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南京农业大学学报 2017年第2期40卷 266-272页

作者：乐星星顾向阳南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

[目的]比较亚硝酸盐对不同进水碳源驯化的强化生物除磷(EBPR)污泥除磷活性的抑制作用,分析亚硝酸盐影响EBPR污泥除磷效率的机制。[方法]采用厌氧-好氧型序批式生物反应器(SBR),分别以乙酸(SBR-1)和丙酸(SBR-2)为进水碳源驯化EBPR污泥,... 详细信息

[目的]比较亚硝酸盐对不同进水碳源驯化的强化生物除磷(EBPR)污泥除磷活性的抑制作用,分析亚硝酸盐影响EBPR污泥除磷效率的机制。[方法]采用厌氧-好氧型序批式生物反应器(SBR),分别以乙酸(SBR-1)和丙酸(SBR-2)为进水碳源驯化EBPR污泥,待反应器达到稳态运行状态后取1个运行周期,定期取样测定混合液中磷酸根和亚硝氮质量浓度的周期变化,比较亚硝酸盐对2种EBPR污泥除磷活性的影响,测定2种EBPR污泥的脱氮活性;通过研究亚硝酸盐对运行周期中聚磷菌胞内聚羟基烷酸(PHA)和糖原合成与分解代谢的影响,分析亚硝酸盐抑制EBPR除磷活性的机制。[结果]以乙酸为进水碳源的SBR-1和以丙酸为进水碳源的SBR-2分别经过8和11 d的驯化期成功实现了稳定的EBPR功能,除磷效率稳定在98%以上;较高浓度的亚硝酸盐对乙酸驯化的EBPR污泥和丙酸驯化的EBPR污泥均可产生抑制作用,其中以丙酸驯化的EBPR污泥对亚硝酸盐更为敏感,在亚硝氮质量浓度大于或等于5 mg·L^(-1)时即会丧失磷的吸收功能;乙酸驯化的EBPR污泥和丙酸驯化的EBPR污泥均有一定的脱氮能力,以乙酸为碳源驯化而成的EBPR污泥其脱氮活性明显高于丙酸驯化而成的EBPR污泥;在亚硝酸盐抑制除磷活性的同时聚磷菌胞内PHA和糖原代谢也受到明显的抑制作用。[结论]与乙酸驯化的EBPR污泥相比,丙酸驯化的EBPR污泥对亚硝酸盐引起的抑制作用更为敏感,以乙酸为进水碳源有利于EBPR工艺的稳定运行。

关键词：强化生物除磷亚硝酸盐糖原聚羟基烷酸

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中度嗜盐菌Halomonas sp. W2的分离和鉴定及其高产四氢嘧啶特性研究

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南京农业大学学报 2017年第1期40卷 109-115页

作者：姚倩倩顾向阳南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

[目的]从含盐环境中富集分离中度嗜盐菌,并进行菌种鉴定,分析确定与耐盐特性相关的主要相容性溶质,探索利用分离菌株合成四氢嘧啶的可行性。[方法]从盐池土中富集分离耐盐或嗜盐的乙酸降解菌,通过生理生化特性测定和16S rDNA序列的分析... 详细信息

[目的]从含盐环境中富集分离中度嗜盐菌,并进行菌种鉴定,分析确定与耐盐特性相关的主要相容性溶质,探索利用分离菌株合成四氢嘧啶的可行性。[方法]从盐池土中富集分离耐盐或嗜盐的乙酸降解菌,通过生理生化特性测定和16S rDNA序列的分析,将所得菌株鉴定至相应的属或种。通过摇瓶试验研究分离菌株耐盐生长的特征,从所得的菌株中提取、分析相容性溶质并测量其含量,初步分析分离菌株耐盐生长的机制。在高盐培养基中诱导嗜盐菌胞内相容性溶质的合成,然后在低渗盐溶液中测定相容性溶质的释放率,之后再将菌体转移至高渗培养基中研究相容性溶质重新合成的效率。[结果]从盐池土中成功分离到一株中度嗜盐菌W2,根据生理生化特性和16S rDNA序列比对结果,菌株W2属于Halomonas属,其16S rDNA序列与Halomonas ventosae Al12~T(AY268080)的相似性最高(99.93%)。菌株W2可耐受的NaCl质量浓度范围为25~200 g·L^(-1),其最适生长所需的NaCl质量浓度为100 g·L^(-1)。在高盐培养基中菌株W2单位质量细胞合成的四氢嘧啶产率达161 mg·g^(-1),占胞内4种相容性溶质总量的70.8%。低渗条件下导致W2菌体内四氢嘧啶释放的最适盐质量浓度为30 g·L^(-1),低渗冲击5 min以后释放率达61.2%,而转入高渗培养基中培养3 h后即可重新合成。[结论]Halomonas sp.W2是一株以四氢嘧啶为主要相容性溶质的中度嗜盐菌,该菌四氢嘧啶的产率较高,而且具有高渗合成、低渗释放的功能,因而在四氢嘧啶的生物合成中具有较好的应用潜力。

关键词：中度嗜盐菌四氢嘧啶细菌泌乳高渗-低渗冲击

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取代脲类除草剂的微生物降解

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微生物学通报 2017年第8期44卷 1967-1979页

作者：谷涛李永丰张迹闫新蒋建东李顺鹏江苏省农业科学院植物保护研究所江苏南京210014 淮阴师范学院江苏省环洪泽湖生态农业生物技术重点实验室江苏淮安223300 南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

取代脲类除草剂主要用来防除一年生禾本科杂草和阔叶杂草,自20世纪中期推入市场以来,在世界范围内被广泛使用,已成为重要的除草剂之一。随着取代脲类除草剂的持续施用,其在环境中的残留严重超标,危害日益凸显。因此,取代脲类除草剂在环... 详细信息

取代脲类除草剂主要用来防除一年生禾本科杂草和阔叶杂草,自20世纪中期推入市场以来,在世界范围内被广泛使用,已成为重要的除草剂之一。随着取代脲类除草剂的持续施用,其在环境中的残留严重超标,危害日益凸显。因此,取代脲类除草剂在环境中的吸附、迁移和降解等行为备受关注。研究表明细菌降解N,N-二甲基取代脲类除草剂主要是通过连续脱甲基作用后断脲桥降解,而降解N-甲氧基-N-甲基取代脲类除草剂是通过脲桥的直接断裂。真菌降解取代脲类除草剂的途径则较为复杂,尚需进一步阐明。本文综述了近年来分离筛选的取代脲类除草剂降解菌株及其降解途径的最新研究进展,为取代脲类除草剂污染环境的生物修复研究提供参考。

关键词：取代脲类除草剂降解微生物降解途径生物修复

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取代脲类除草剂降解菌鞘氨醇杆菌(Sphingobium sp.)Pu21的分离和鉴定与降解特性

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南京农业大学学报 2017年第4期40卷 655-663页

作者：谷涛李永丰周潮洋张迹闫新李顺鹏江苏省农业科学院植物保护研究所江苏南京210014 南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 淮阴师范学院江苏省环洪泽湖生态农业生物技术重点实验室江苏淮安223300

[目的]分离取代脲类除草剂的高效降解菌,为农药污染土壤的生物修复提供理论依据和物质基础。[方法]从农药厂废水处理池的活性污泥中分离筛选到1株取代脲类除草剂的高效降解菌株,结合形态、生理生化特征和16S rRNA基因序列对其进行鉴定,... 详细信息

[目的]分离取代脲类除草剂的高效降解菌,为农药污染土壤的生物修复提供理论依据和物质基础。[方法]从农药厂废水处理池的活性污泥中分离筛选到1株取代脲类除草剂的高效降解菌株,结合形态、生理生化特征和16S rRNA基因序列对其进行鉴定,并研究其降解特性和降解途径。[结果]经鉴定,菌株Pu21为鞘氨醇杆菌(Sphingobium sp.),该菌能同时降解N,N-二甲基取代脲类除草剂异丙隆和N-甲氧基-N-甲基取代脲类除草剂利谷隆。外界温度在25~35℃时对异丙隆和利谷隆降解影响较小,降解2种除草剂的最适温度均为35℃。在初始p H值为6.0~8.0时皆能快速降解异丙隆和利谷隆,最适p H值均为7.0。外加葡萄糖或麦芽糖时,对异丙隆的降解没有影响,但能提高利谷隆的降解,加入蛋白胨或酵母粉后2种除草剂的降解效率都显著提高。降解谱试验表明,菌株Pu21还可以降解敌草隆、伏草隆、绿麦隆、甲氧隆、灭草隆、非草隆和绿谷隆。依据HPLC和MS/MS结果,推测Pu21降解异丙隆途径为:异丙隆脲基侧链N-上脱甲基生成1-(4-异丙基苯基)-3-甲基脲(MDIPU),接着脱甲基生成1-对异丙基苯基脲(DDIPU),断开脲桥形成对异丙基苯胺(4IA)。利谷隆降解途径为:利谷隆脲桥直接断裂生成3.4-二氯苯胺(3,4-DCA)。[结论]菌株Pu21具有优良的降解能力,且降解底物谱广,在取代脲污染土壤的生物修复或生产废水生物强化处理中应用前景广阔。

关键词：取代脲类除草剂降解菌生物降解特性代谢途径

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除草剂的微生物降解研究进展

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生物资源 2018年第2期40卷 93-100页

作者：褚翠伟阮志勇姚利何健蒋建东朱启黎周口师范学院生命科学与农学学院河南周口466001 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所北京100081 盐城师范学院海洋与生物工程学院江苏盐城224002 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 江西省南康市教师进修学校江西赣州341400

微生物降解是环境中农药消解的重要因素,分离筛选纯培养的农药降解微生物并阐述其降解机制为微生物修复环境的应用提供重要的菌株资源和理论依据。本文简述了广泛使用的8类除草剂（包括有机磷类、磺酰脲类、氯乙酰胺类、均三嗪类、芳氧... 详细信息

微生物降解是环境中农药消解的重要因素,分离筛选纯培养的农药降解微生物并阐述其降解机制为微生物修复环境的应用提供重要的菌株资源和理论依据。本文简述了广泛使用的8类除草剂（包括有机磷类、磺酰脲类、氯乙酰胺类、均三嗪类、芳氧基苯氧基丙酸酯类、苯氧乙酸类、二硝基苯胺类和硫代氨基甲酸酯类除草剂）的降解微生物资源及其降解途径和降解基因的研究进展,并分析了目前除草剂污染修复存在的问题及未来的发展方向。

关键词：除草剂微生物降解降解机制

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可替宁(Cotinine)降解菌Nocardioides ***2195的分离鉴定与降解机制的初步研究

可替宁(Cotinine)降解菌Nocardioides ***2195的分离鉴定与降解机...

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第二十次全国环境微生物学学术研讨会

作者：邱吉国张艳婷赵玲玲蒋建东洪青何健南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

可替宁(Cotinine)是尼古丁(Nicotine)在人体内的主要代谢产物,对人体有潜在的致癌和致畸作用.摄入人体内的尼古丁约有70-80％被转化成***并不能完全被人体分解,约有10-15％的Cotinine随尿液排出体外.据统计全世界每年大约消费5.5万亿支... 详细信息

可替宁(Cotinine)是尼古丁(Nicotine)在人体内的主要代谢产物,对人体有潜在的致癌和致畸作用.摄入人体内的尼古丁约有70-80％被转化成***并不能完全被人体分解,约有10-15％的Cotinine随尿液排出体外.据统计全世界每年大约消费5.5万亿支香烟(约5万吨Nicotine),因此有大量的Cotinine被排入到环境之中并产生潜在的危害.微生物是降解环境污染物的主力军,具有高效、经济、环保等优势.迄今为止,尚未有纯培养微生物降解Cotinine的报道.

关键词：可替宁降解菌菌株鉴定代谢产物降解机理

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玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01突变体文库的构建

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江苏农业学报 2017年第2期33卷 -页

作者：朱子薇潘丽婷周义东王燕霞史建荣洪青徐剑宏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全风险评估实验室(南京)/江苏省转基因安全评价公共服务中心/江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心江苏南京210014

构建玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01突变体文库,以期获得丢失玉米赤霉烯酮降解功能的突变子,克隆玉米赤霉烯酮降解酶基因,阐明MQ01降解玉米赤霉烯酮的分子机制。将携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA电转化至玉米赤... 详细信息

构建玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01突变体文库,以期获得丢失玉米赤霉烯酮降解功能的突变子,克隆玉米赤霉烯酮降解酶基因,阐明MQ01降解玉米赤霉烯酮的分子机制。将携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA电转化至玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01中,50℃高温条件下,把穿梭载体pMarA上转座子TnYLB-1随机插入到菌株MQ01基因组中,获得转座子插入突变的阳性克隆,构建MQ01菌株的突变体文库,随机挑选突变子采用PCR和Southern杂交方法进行验证。本研究成功获得了3 000多个TnYLB-1转座子插入突变的阳性克隆,构建了*** MQ01的突变子文库,结果显示TnYLB-1转座子以单拷贝的形式随机插入到*** MQ01的基因组DNA中,从而可以从转座子突变文库中筛选丢失玉米赤霉烯酮降解功能的转座突变子,从菌株MQ01中克隆玉米赤霉烯酮降解酶基因。

关键词：玉米赤霉烯酮 BacillusamyloliquefaciensMQ01 转座子突变突变体文库

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一种检测2'-甲基-6'-乙基-2-氯乙酰苯胺水解酶活性的方法

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生态与农村环境学报 2016年第4期32卷 682-686页

作者：王飞李周坤董维亮崔中利江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室/江西农业大学生物科学与工程学院江西南昌330045 南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

建立了一种快速测定Delftia acidovorans T3-6菌株2'-甲基-6'-乙基-2-氯乙酰苯胺(CMEPA)水解酶活性的方法。在20 mmol·L^(-1)Tris-HCl(p H值为7.0)缓冲液中,10~50μmol·L^(-1)的CMEPA水解产物2-甲基-6-乙基苯胺(MEA)... 详细信息

建立了一种快速测定Delftia acidovorans T3-6菌株2'-甲基-6'-乙基-2-氯乙酰苯胺(CMEPA)水解酶活性的方法。在20 mmol·L^(-1)Tris-HCl(p H值为7.0)缓冲液中,10~50μmol·L^(-1)的CMEPA水解产物2-甲基-6-乙基苯胺(MEA)在铁氰化钾催化下与4-氨基安替比林反应生成紫红色物质,该物质在535 nm处的吸光度(y)与MEA浓度(x)呈正相关(y=0.014 6x-0.005 4,R2=0.998 8)。底物CMEPA、十二烷基硫酸钠(SDS)、甲醇等有机试剂以及1 mmol·L^(-1)金属离子对显色反应无显著影响,温度和p H值对显色反应影响显著。4-氨基安替比林显色法对菌株T3-6粗酶液酶活性的测定结果与二氯甲烷萃取-紫外分光光度法无显著差异。该方法也适用于其他苯胺苯酚类衍生物的测定。

关键词： 2-甲基-6-乙基苯胺(MEA) 4-氨基安替比林显色法分光光度法 Delftia acidovorans T3-6

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一株烟草秸秆降解菌的分离、鉴定及酶学性质研究

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土壤 2016年第5期48卷 939-945页

作者：邹芳赵娟雷燕萍祖朝龙曹慧南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 安徽省农业科学院烟草研究所合肥230031

从皖南地区烟稻轮作田土壤中经CMC-Na初筛获得5株纤维素降解菌,经DNS法测定纤维素酶活性复筛得到一株降解活性较高的降解菌YC-2。根据该菌16S r DNA序列比对结果,结合形态和生理生化特征,确定YC-2为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。... 详细信息

从皖南地区烟稻轮作田土壤中经CMC-Na初筛获得5株纤维素降解菌,经DNS法测定纤维素酶活性复筛得到一株降解活性较高的降解菌YC-2。根据该菌16S r DNA序列比对结果,结合形态和生理生化特征,确定YC-2为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对YC-2酶学性质进行相关研究,并分析YC-2对烟碱的耐受情况及对烟草秸秆的降解情况,结果表明：在7天内,YC-2对烟草秸秆降解率为10.14%;酶学特性表现为最适反应温度为60℃且在15-60℃之间具有稳定性;最适反应pH为7.0,在pH 4.0-7.5范围内稳定性较好;YC-2在浓度为1-2 g/L烟碱中能快速生长,而在高浓度的烟碱中生长受到抑制。因此,菌株YC-2产纤维素酶活性较高、相对耐热耐碱且对烟杆有一定分解作用,通过进一步诱变选育和发酵条件优化有较好的田间应用潜力。

关键词：枯草芽孢杆菌纤维素酶产酶特性

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植物乳杆菌G63电转化方法的优化

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食品科学 2016年第3期37卷 180-185页

作者：范璟席雪冬黄彦崔中利东南大学附属第二医院生物治疗中心江苏南京210003 沈阳农业大学植物保护学院辽宁沈阳110866 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物重点开放实验室江苏南京210095

为获得植物乳杆菌G63高效的电转化方法,本研究从细胞生长状态、细胞弱化剂质量浓度、洗涤液、质粒添加量和电击参数等方面对菌株G63的电转化效率进行优化。结果表明:取菌株G63对数生长中期的细胞制备感受态,以1 g/100 m L甘氨酸作为细... 详细信息

为获得植物乳杆菌G63高效的电转化方法,本研究从细胞生长状态、细胞弱化剂质量浓度、洗涤液、质粒添加量和电击参数等方面对菌株G63的电转化效率进行优化。结果表明:取菌株G63对数生长中期的细胞制备感受态,以1 g/100 m L甘氨酸作为细胞弱化剂,分别用1 mmol/L Mg Cl2和30 g/100 m L聚乙二醇1000洗涤细胞,并用30 g/100 m L聚乙二醇1000作为电击液,加入20μg穿梭质粒,在1.5 k V和400Ω条件下进行电击,可以获得最高的电转化效率,转化效率达到1.18×103 CFU/μg DNA,满足后续遗传学实验要求。

关键词：植物乳杆菌电转化转化效率

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