达分析

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中国园艺学会十字花科蔬菜分会第十二届学术研讨会

作者：黄菲艺唐君侯喜林马静王枫南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室江苏南京210095

WRKY转录因子是植物特有的一类转录因子,广泛参与植物的生长发育、生物及非生物胁迫响应.克隆和鉴定不结球白菜共同响应ABA和低温的WRKY基因,对研究不结球白菜抗逆分子机制和改良其抗逆性具有重要意义.采用电子克隆的方法在NCBI数据库... 详细信息

WRKY转录因子是植物特有的一类转录因子,广泛参与植物的生长发育、生物及非生物胁迫响应.克隆和鉴定不结球白菜共同响应ABA和低温的WRKY基因,对研究不结球白菜抗逆分子机制和改良其抗逆性具有重要意义.采用电子克隆的方法在NCBI数据库中进行不结球白菜WRKY18基因全长拼接,然后在不结球白菜'苏州青'品种中,克隆到一个与低温及ABA响应相关的WRKY基因,通过生物信息学手段和实时定量RT-PCR技术分析了该基因的序列结构特征及其在低温和ABA处理下的表达变化.结果表明:该基因全长为1080bp,含有978bp的开放阅读框,编码326个氨基酸,与油菜及拟南芥的WRKY18直系同源,氨基酸序列相似性分别为87％和73％,命名为BcWRKY18.序列分析表明,该编码蛋白为核蛋白,不含跨膜区,无信号钛,具有WRKYGQK基序(motif)约60个氨基酸残基的WRKY保守结构域,为WRKY转录因子家族成员.系统聚类分析指出了BcWRKY18蛋白的保守性及其在开花植物中的进化关系;序列结构和同源建模分析指出了BcWRKY18蛋白的保守结构域、蛋白质的二级及三级结构分布模型;实时定量RT-PCR检测了BcWRKY18基因在ABA和低温胁迫下的表达,表明低温和ABA都能诱导BcWRKY18基因表达,其表达模式都表现为快速升高-下降稳定-再升高-下降的动态过程,且BcWRKY18基因对ABA的响应比对低温的响应更快、更明显.

关键词：不结球白菜 WRKY18基因脱落酸低温胁迫基因克隆序列分析

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大白菜ADF7和ADF10基因协同表达特点分析

大白菜ADF7和ADF10基因协同表达特点分析

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中国园艺学会十字花科蔬菜分会第十二届学术研讨会

作者：马清华陈晓峰牟晋华侯喜林南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室江苏南京210095 南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室江苏南京210095 中国农业大学烟台研究院山东烟台264670 中国农业大学烟台研究院山东烟台264670

肌动蛋白解聚因子(Actin Depolymerizing Factors,ADFs)作为一个重要的肌动蛋白调节因子在植物防御真菌侵染过程起重要作用.本研究对大白菜ADF7和ADF10基因进行了序列和诱导表达特征分析.序列分析表明大白菜的ADF7基因与物种ADF7基因有... 详细信息

肌动蛋白解聚因子(Actin Depolymerizing Factors,ADFs)作为一个重要的肌动蛋白调节因子在植物防御真菌侵染过程起重要作用.本研究对大白菜ADF7和ADF10基因进行了序列和诱导表达特征分析.序列分析表明大白菜的ADF7基因与物种ADF7基因有较高的同源性,并且大白菜中的ADF7和ADF10具有相似的分子量和等电点,都没有信号肽.实时定量PCR(RT-PCR)对大白菜ADFs基因受病原菌侵染诱导表达特点分析表明,灰霉病原菌侵染后,ADF7和ADF10基因均呈现双波表达特点,分别在侵染12h和48h时表达量出现高峰值,表明ADFs基因在调节肌动蛋白的聚合和解聚过程中起协同表达作用.

关键词：大白菜肌动蛋白解聚因子基因表达灰霉菌

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萝卜铁转运蛋白基因RsIRT1分子特征分析

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南京农业大学学报 2013年第6期36卷 13-18页

作者：贺晓燕龚义勤徐良赖德强温天彩柳李旺南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/教育部园艺种质创新与利用工程研究中心/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺学院江苏南京210095

运用PCR和RT-PCR技术从萝卜中克隆出RsIRT1基因,其cDNA包含一个长度为1 038 bp的开放阅读框,编码345个氨基酸,蛋白质相对分子质量为36.37×103。TMHMM Server v2.0分析RsIRT1蛋白有8个跨膜结构域,推测为一种膜蛋白;蛋白序列同源分... 详细信息

运用PCR和RT-PCR技术从萝卜中克隆出RsIRT1基因,其cDNA包含一个长度为1 038 bp的开放阅读框,编码345个氨基酸,蛋白质相对分子质量为36.37×103。TMHMM Server v2.0分析RsIRT1蛋白有8个跨膜结构域,推测为一种膜蛋白;蛋白序列同源分析表明,萝卜RsIRT1(AFJ05595)与拟南芥AtIRT1(XP-002869968)、遏蓝菜TcIRT1-P(CAL25151)的遗传距离最近。半定量RT-PCR表达分析表明,正常铁营养时RsIRT1基因在萝卜花瓣、花蕾、叶片和根中均不表达,缺铁胁迫及缺铁加镉(100 mg·L-1)胁迫下表达,且缺铁加镉胁迫下,叶片和根中RsIRT1的表达量均高于缺铁胁迫。研究结果表明RsIRT1基因受外源缺铁和镉胁迫所诱导,RsIRT1参与金属铁和镉的吸收和转运过程。

关键词：萝卜 IRT1基因镉表达分析

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西瓜核心种质枯萎病抗性与SRAP分子标记的关联分析

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园艺学报 2013年第7期40卷 1298-1308页

作者：羊杏平刘广侯喜林徐锦华张曼南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室南京210095 江苏省农业科学院蔬菜研究所南京210014

对35份西瓜核心种质进行了抗枯萎病鉴定,再采用SRAP分子标记技术对35份核心种质进行多态性分析。从63对引物组合中筛选出46对多态性引物。SRAP扩增共产生445个条带,其中262条为多态性条带,多态率为58.88%。平均每对引物产生9.67个条带... 详细信息

对35份西瓜核心种质进行了抗枯萎病鉴定,再采用SRAP分子标记技术对35份核心种质进行多态性分析。从63对引物组合中筛选出46对多态性引物。SRAP扩增共产生445个条带,其中262条为多态性条带,多态率为58.88%。平均每对引物产生9.67个条带。在对供试材料进行群体结构分析的基础上,利用TASSEL软件对多态性标记与枯萎病抗性进行关联分析。群体遗传结构分析将35份西瓜核心种质分为3大群体:1个野生西瓜群体和2个栽培种群体。分析发现在2个栽培种群体中存在基因渗透。聚类分析结果与群体遗传结构分析结果一致,分为4个类群,其中第2类群又细分为5个小类群。聚类分析结果说明具有相同抗性水平的材料倾向于聚在一起。关联分析发现有1个标记位点与枯萎病抗性显著关联(P<0.01),该位点对表型性状的解释率为0.2035。本研究结果表明利用SRAP标记可以有效地对西瓜种质资源进行群体结构的划分,且关联分析能够找到与西瓜枯萎病抗性相关联的SRAP标记,为西瓜抗病育种和分子标记辅助选择奠定了基础。

关键词：西瓜枯萎病抗性 SRAP 聚类分析关联分析

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结球甘蓝小孢子胚植株再生体系的优化

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江苏农业学报 2013年第1期29卷 228-230页

作者：曾爱松宋立晓高兵严继勇江苏省农业科学院蔬菜研究所江苏南京210014 南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室江苏南京210095

游离小孢子培养技术在种质资源创新、加速新品种选育方面的作用已得到广大科研育种工作者的广泛认可与关注。目前，结球甘蓝游离小孢子培养技术取得了很大的进展，尤其是在如何提高小孢子胚胎发生频率方面的技术体系已趋近成熟，但是对... 详细信息

游离小孢子培养技术在种质资源创新、加速新品种选育方面的作用已得到广大科研育种工作者的广泛认可与关注。目前，结球甘蓝游离小孢子培养技术取得了很大的进展，尤其是在如何提高小孢子胚胎发生频率方面的技术体系已趋近成熟，但是对小孢子胚植株再生频率的研究缺乏系统性。

关键词：结球甘蓝小孢子胚植株再生优化

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萝卜蛋白组分析中叶片蛋白质高效提取方法

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分子植物育种 2012年第6期10卷 756-760页

作者：相菲徐良王燕龚义勤赖德强柳李旺南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室南京农业大学园艺学院南京210095

以萝卜‘NAU-JLQX09’叶片为材料,分别采用Tris-HCl/TCA-丙酮沉淀法和改进的PEG分级沉淀法提取蛋白质,通过双向凝胶电泳技术比较两种方法的效果。结果表明,应用Tris-HCl/TCA-丙酮沉淀法提取的蛋白2-DE图谱可识别出640个蛋白点;而改进的... 详细信息

以萝卜‘NAU-JLQX09’叶片为材料,分别采用Tris-HCl/TCA-丙酮沉淀法和改进的PEG分级沉淀法提取蛋白质,通过双向凝胶电泳技术比较两种方法的效果。结果表明,应用Tris-HCl/TCA-丙酮沉淀法提取的蛋白2-DE图谱可识别出640个蛋白点;而改进的PEG分级沉降法的蛋白组分(F1,F2以及F3)2-DE图谱可清晰识别蛋白点数目分别为537,170与852,总蛋白点数目多且高丰度蛋白RuBisCO主要被沉降在F2中,F3中分离到更多的低丰度蛋白点。因此,在进行萝卜叶片蛋白质组分析时,采用PEG分级沉降法提取叶片蛋白,可获得较高质量的2-DE凝胶图谱。研究结果为应用蛋白质组学解析萝卜重要性状形成分子基础提供了良好的技术支持。

关键词：萝卜蛋白质提取蛋白质组学双向电泳

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不结球白菜小孢子胚胎发生过程及发育途径研究

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南京农业大学学报 2012年第2期35卷 21-26页

作者：崔群香王倩李英侯喜林南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室江苏南京210095 金陵科技学院园艺学院江苏南京210038

采用FDA荧光染色法对小孢子游离培养的发育过程进行了观察。结果表明:不结球白菜花粉母细胞减数分裂释放出的小孢子发育到单核靠边期及稍后时期染色最深、活力最强。多数游离小孢子培养经历的发育过程与合子胚相似,并且胚胎发育迅速,6～... 详细信息

采用FDA荧光染色法对小孢子游离培养的发育过程进行了观察。结果表明:不结球白菜花粉母细胞减数分裂释放出的小孢子发育到单核靠边期及稍后时期染色最深、活力最强。多数游离小孢子培养经历的发育过程与合子胚相似,并且胚胎发育迅速,6～9 d产生大量球型胚,13 d开始出现子叶型胚胎。小孢子胚胎发育途径既有对称分裂并产生胚胎的途径(B途径),也有第1次不对称有丝分裂的方式;第1次不对称分裂后,既有营养细胞单独发育成胚的现象(A途径),也有营养细胞和生殖细胞共同发育成胚的现象(E途径),但未发现生殖细胞单独发育成胚的现象。

关键词：不结球白菜小孢子胚胎发生发育途径

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