检索结果-内蒙古大学图书馆

土壤 2008年第4期40卷 658-661页

作者：戴俊郑会明杨梦华钟增涛朱军南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过PCR扩增出中慢生型天山根瘤菌中群体感应调控蛋白MrtR的基因片段,克隆至表达载体pALEX中,从而构建了原核表达质粒pALEX-mrtR。将pALEX-mrtR转化至大肠杆菌BL2/DE3菌株感受态细胞中,经IPTG诱导,表达出58kD的GST-MrtR融合蛋白。用纯... 详细信息

通过PCR扩增出中慢生型天山根瘤菌中群体感应调控蛋白MrtR的基因片段,克隆至表达载体pALEX中,从而构建了原核表达质粒pALEX-mrtR。将pALEX-mrtR转化至大肠杆菌BL2/DE3菌株感受态细胞中,经IPTG诱导,表达出58kD的GST-MrtR融合蛋白。用纯化好的GST-MrtR制备多克隆抗体,经Westernblot检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性。MrtR融合蛋白的成功表达及其多克隆抗体的制备为进一步研究MrtR蛋白的功能奠定了基础。

关键词：群体感应中慢生型天山根瘤菌 MrtR 融合表达多克隆抗体

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植物细菌天山根瘤菌调控基因mrtR在群体感应中的作用

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土壤学报 2008年第4期45卷 705-709页

作者：赖欣戴俊郑会明钟增涛朱军南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

在许多种类的细菌中均发现了luxR/luxI类型的群体感应调控系统,其中luxR是调节基因,对luxI合成自体诱导物(AI,autoinducer)起着正调控作用。通过建库筛选后,测序比对发现天山根瘤菌中存在mrtR/mrtI系统。通过基因敲除和转录水平基因表达... 详细信息

在许多种类的细菌中均发现了luxR/luxI类型的群体感应调控系统,其中luxR是调节基因,对luxI合成自体诱导物(AI,autoinducer)起着正调控作用。通过建库筛选后,测序比对发现天山根瘤菌中存在mrtR/mrtI系统。通过基因敲除和转录水平基因表达对mrtR进行研究,发现mrtR严格调控着mrtI的表达,同时mrtR的表达也受到AI影响,这表明mrtR表达的调控是一种自调控,同时根毛吸附实验显示该基因对根瘤菌与宿主间相互作用密切相关。

关键词：群体感应天山根瘤菌 mrtR 自调控

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土壤 2008年第3期40卷 465-468页

作者：周晶王鹏钟增涛朱军南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

用质粒pKGL 3上的转座子随机插入失活的方法得到两个中慢生型天山根瘤菌胞外多糖缺失菌株,并通过随机引物PCR的方法确定了转座子插入的基因位点,该基因与豌豆根瘤菌的UDP-葡萄糖脱氢酶基因有高度的同源性。根毛吸附实验发现该基因缺失,... 详细信息

用质粒pKGL 3上的转座子随机插入失活的方法得到两个中慢生型天山根瘤菌胞外多糖缺失菌株,并通过随机引物PCR的方法确定了转座子插入的基因位点,该基因与豌豆根瘤菌的UDP-葡萄糖脱氢酶基因有高度的同源性。根毛吸附实验发现该基因缺失,导致胞外多糖缺失突变菌株在其宿主植物甘草上的根毛吸附量大大降低,同时生物膜的形成实验发现中慢生型天山根瘤菌的exo5菌株不能像野生型菌株一样形成丰富的生物膜,也从侧面证明了根毛吸附实验的结果,初步推测胞外多糖可能通过影响中慢生型天山根瘤菌的根毛吸附过程来影响其与豆科植物的共生固氮。

关键词：根瘤菌胞外多糖根毛吸附

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高效烷烃降解菌xcz的分离鉴定及降解特性

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土壤 2008年第3期40卷 460-464页

作者：陆健黄潇伍贤明沈标李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从原油中分离筛选到一株高效烷烃降解菌xcz,经形态观察、生理生化试验、16S rDNA序列分析等鉴定为假单胞菌(Pseudomonas sp)。xcz能以正十八烷为唯一C源生长。在含500mg/l正十八烷为唯一C源的培养基中,培养40 h后正十八烷降解率达97.5%... 详细信息

从原油中分离筛选到一株高效烷烃降解菌xcz,经形态观察、生理生化试验、16S rDNA序列分析等鉴定为假单胞菌(Pseudomonas sp)。xcz能以正十八烷为唯一C源生长。在含500mg/l正十八烷为唯一C源的培养基中,培养40 h后正十八烷降解率达97.5%。xcz降解正十八烷的最适温度为37℃,最适pH值为7.0。xcz可以降解高浓度原油(2g/L)中C_(13)～C_(32)的正构烷烃,其中对C_(13)～C_(24)降解率大于80%。

关键词：假单胞菌分离鉴定烷烃生物降解

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高产水稻土细菌多样性的培养法与非培养法比较研究

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土壤 2008年第6期40卷 903-908页

作者：崔中利刘娟曹慧骆永明赵其国中国科学院南京土壤研究所南京210008 南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

利用细菌的通用引物扩增江西余江县高产水稻土红壤细菌总DNA和平板培养细菌混合总DNA的16S rDNA基因片段,在此基础上分别建立两种16S rDNA文库(文库a和文库b)。从两个文库中各随机挑选100个克隆,扩增出阳性克隆中的插入片段后选用HhaⅠ... 详细信息

利用细菌的通用引物扩增江西余江县高产水稻土红壤细菌总DNA和平板培养细菌混合总DNA的16S rDNA基因片段,在此基础上分别建立两种16S rDNA文库(文库a和文库b)。从两个文库中各随机挑选100个克隆,扩增出阳性克隆中的插入片段后选用HhaⅠ和RsaⅠ两种四碱基酶进行ARDRA(amplified rDNA restriction analysis)分析。统计比较分析发现,文库a的Shannon-Wienner指数、Simpson指数、丰富度、均一度分别为4.432、0.987、18.885和0.973,均高于文库b中相应的多样性参数(分别为2.271、0.758、5.736和0.501),即平板培养方法所展现的细菌群落结构多样性低于土壤中原始的多样性。结果表明,传统培养方法存在着很大的局限性,必须结合新的分子生物学技术手段才能更全面完善地认识土壤微生物群落结构多样性,以期充分利用其中丰富的微生物资源。

关键词：水稻土红壤平板培养细菌 16S rDNA克隆文库 ARDRA 多样性指数

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多功能农药降解基因工程菌剂保藏条件研究

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农业环境科学学报 2008年第4期27卷 1686-1691页

作者：蒋建东李荣陈凯倪斌李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

应用多功能农药降解基因工程菌修复农药污染潜力巨大,但由于微生物菌剂的保存一直是个难题,直接影响到微生物菌剂的应用。本实验室构建的基因工程菌属于鞘胺醇单胞菌属,易受到污染而消亡,液态菌剂保藏效果不理想,因此找到一种吸菌量大,... 详细信息

应用多功能农药降解基因工程菌修复农药污染潜力巨大,但由于微生物菌剂的保存一直是个难题,直接影响到微生物菌剂的应用。本实验室构建的基因工程菌属于鞘胺醇单胞菌属,易受到污染而消亡,液态菌剂保藏效果不理想,因此找到一种吸菌量大,并能增加细胞密度和保持菌种存活力的载体显得尤为迫切。通过单一载体吸菌量的测定、不同剂型保藏试验、不同接种量保藏试验、保护剂选择试验等方法研究了不同剂型对微生物菌剂活菌数量及保存期的影响。结果表明草炭是一种优良的固体载体——吸菌量大,可达1011CFU·g-1,并能促进工程菌的生长,109CFU·g-1接种量接种后120d仍能使工程菌数量维持在108CFU·g-1水平。通过盆钵试验表明长期保藏后的微生物菌剂能在25d内将甲基对硫磷和呋喃丹完全降解,应用效果不受保藏影响。本实验为工程菌剂的保存和应用提供了理论参考。

关键词：鞘胺醇单胞菌属载体保藏试验生物修复

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大肠杆菌单拷贝rRNA操纵元菌株的构建及其生长特性研究

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南京农业大学学报 2008年第3期31卷 60-64页

作者：杨瑾李晓丹曹慧管莉菠崔中利南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

以1株染色体上的5个rRNA操纵元(rrnA、rrnD、rrnE、rrnG和rrnH)被敲除的大肠杆菌(Escherichia coli)菌株SQ88为出发菌,运用λ Red同源重组系统和卡那霉素抗性基因筛选重组子,并利用抗性基因两端的FRT位点通过位点专一性重组将抗性基因去... 详细信息

以1株染色体上的5个rRNA操纵元(rrnA、rrnD、rrnE、rrnG和rrnH)被敲除的大肠杆菌(Escherichia coli)菌株SQ88为出发菌,运用λ Red同源重组系统和卡那霉素抗性基因筛选重组子,并利用抗性基因两端的FRT位点通过位点专一性重组将抗性基因去除,最终成功构建了1株仅具有单拷贝rRNA操纵元(rrnB)的***菌株--SQ88C.试验结果发现,此菌株并未出现明显的生长障碍,其生长速率和rRNA/蛋白值与出发菌株SQ88相比有所下降,但并不显著.从而证明了单拷贝rRNA 操纵元在一定条件下能够满足大肠杆菌正常生长的需要,也为在大肠杆菌及其他菌株中快速精确地构建多rRNA 基因缺失菌株提供了有益的参考,并可望在16S rRNA 基因突变研究等方面发挥一定的作用.

关键词：大肠杆菌 Red同源重组 rRNA 操纵元 16S rRNA基因

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萘降解菌N19-3的分离、鉴定和萘双加氧酶基因的检测

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环境科学研究 2008年第5期21卷 27-31页

作者：刘怡辰曹娟高国庆沈标南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

从石油污染土壤中分离到一株高效降解萘的N19-3菌株.经形态观察、生理生化实验和16S rDNA序列分析等鉴定其为丛毛单胞菌属（Comamonassp.）.该菌株能在30℃,30 h内将1 000 mg/L的萘完全降解.降解萘的适宜温度为20-30℃,适宜pH为7.0-9.0.... 详细信息

从石油污染土壤中分离到一株高效降解萘的N19-3菌株.经形态观察、生理生化实验和16S rDNA序列分析等鉴定其为丛毛单胞菌属（Comamonassp.）.该菌株能在30℃,30 h内将1 000 mg/L的萘完全降解.降解萘的适宜温度为20-30℃,适宜pH为7.0-9.0.0.1 mmol/L的Ca^2＋和Fe^3＋对N19^-3菌株降解萘有较强的促进作用,0.1 mmol/L的Mn^2＋和Zn^2＋对N19-3菌株的生长和萘的降解也有一定的促进作用,而0.1 mmol/L的Cu2＋则完全抑制了N19-3菌株的生长和萘的降解.通过PCR方法在N19-3菌株中扩增出分别与***菌株的萘双加氧酶铁硫蛋白大亚基基因（pahAc）与双加氧酶铁硫蛋白小亚基基因（pahAd）高度同源的核苷酸片断.

关键词：丛毛单胞菌属分离鉴定萘双加氧酶基因

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生淀粉糖化酶产生菌Cellulosimicrobium sp. SDE的分离鉴定及酶学性质研究

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工业微生物 2008年第5期38卷 45-49页

作者：李风玲张璐刘连成沈标南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

从淀粉制品厂周围土壤中分离到一株高产生淀粉糖化酶的菌株SDE，经形态、生理生化及16S rDNA序列分析将其鉴定为Cellulosimicrobium ***菌株的最适产酶条件为pH7．0，培养温度为30℃。培养42h粗酶液的酶活达175．3U／mL。该酶以生玉米... 详细信息

从淀粉制品厂周围土壤中分离到一株高产生淀粉糖化酶的菌株SDE，经形态、生理生化及16S rDNA序列分析将其鉴定为Cellulosimicrobium ***菌株的最适产酶条件为pH7．0，培养温度为30℃。培养42h粗酶液的酶活达175．3U／mL。该酶以生玉米淀粉为底物时，最适作用pH6．0，最适作用温度40℃，pH6、0～7．0范围内酶活力稳定。在Ca2’存在下，酶的热稳定性很高，80℃保温1h后，酶活力仍保持50％。Ba^2＋、Cu^2＋对酶活有强烈的抑制作用，Ca^2＋、Zn^2＋有很强的激活作用。

关键词： Cellulosimicrobium sp.SDE 生淀粉糖化酶酶学性质

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猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白介导的E蛋白假型鼠白血病病毒的构建

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病毒学报 2008年第5期24卷 345-351页

作者：夏平安党占国周斌陈溥言崔保安邱璜卢高峰河南农业大学牧医工程学院兽医微生物实验室河南郑州450002 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

利用RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5和ORF6基因,分别构建pcDNA-ORF5、pcD-NA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6真核表达载体,磷酸钙共沉淀法瞬时转染293T细胞,48h后收集细胞,流式细胞仪检测,结果表明:PRRSVORF5基因编码囊膜蛋... 详细信息

利用RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5和ORF6基因,分别构建pcDNA-ORF5、pcD-NA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6真核表达载体,磷酸钙共沉淀法瞬时转染293T细胞,48h后收集细胞,流式细胞仪检测,结果表明:PRRSVORF5基因编码囊膜蛋白(E蛋白)能在在293T细胞表面表达,而由共表达M蛋白(ORF6基因编码的基质蛋白)介导的E蛋白的表达量比单独E蛋白表达量高,串联表达与单独E蛋白相比较低。将pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6分别与MuLV假病毒构建体系的两种骨架载体pHIT60(包括MuLV的结构蛋白基因,即gag和pol)和pHIT111(为MuLV的基因组,还包括一个报告基因LacZ)瞬时共转染293T细胞,48h后收集假病毒上清,超速离心后通过Westernblot证实E蛋白能够在此假病毒颗粒表面表达,证明E蛋白已整合到此假病毒粒子表面。将整合PRRSVE蛋白的假病毒粒子分别感染Marc-145和PAM宿主靶细胞,均能检测到LacZ基因的表达,结果表明:所构建的假病毒粒子具有感染性,且由M蛋白介导的MuLV-E/M感染性比MuLV-E假病毒感染性高。

关键词：假病毒鼠白血病病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5/6基因

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