检索结果-内蒙古大学图书馆

遗传 2008年第10期30卷 1356-1362页

作者：孔令娜李巧王海燕曹爱忠陈佩度王秀娥南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室细胞遗传研究所南京210095

随机选取定位于小麦和大麦7个部分同源群上的135对EST、27对STS和253对SSR引物对24个可能的普通小麦-纤毛鹅观草二体异附加系的基因组DNA进行扩增。结果表明,55对引物在亲本普通小麦中国春、Inayama Komugi、纤毛鹅观草和Inayama Komugi... 详细信息

随机选取定位于小麦和大麦7个部分同源群上的135对EST、27对STS和253对SSR引物对24个可能的普通小麦-纤毛鹅观草二体异附加系的基因组DNA进行扩增。结果表明,55对引物在亲本普通小麦中国春、Inayama Komugi、纤毛鹅观草和Inayama Komugi-纤毛鹅观草双二倍体间有多态性扩增,其中31对引物可以在异附加系中扩增到纤毛鹅观草特异条带。根据PCR扩增结果,异附加系07K02、07K06、07K39、07K201、07K202、07K255和07K256所添加的纤毛鹅观草染色体归属小麦第1部分同源群;07K07、07K08、07K09、07K11、07K14和07K17所添加的纤毛鹅观草染色体归属小麦第2部分同源群;07K15、07K16、07K21和07K47所添加的纤毛鹅观草染色体归属小麦第6部分同源群。

关键词：小麦纤毛鹅观草异附加系部分同源群 EST STS

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水稻雄性不育恢复系明恢63的感光基因分析

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Acta Genetica Sinica 2003年第9期30卷 804-810页

作者：罗林广徐俊峰翟虎渠万建民南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室

水稻恢复系明恢 6 3是中国应用面积最大、利用最广泛的恢复系。利用抽穗期感光性近等基因系EG0～EG7及ER～LR对明恢 6 3进行的分析表明 ,明恢 6 3在E1 、E2 、E3位点分别带有E1 、e2 、E3基因 ,在Se 1位点带无感光功能的Se 1e 基因。进... 详细信息

水稻恢复系明恢 6 3是中国应用面积最大、利用最广泛的恢复系。利用抽穗期感光性近等基因系EG0～EG7及ER～LR对明恢 6 3进行的分析表明 ,明恢 6 3在E1 、E2 、E3位点分别带有E1 、e2 、E3基因 ,在Se 1位点带无感光功能的Se 1e 基因。进一步用抽穗期QTL近等基因系NIL(Hd1)和NIL(Hd4 )进行的研究表明 ,明恢 6 3带有显性感光基因E1 和无感光功能的Se 1e 基因 ,并推测明恢 6 3带有能抑制E1 基因表达的隐性抑制基因。认为籼型杂交稻抽穗期受不育系和恢复系感光基因及感光性抑制基因的共同作用。初步讨论了明恢 6 3广适性的遗传基础。

关键词：水稻(Oryza sativa L.) 近等基因系抽穗期感光基因

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二倍体马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因的克隆、序列分析及表达载体的构建

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遗传 2005年第3期27卷 417-422页

作者：卜庆云武亮杨世湖万建民南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室

根据GenBank发表的四倍体马铃薯栽培种(***)来源的马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因序列,用PCR方法从二倍体马铃薯IVP101(***)cDNA文库和基因组DNA扩增得到马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ的cDNA和DNA,命名为PINⅡ2x。测序表明,PINⅡ2x基因组DNA全长580bp... 详细信息

根据GenBank发表的四倍体马铃薯栽培种(***)来源的马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因序列,用PCR方法从二倍体马铃薯IVP101(***)cDNA文库和基因组DNA扩增得到马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ的cDNA和DNA,命名为PINⅡ2x。测序表明,PINⅡ2x基因组DNA全长580bp,含有一个115bp的内含子,cDNA有462bp(除去终止密码子)。推测的PINⅡ2x分子量是16.6kD,等电点6.08。与其他马铃薯蛋白抑制剂Ⅱ同源性比较表明,核苷酸同源性高达88%;推测的氨基酸序列同源性为93%,并具有相同的活性中心。RT PCR表明,PINⅡ2x的mRNA在叶片中具有强烈的伤害诱导表达特性。同时,构建了分别以水稻ActⅠ启动子和玉米Ubi启动子驱动PINⅡ2x基因的双元载体。

关键词：二倍体马铃薯(Solanum.phurejia) 蛋白酶抑制剂Ⅱ 伤害诱导

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GmHMADP参与高温高湿下大豆种子活力形成及铜镉胁迫响应的研究

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中国农业科学 2018年第14期51卷 2642-2654页

作者：朱雅婧周亚丽刘骕骦魏家萍刘小林沈英姿赵海红麻浩南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室

【目的】高温高湿、重金属等非生物胁迫是制约大豆生产,影响种子发育和品质的重要因素。通过对大豆GmHMADP的研究,揭示其在重金属镉、铜和高温高湿胁迫下的表达水平以及功能,以期为培育高活力的逆境耐受性大豆新品种提供理论依据和实践... 详细信息

【目的】高温高湿、重金属等非生物胁迫是制约大豆生产,影响种子发育和品质的重要因素。通过对大豆GmHMADP的研究,揭示其在重金属镉、铜和高温高湿胁迫下的表达水平以及功能,以期为培育高活力的逆境耐受性大豆新品种提供理论依据和实践基础。【方法】利用Primer Premier 5.0软件设计引物,以宁镇1号和湘豆3号2个品种叶片的cDNA为模板,分离大豆GmHMADP全长cDNA序列。通过NCBI网站BLAST对GmHMADP同源性氨基酸序列进行搜索,并用DNAMAN软件进行氨基酸序列比对。同时,以XhoⅠ和SalⅠ为酶切位点构建35S::GmHMADP-GFP融合表达载体,分析其在烟草叶肉细胞的瞬时表达,进行亚细胞定位。利用实时荧光定量PCR技术对GmHMADP的组织特异性表达及其在高温高湿和CuSO、CdCl处理下的表达进行分析。以XbaⅠ和Bam HⅠ为酶切位点,利用p BI121载体,构建融合表达载体,将GmHMADP在野生型拟南芥中过表达,获得3个纯合的T3转基因株系,对高温高湿胁迫下拟南芥的种子活力以及过表达拟南芥植株对铜、镉胁迫的耐受性进行分析。【结果】获得大豆GmHMADP全长cDNA序列,该基因包含1个996 bp的完整开放阅读框,具有4个外显子和3个内含子。多序列比对结果表明,GmHMADP氨基酸序列含有2个金属离子结合位点特征序列CXXC。亚细胞定位结果表明GmHMADP蛋白定位于细胞膜与细胞核上。组织特异性分析结果表明,GmHMADP在宁镇1号和湘豆3号2个品种的发育和成熟中的种子中表达量较高。与相应的对照组相比,在宁镇1号种子中,高温高湿胁迫48、96和168 h后,GmHMADP的表达量显著(P<0.01)升高;在抗性品种湘豆3号中,该基因在处理24、48、96和168 h时表达量显著(P<0.01)升高;湘豆3号中,GmHMADP的表达量在不同浓度Cu、Cd的诱导下均显著(P<0.01)升高;而宁镇1号中,GmHMADP的表达量仅在50μmol·LCu和200μmol·L~() Cd处理下显著(P<0.01)升高。GmHMADP过表达拟南芥株系经高温高湿胁迫后的发芽势、发芽率及种子活力均显著(P<0.01)高于野生型植株;经Cu、Cd胁迫后,转基因拟南芥株系的根长和干重均显著(P<0.05)高于野生型植株。【结论】GmHMADP参与高温高湿胁迫下种子活力的形成并响应Cu、Cd胁迫,在拟南芥中过表达GmHMADP可提高拟南芥的种子活力以及对Cu、Cd胁迫的耐受性。

关键词：大豆 GmHMADP 高温高湿 Cu Cd 种子活力

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水稻OsGT43B基因功能及其调控因子分析

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南京农业大学学报 2020年第2期43卷 213-222页

作者：陈露露王建飞南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室

[目的]本研究旨在发掘糖基转移酶在水稻中的生物学功能,为明确其作用的分子机制奠定基础。[方法]以糖基转移酶(glycosyltransferase,GT,EC 2.4.x.y)GT43家族OsGT 43B(Os03g0287800)基因T-DNA插入突变体osgt 43b为材料,调查纯合株系的主... 详细信息

[目的]本研究旨在发掘糖基转移酶在水稻中的生物学功能,为明确其作用的分子机制奠定基础。[方法]以糖基转移酶(glycosyltransferase,GT,EC 2.4.x.y)GT43家族OsGT 43B(Os03g0287800)基因T-DNA插入突变体osgt 43b为材料,调查纯合株系的主要农艺性状,利用分离株系分析性状的遗传模式;采用荧光定量PCR分析OsGT 43B在水稻不同组织中表达特征;通过构建重组质粒转化水稻原生质体,分析OsGT43B及其上游调控因子OsKNOX在细胞中位置;采用双分子荧光素酶报告基因系统检测OsKNOX在水稻原生质体中的转录活性和对OsGT 43B的调控作用。[结果]2个独立的osgt 43b突变体籽粒长度、宽度、厚度、千粒质量和糙米率显著减小,其性状变异由OsGT 43B基因变异引起,为隐性突变;OsGT43B在水稻灌浆籽粒中高表达,在穗和根中的表达次之,表达量随穗发育和籽粒灌浆进程逐渐提高;亚细胞定位结果显示,OsGT43B-GFP融合蛋白在高尔基体中表达,OsKNOX-GFP荧光位于细胞核中。转录活性分析结果显示:OsKNOX具有转录激活功能,能激活OsGT 43B表达。[结论]糖基转移酶基因OsGT 43B正向调控水稻籽粒大小,其表达受OsKNOX调控。

关键词：水稻糖基转移酶粒型

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大豆GmLEA的分离及其在种子活力中的功能分析

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中国农业科学 2018年第23期51卷 4397-4408页

作者：周亚丽朱雅婧赵飞云王爽刘骕骦郭凌凯赵海红麻浩南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室

【目的】大豆(Glycine max (L.) Merr.)种子从发育成熟期(R6或R7期)开始具有活力,在此时期容易受到高温高湿胁迫,导致种子活力下降。通过对Gm LEA的研究,揭示其高温高湿胁迫下的表达水平以及功能,为一步深入研究Gm LEA在参与大豆种子活... 详细信息

【目的】大豆(Glycine max (L.) Merr.)种子从发育成熟期(R6或R7期)开始具有活力,在此时期容易受到高温高湿胁迫,导致种子活力下降。通过对Gm LEA的研究,揭示其高温高湿胁迫下的表达水平以及功能,为一步深入研究Gm LEA在参与大豆种子活力形成及响应非生物胁迫等方面奠定基础。【方法】利用Primer Premier 5.0软件设计引物,以宁镇1号和湘豆3号叶片的cDNA为模板,分离大豆GmLEA的cDNA序列全长。通过NCBI网站BLAST对GmLEA同源性氨基酸序列进行搜索,使用MEGA 6.0和DNAMAN多重比对蛋白质序列,并采用MEGA 6.0的N-J算法构建进化树。通过酵母双杂交试验验证GmLEA与GmCDPKSK5在酵母体内的互作。构建亚细胞定位和双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)载体,通过基因枪介导法转化烟草叶片分析GmLEA与GmCDPKSK5在烟草叶片细胞内的互作及其编码蛋白的亚细胞定位。利用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)对GmLEA的组织特异性表达及其在高温高湿胁迫下的表达进行分析。构建pBI121融合表达载体,通过农杆菌介导法获得3个纯合的T3代过表达拟南芥株系,对高温高湿胁迫下拟南芥的种子活力进行分析。【结果】获得大豆GmLEA的cDNA序列全长,该基因包含一个长1 377 bp的开放阅读框(ORF);且该基因所编码的蛋白定位在烟草叶片细胞的细胞膜上。酵母双杂交试验与双分子荧光互补(BiFC)试验结果表明,GmLEA与GmCDPKSK5分别在酵母体内与烟草叶片细胞的细胞膜上存在特异性互作。组织特异性分析结果表明,GmLEA主要在宁镇1号和湘豆3号2个品种发育和成熟的种子中表达。在湘豆3号种子发育过程中Gm LEA的表达量呈先上升后下降的趋势,在开花后50 d达最大值,在宁镇1号种子发育过程中该基因的表达量呈上升的趋势,在开花后60 d达到最大值。高温高湿胁迫后,与对照相比,Gm LEA在湘豆3号中96 h时下调表达,其余时间点均上调表达,在宁镇1号中,仅24 h时下调表达。GmLEA过表达拟南芥株系经高温高湿胁迫后的发芽势、发芽率及种子活力均显著(P<0.01)高于野生型植株。【结论】GmLEA参与高温高湿胁迫下种子活力的形成,与GmCDPKSK5存在特异性互作,二者可能共同参与高温高湿胁迫下种子活力的形成。

关键词：大豆 GmLEA GmCDPKSK5 高温高湿种子活力

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野生大豆与栽培大豆种子差异蛋白质组学研究

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生物化学与生物物理进展 2007年第12期34卷 1296-1302页

作者：李春梅杨守萍盖钧镒喻德跃南京农业大学大豆研究所国家大豆改良中心作物遗传与种质创新国家重点实验室南京210095

运用蛋白质组学方法比较研究3个野生大豆(Glycinesoja)和3个栽培大豆(Glycinemax)的种子贮藏蛋白差异情况.结果发现,在考马斯亮蓝染色的双向电泳pH4～7的胶上,经过PDQuest图像分析软件平均可检测到550个左右的蛋白质点.进一步分析发现,... 详细信息

运用蛋白质组学方法比较研究3个野生大豆(Glycinesoja)和3个栽培大豆(Glycinemax)的种子贮藏蛋白差异情况.结果发现,在考马斯亮蓝染色的双向电泳pH4～7的胶上,经过PDQuest图像分析软件平均可检测到550个左右的蛋白质点.进一步分析发现,表达量变化2.5倍以上的点有10个,其中大部分蛋白质仅在栽培大豆中检测到.对这10个蛋白质点进行了胶内酶解,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定均得到了肽质量指纹图谱.搜索大豆UniGene库和NCBI库共鉴定出5个蛋白质,主要是与大豆抗性、抗营养以及种子萌发相关的蛋白质,包括大豆血凝素,种子成熟蛋白PM24,糖结合蛋白,胰蛋白酶抑制剂p20以及成熟多肽.对这些蛋白质可能的作用进行了讨论.

关键词：栽培大豆野生大豆蛋白质组双向电泳基质辅助激光解析电离飞行时间质谱

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通过小麦Ms2近等基因系的抑制缩减杂交分析揭示小穗和花药中差异表达基因(英文)

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植物生理与分子生物学学报 2005年第2期31卷 175-182页

作者：张政值马正强刘大钧南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室南京210095

以Ms2 近等基因系处于减数分裂期的可育小穗cDNA 作为驱动因子(driver),以同一时期的不育小穗cDNA作为测验因子(tester)进行缩减杂交(SSH),将扩增后的缩减杂交产物进行克隆,构建了一个包含882 个重组克隆的SSH 文库。分别以可育小穗和... 详细信息

以Ms2 近等基因系处于减数分裂期的可育小穗cDNA 作为驱动因子(driver),以同一时期的不育小穗cDNA作为测验因子(tester)进行缩减杂交(SSH),将扩增后的缩减杂交产物进行克隆,构建了一个包含882 个重组克隆的SSH 文库。分别以可育小穗和不育小穗的cDNA 为探针与SSH 文库克隆进行反式Northern 杂交,结果显示接近90% 的克隆在不育小穗中呈上调表达。对文库中21 个克隆插入片段的序列相似性分析表明其中有18 个与来源于穗部或减数分裂期的花药cDNA 同源。13 个克隆的编码产物与已知功能的蛋白质同源,其中5 个参与碳代谢活动,4 个参与胞内分子的运输,2 个蛋白产物参与染色体的构成及染色体的结构变化,1 个是生长素抑制蛋白,1 个是转录因子。用中国春缺体四体材料对9 个克隆以Ms2 近等基因系处于减数分裂期的可育小穗cDNA 作为驱动因子(driver),以同一时期的不育小穗cDNA作为测验因子(tester)进行缩减杂交(SSH),将扩增后的缩减杂交产物进行克隆,构建了一个包含882 个重组克隆的SSH 文库。分别以可育小穗和不育小穗的cDNA 为探针与SSH 文库克隆进行反式Northern 杂交,结果显示接近90% 的克隆在不育小穗中呈上调表达。对文库中21 个克隆插入片段的序列相似性分析表明其中有18 个与来源于穗部或减数分裂期的花药cDNA 同源。13 个克隆的编码产物与已知功能的蛋白质同源,其中5 个参与碳代谢活动,4 个参与胞内分子的运输,2 个蛋白产物参与染色体的构成及染色体的结构变化,1 个是生长素抑制蛋白,1 个是转录因子。用中国春缺体四体材料对9 个克隆进行了染色体定位,其中一个克隆定位于第四染色体同源群,与Ms2 所在的染色体同属一个同源群。通过搜索水稻的同源BAC (bacterial artificialchromosome)和PAC (P1 artificial chromosome)克隆,推测另外11 个克隆的染色体位置,其中4 个克隆可能位于第四染色体同源群。用RNA点杂交对11 个克隆进行表达谱分析,其中8 个克隆在不育株的小穗和花药中呈上调表达。

关键词：小麦雄性不育 SSH 基因表达

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水稻剑叶角度qFla-8-2位点的精细定位

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中国水稻科学 2016年第1期30卷 27-34页

作者：朱长丰梁利君曾思远李天伟董冠杉洪德林南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室南京210095

为更好地理解水稻大剑叶角的分子遗传机制,对已初定位的控制剑叶角度的qFla-8进行精细定位和候选基因预测。利用以863B为受体亲本、A7444为供体亲本衍生的BC3F3群体中仅在目标基因区段杂合的172个单株自交构建的次级分离群体,对qFla-8... 详细信息

为更好地理解水稻大剑叶角的分子遗传机制,对已初定位的控制剑叶角度的qFla-8进行精细定位和候选基因预测。利用以863B为受体亲本、A7444为供体亲本衍生的BC3F3群体中仅在目标基因区段杂合的172个单株自交构建的次级分离群体,对qFla-8所在的RM6215-RM8265区间9个SSR标记的基因型进行鉴定,结合表型数据进一步缩短qFla-8所在染色体区段。结果发现qFla-8位点所在染色体区段存在两个紧密连锁的位点qFla-8-1和qFla-8-2。其中,qFla-8-1位于RM6215和RM3153之间,可解释22.33%的表型变异;qFla-8-2位于RM1309和RM3491之间,可解释23.81%的表型变异。进一步对加性效应较大的qFla-8-2精细定位,通过开发插入缺失(InDel)分子标记,将qFla-8-2位点限定于InDel标记Z7和SSR标记RM23071之间,该区间的物理距离为67 kb。该区段包含3个预测基因Os08g0408200,Os08g0408300和Os08g0408500,分别编码功能类似GAMYB的WD40结构域蛋白、假定蛋白以及类APETALA2蛋白。

关键词：水稻剑叶角度 QTL 精细定位

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SSR分子标记开发策略及评价

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遗传 2004年第5期26卷 763-768页

作者：张增翠侯喜林南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室南京210095

SSR标记以其多态性丰富、提供遗传信息多、操作便利并在基因组中分散分布等优点已成为最受人们欢迎的分子标记之一,在许多领域广泛应用。但SSR标记的主要缺点是首先要从该物种中获取重复序列两侧的序列信息,并设计引物,而后才能被利用... 详细信息

SSR标记以其多态性丰富、提供遗传信息多、操作便利并在基因组中分散分布等优点已成为最受人们欢迎的分子标记之一,在许多领域广泛应用。但SSR标记的主要缺点是首先要从该物种中获取重复序列两侧的序列信息,并设计引物,而后才能被利用。综述了几种有代表性的SSR标记开发策略,旨在为各物种SSR标记的开发提供参考信息。

关键词： SSR 开发策略

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