检索结果-内蒙古大学图书馆

不结球白菜BrCDF1的克隆和蛋白亚细胞定位及其与BrFKF1蛋白的互作验证

南京农业大学学报 2017年第5期40卷 812-819页

作者：吴小婷邵帅旭李英张昌伟侯喜林沈振国刘同坤南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室江苏南京210095 南京农业大学生命科学学院江苏南京210095

[目的]本文旨在揭示CDF1基因在不结球白菜(Brassica rapa ***)抽薹开花过程中的调控机制,验证其是否与FKF1蛋白发生互作。[方法]以‘苏州青’为材料,采用同源克隆方法获得BrCDF1基因全长序列,并与其他物种进行氨基酸序列比对;将BrCDF1... 详细信息

[目的]本文旨在揭示CDF1基因在不结球白菜(Brassica rapa ***)抽薹开花过程中的调控机制,验证其是否与FKF1蛋白发生互作。[方法]以‘苏州青’为材料,采用同源克隆方法获得BrCDF1基因全长序列,并与其他物种进行氨基酸序列比对;将BrCDF1与报告基因YFP融合构建亚细胞定位载体p Early Gate101-BrCDF1-YFP,采用农杆菌介导的方法将其瞬时表达于本氏烟(Nicotiana benthamiana)叶片中;激光共聚焦显微镜观察,利用酵母双杂交和双分子荧光互补技术验证不结球白菜BrCDF1和BrFKF1蛋白是否存在互作。[结果]BrCDF1基因含有876 bp开放阅读框,编码292个氨基酸。与甘蓝型油菜(Brassica napus)、野甘蓝(原变种)(Brassica oleracea ***)、萝卜(Raphanus sativus)的氨基酸序列比对结果显示:BrCDF1在进化过程中的保守程度分别为91.11%、88.25%、84.76%,保守性较高。BrCDF1蛋白定位于细胞核中,BrCDF1和BrFKF1之间存在相互作用。[结论]BrCDF1定位于细胞核,并且与BrFKF1互作,在进化过程中保守性较高,并可能参与了不结球白菜的光周期开花途径。

关键词：不结球白菜 BrCDF1 亚细胞定位酵母双杂交双分子荧光互补

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全基因组分析鉴定正向选择基因并揭示其在白菜基因组中的分布、表达和甲基化概况

全基因组分析鉴定正向选择基因并揭示其在白菜基因组中的分布、表...

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中国作物学会油料作物专业委员会第八次会员代表大会暨学术年会

作者：郭月刘静彭珍李英候喜林杜建厂江苏省农业科学院种质资源与生物技术研究所江苏省农业生物学重点实验室江苏省农业科学院经济作物研究所农业部长江下游棉花与油菜重点实验室江苏省现代作物生产协同创新中心南京农业大学园艺学院作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室

普遍认为,正向选择是生物机体表型多样化背后的主要进化力量之一。然而,正向选择基因的特征性质尚缺乏具体详细的研究。本研究中,我们对白菜和甘蓝间的直系同源基因进行了全基因组分析,最终得到468个潜在的正向选择基因。结果表明:(1)... 详细信息

普遍认为,正向选择是生物机体表型多样化背后的主要进化力量之一。然而,正向选择基因的特征性质尚缺乏具体详细的研究。本研究中,我们对白菜和甘蓝间的直系同源基因进行了全基因组分析,最终得到468个潜在的正向选择基因。结果表明:(1)正向选择基因在植物激素信号转导途径以及转录因子家族中富集;(2)正向选择基因的表达水平显著低于随机选取的非正向选择对照组基因;(3)具有组织表达特异性的正向选择基因在愈伤和生殖组织(花和角果)中的表达量显著高于营养组织(根、茎和叶);(4)正向选择基因的比例与三倍化基因保留的拷贝数正相关,但正向选择基因的表达水平却随着三倍化基因拷贝数的增加而降低;(5)正向选择基因在内含子区域的CG和CHG甲基化水平显著高于启动子和外显子区域;(6)转座元件的百分比与正向选择基因的甲基化水平成正比,DNA的甲基化(尤其是CG背景)具有降低正向选择基因表达量的趋势。本研究为进一步了解白菜正向选择基因的特征、演化、功能、表达以及甲基化提供了理论依据。

关键词：正向选择基因分布表达甲基化白菜

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不结球白菜农杆菌介导离体转化法研究

不结球白菜农杆菌介导离体转化法研究

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第八届全国植物组培脱毒快繁及工厂化种苗生产技术学术研讨会

作者：高立伟杨洋张昌伟侯喜林南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室南京210095

本文论述了获得转基因不结球白菜的转化和再生程序,通过对组织培养体系优化增加白菜再生频率.使用pCas9介导的不结球白菜基因编辑载体,含有除草剂抗性基因筛选的根癌土壤杆菌菌株GV3101与苏州青的下胚轴外植体共培养.在共培养的3个月内... 详细信息

本文论述了获得转基因不结球白菜的转化和再生程序,通过对组织培养体系优化增加白菜再生频率.使用pCas9介导的不结球白菜基因编辑载体,含有除草剂抗性基因筛选的根癌土壤杆菌菌株GV3101与苏州青的下胚轴外植体共培养.在共培养的3个月内获得转化的植物,通过除草剂Bar基因抗性筛选,阳性植株PCR验证得到转基因植株,为不结球白菜通过基因工程进行遗传改良提供了良好的技术支持.

关键词：不结球白菜组织培养离体转化法农杆菌介导

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芹菜AgERF4转录因子基因的克隆与表达分析

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园艺学报 2016年第11期43卷 2193-2202页

作者：吴蓓李梦瑶王广龙黄蔚王枫熊爱生南京农业大学园艺学院作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室南京210095

以‘六合黄心芹’芹菜为材料,克隆出编码乙烯反应元件结合蛋白基因AgERF4。序列分析表明,AgERF4含有1个长度为597 bp的开放阅读框,编码198个氨基酸,预测其蛋白质相对分子质量为21.43 kD,等电点为8.51。进化分析表明,ERF4转录因子在植物... 详细信息

以‘六合黄心芹’芹菜为材料,克隆出编码乙烯反应元件结合蛋白基因AgERF4。序列分析表明,AgERF4含有1个长度为597 bp的开放阅读框,编码198个氨基酸,预测其蛋白质相对分子质量为21.43 kD,等电点为8.51。进化分析表明,ERF4转录因子在植物中高度保守。AgERF4属于亲水性蛋白。酵母单杂交和β–半乳糖苷酶活性测定结果确定AgERF4转录因子和乙烯应答元件GCC Box具有较高的结合活性。RT-qPCR分析表明,AgERF4在芹菜叶片中的表达水平较高,在根和叶柄中表达水平较低;高温和干旱条件下AgERF4的表达呈先上升后下降的趋势,在盐处理的24 h内AgERF4的表达始终高于对照。AgERF4转录因子在芹菜非生物逆境胁迫调控过程中起着重要作用。

关键词：芹菜乙烯反应元件结合蛋白酵母单杂交非生物胁迫基因表达

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芸薹属作物游离小孢子培养研究进展

芸薹属作物游离小孢子培养研究进展

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第八届全国植物组培脱毒快繁及工厂化种苗生产技术学术研讨会

作者：张娅梁超凡黄天虹刘同坤侯喜林李英作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室南京农业大学园艺学院南京210095

本文对影响芸薹属作物游离小孢子培养胚胎发生的主要因素、影响小孢子植株再生的因素、小孢子植株倍性鉴定以及该技术的应用情况进行了总结,对今后的研究方向进行了展望,以期对芸薹属作物游离小孢子培养提供帮助.

关键词：芸薹属作物游离小孢子组织培养胚胎发生植株再生

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芹菜品种‘六合黄心芹’AgCCoAOMT基因的克隆及表达特性分析

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植物资源与环境学报 2016年第3期25卷 19-27页

作者：苑笑阳吴雪君聂力许珂熊爱生南京农业大学园艺学院作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室江苏南京210095

根据伞形科(Apiaceae)植物芹菜(Apium graveolens Linn.)的转录组数据库,从芹菜品种‘六合黄心芹’(‘Liuhe Huangxinqin’)叶片总RNA中克隆获得咖啡碱-辅酶A-O-甲基转移酶基因,命名为Ag CCo AOMT基因。序列分析结果表明:Ag CCo AOMT基... 详细信息

根据伞形科(Apiaceae)植物芹菜(Apium graveolens Linn.)的转录组数据库,从芹菜品种‘六合黄心芹’(‘Liuhe Huangxinqin’)叶片总RNA中克隆获得咖啡碱-辅酶A-O-甲基转移酶基因,命名为Ag CCo AOMT基因。序列分析结果表明:Ag CCo AOMT基因包含1个长度726 bp的开放阅读框(ORF),编码241个氨基酸;该基因编码的蛋白质为Ag CCo AOMT,其理论相对分子质量为27 010,理论等电点p I 5.35;在Ag CCo AOMT蛋白中,酸性氨基酸所占比例高于碱性氨基酸,脂肪族氨基酸所占比例约为芳香族氨基酸的3倍;该蛋白属于疏水性蛋白,并含有1个保守的Ado Met_MTases结构域,说明Ag CCo AOMT蛋白属于Ado Met_MTases超级家族;Ag CCo AOMT蛋白的三级结构包含多个α-螺旋和β-折叠,与紫花苜蓿(Medicago sativa Linn.)CCo AOMT蛋白三级结构的一致性为84.58%。多重比对和系统树分析结果表明:Ag CCo AOMT蛋白有较高的保守性;该蛋白与同科植物大阿米芹(Ammi majus Linn.)和欧芹〔Petroselinum crispum(Mill.)Nyman ex ***〕CCo AOMT蛋白的进化关系最近,与睡莲科(Nymphaeaceae)植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)CCo AOMT蛋白的进化关系较近。qRT-PCR检测结果表明:Ag CCo AOMT基因能够在‘六合黄心芹’的根、茎、叶柄和叶片中表达,且在叶片中的相对表达量极显著(P<0.01)高于其他组织,说明该基因的表达具有明显的组织特异性;不同生长发育阶段该基因在叶片中的相对表达量有明显差异,其在商品期(播种后第65天)的相对表达量极显著高于幼苗期(播种后第25天)和生长旺盛期(播种后第45天)。研究结果显示:Ag CCo AOMT基因与‘六合黄心芹’叶的老化和木质素含量升高有关,且在进化过程中具有较高的保守性。

关键词：芹菜 AgCCoAOMT基因序列分析多重比对表达特性

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胡萝卜肉桂醇脱氢酶基因的克隆及其对非生物胁迫的响应

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西北植物学报 2016年第7期36卷 1294-1301页

作者：刘堰珺马静王广龙黄蔚王枫熊爱生南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室园艺学院农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室南京210095

该实验采用RT-PCR技术,从胡萝卜‘黑田五寸’中克隆获得了编码肉桂醇脱氢酶(Cinnamyl alcohol dehydrogenase,CAD)的基因DcCAD。DcCAD序列长1 074bp,编码357个氨基酸。亲水/疏水性分析表明,DcCAD属于亲水性蛋白。系统进化分析显示,DcCA... 详细信息

该实验采用RT-PCR技术,从胡萝卜‘黑田五寸’中克隆获得了编码肉桂醇脱氢酶(Cinnamyl alcohol dehydrogenase,CAD)的基因DcCAD。DcCAD序列长1 074bp,编码357个氨基酸。亲水/疏水性分析表明,DcCAD属于亲水性蛋白。系统进化分析显示,DcCAD与番茄CAD(XP_010314515.1)亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,DcCAD基因在胡萝卜根、叶片和叶柄中的表达量差异显著,其相对表达量为叶片>根>叶柄。DcCAD基因对高温(38℃)、低温(4℃)、干旱(20%PEG)和盐(0.2mol·L-1 NaCl)胁迫均有响应,尤其对高温胁迫和低温胁迫响应明显,而且高温处理后1h和低温处理后2h表达量最高。研究推测,DcCAD基因对胡萝卜抗逆性具有一定的作用。

关键词：肉桂醇脱氢酶同源分析非生物胁迫表达分析胡萝卜

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不结球白菜抗坏血酸合成基因BcGME的同源克隆及胁迫下的表达分析

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南京农业大学学报 2016年第2期39卷 205-212页

作者：李妍王雪花陈忠文段伟科侯喜林李英南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室江苏南京210095

[目的]本文旨在探究逆境下BcGME基因与抗坏血酸(As A)含量的关系,为培育高品质的不结球白菜品种奠定理论基础。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为材料,同源克隆了BcGME基因的全长,应用生物信息学分析了其氨基酸序列,通过实时荧光定量PCR... 详细信息

[目的]本文旨在探究逆境下BcGME基因与抗坏血酸(As A)含量的关系,为培育高品质的不结球白菜品种奠定理论基础。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为材料,同源克隆了BcGME基因的全长,应用生物信息学分析了其氨基酸序列,通过实时荧光定量PCR技术测定了BcGME基因在过氧化氢胁迫和水淹胁迫下的表达水平,利用高效液相色谱(HPLC)测定了相应的抗坏血酸含量。[结果]BcGME基因包含一个长度为1 137 bp的开放式阅读框(ORF),编码379个氨基酸。推测其蛋白理论相对分子质量为42.97×103,理论等电点p I值为5.84,分子式为C1907H2949N519O570S22,属于不稳定蛋白。总平均疏水指数为-0.440,属于亲水蛋白。亚细胞定位预测该蛋白分布在细胞质中。BcGME氨基酸序列与十字花科大部分植物的相似性为90%以上,不结球白菜BcGME与十字花科的大白菜、甘蓝型油菜、拟南芥相应蛋白的进化距离较近。过氧化氢胁迫下,As A含量在6 h达到峰值,同时BcGME基因的表达量也达到最高;水淹胁迫下,1 d时As A含量最高为12.99μg·g^(-1),随后As A含量急速下降,1 d时的BcGME基因表达量是0 d的1.5倍。[结论]过氧化氢胁迫和水淹胁迫下,不结球白菜植株中BcGME基因的表达量变化趋势与As A含量变化趋势一致,说明GME可能是不结球白菜抗坏血酸合成途径中的关键调控基因。

关键词：不结球白菜 BcGME 抗坏血酸序列分析非生物胁迫

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水分胁迫对紫色不结球白菜花色苷合成及相关基因表达的影响

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西北农业学报 2016年第4期25卷 588-594页

作者：沈露露胡春梅许玉超王岩徐玮玮南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室南京210095

用250g·L-1的聚乙二醇(PEG 6000)溶液模拟水分胁迫处理‘紫冠1号’紫色不结球白菜,运用液质联用和荧光定量PCR方法,分析水分胁迫下其叶片中花色苷质量分数、成分的变化以及花色苷合成基因BcPAL、BcCHS、BcCHI、BcF3H、BcDFR、BcANS... 详细信息

用250g·L-1的聚乙二醇(PEG 6000)溶液模拟水分胁迫处理‘紫冠1号’紫色不结球白菜,运用液质联用和荧光定量PCR方法,分析水分胁迫下其叶片中花色苷质量分数、成分的变化以及花色苷合成基因BcPAL、BcCHS、BcCHI、BcF3H、BcDFR、BcANS和BcUFGT的表达特性。结果显示:1水分胁迫诱导不结球白菜积累花色苷;2共检测到11种主要的花色苷组分,分为矢车菊素类花色苷和飞燕草素类花色苷2大类,水分胁迫对不同花色苷质量分数的影响作用不同;3水分胁迫条件下,BcPAL、BcCHS和BcDFR基因的表达先升后降,BcF3H和BcUFGT基因在水分胁迫下被持续诱导表达,BcANS和BcCHI基因的表达量在胁迫初期有所下降,随后又逐渐升高。

关键词：不结球白菜水分胁迫花色苷基因表达

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芹菜肉桂酰辅酶A还原酶基因的克隆与表达分析

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南京农业大学学报 2016年第6期39卷 907-914页

作者：吴蓓李梦瑶王广龙黄蔚熊爱生南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室江苏南京210095

[目的]肉桂酰辅酶A还原酶CCR(cinnamoyl-Co A reductase)在植物木质素代谢中起重要的作用,能够将羟基肉桂酸还原生成肉桂醛。本文目的是研究不同芹菜中肉桂酰辅酶A还原酶基因AgCCR在芹菜中组织表达和非生物胁迫过程中的响应情况。[方法]... 详细信息

[目的]肉桂酰辅酶A还原酶CCR(cinnamoyl-Co A reductase)在植物木质素代谢中起重要的作用,能够将羟基肉桂酸还原生成肉桂醛。本文目的是研究不同芹菜中肉桂酰辅酶A还原酶基因AgCCR在芹菜中组织表达和非生物胁迫过程中的响应情况。[方法]以2个芹菜品种‘六合黄心芹’和‘文图拉’为材料,分别克隆出编码肉桂酰辅酶A还原酶的基因AgCCR。利用荧光定量PCR分析不同芹菜组织和2种芹菜在高温、低温、干旱和盐胁迫下AgCCR的表达情况。[结果]序列分析表明,‘六合黄心芹’和‘文图拉’中AgCCR基因均含有1个长度为1 014 bp的开放阅读框,编码337个氨基酸,二者的核苷酸位点有3个位点的差异,编码的氨基酸有1个位点的差异。对2个芹菜中的AgCCR基因进行多重比对并绘制进化树,发现其编码的氨基酸序列与其他15种植物的CCR蛋白同源性较高,氨基酸高度保守。荧光定量PCR(qRT-PCR)分析表明,芹菜AgCCR基因在‘六合黄心芹’和‘文图拉’叶中的表达水平较高,AgCCR基因在高温和低温下表达上调,在干旱处理下表达下调。[结论]芹菜AgCCR基因对多种非生物胁迫均有响应。特别是低温下该基因响应明显,表明AgCCR基因或许与芹菜抗寒机制相关。

关键词：芹菜肉桂酰辅酶A还原酶基因序列分析非生物胁迫基因表达

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