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中国菌物学会第四届全国药用真菌学术研讨会

作者：任昂欧阳翔师亮姜爱良穆大帅李梦娇韩琴赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京 210095

灵芝三萜类化合物是灵芝的重要药用成分,具有多种重要的生理功能,灵芝中三萜含量的高低已成为衡量灵芝质量高低的重要指标.灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因(Ahydroxymethylglutaryl-CoA synthase,GIHMGS)作为甲羟戊酸途径中的第一个催化... 详细信息

灵芝三萜类化合物是灵芝的重要药用成分,具有多种重要的生理功能,灵芝中三萜含量的高低已成为衡量灵芝质量高低的重要指标.灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因(Ahydroxymethylglutaryl-CoA synthase,GIHMGS)作为甲羟戊酸途径中的第一个催化酶,催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA,对于灵芝三萜的合成起着十分重要的作用.分别以灵芝总基因组DNA和反转录的原基cDNA为模板,扩增得到G1HMGS基因的全长DNA和cDNA序列,该基因DNA全长1870 bp,其中ORF为1 413 bp,编码471个氨基酸,推测的分子量为51.14kD.通过比对获得的DNA和cDNA序列,发现GIHMGS由5个外显子和4个内含子构成.与NCBI数据库中HMGS的蛋白序列比对发现,GIHMGS与解脂耶罗威亚酵母的HMGS表现出最高的同源性(51％).进化树分析也表明GIHMGS与真菌亲缘关系最近,这与灵芝的物种分类相吻合.通过酿酒酵母HMGS缺陷的菌株证实所得G1HMGS能够使HMGS缺陷的表型得到互补,证实GIHMGS的功能.利用SEFA-PCR技术扩增GIHMGS基因上游启动子序列,该序列长约1561 bp,用Softberry等软件对启动子序列进行分析,发现G1HMGS基因启动子中包含有明显的TATA-box和CAAT-box,并发现了多个与甾醇、激素和环境压力等调节相关的顺式作用元件.进一步研究发现,茉莉酸甲酯、脱落酸和水杨酸能够提高GIHMGS基因的转录水平.在研究不同发育阶段和不同碳源对G1HMGS基因的影响时,发现GIHMGS基因的表达水平分别在第16天和以麦芽糖为碳源时达到最大.通过过量表达GIHMGS基因能够显著提高灵芝三萜含量.

关键词：灵芝三萜 HMG-CoA合酶功能验证表达谱过量表达

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卤代芳烃类农药的微生物脱卤机制

卤代芳烃类农药的微生物脱卤机制

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2013年中国微生物学会学术年会

作者：蒋建东南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室 210095南京

卤代芳烃类农药中由于卤素这种强吸电子基团的取代,不仅增加了难降解性,而且提高了形成有毒中间产物的风险,因此,脱卤是这类化合物脱毒和降解的关键.

关键词：

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卤代芳烃类农药的微生物脱卤机制

卤代芳烃类农药的微生物脱卤机制

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第十六次全国环境微生物学学术研讨会

作者：蒋建东南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室 210095南京

卤代芳烃农药包含除草剂、杀菌剂和杀虫剂，在农药中占有重要比例，由于广泛使用导致严重的环境污染问题。卤代芳烃类农药的脱卤是这类化合物脱毒和降解的关键。微生物编码的脱卤酶在卤代芳烃类化合物的脱毒、降解方面起着关键作用。本... 详细信息

卤代芳烃农药包含除草剂、杀菌剂和杀虫剂，在农药中占有重要比例，由于广泛使用导致严重的环境污染问题。卤代芳烃类农药的脱卤是这类化合物脱毒和降解的关键。微生物编码的脱卤酶在卤代芳烃类化合物的脱毒、降解方面起着关键作用。本文总结了脱氯酶基因的水平转移的生态学意义在于促进脱氯微生物多样性分化和微生物群落快速适应污染环境。脱氯酶基因的水平转移能够使得整个微生物群落具有更大的脱氯潜力，这也为生物修复污染环境提供了一个新的策略。

关键词：卤代芳烃类农药微生物脱卤机制脱氯酶基因生物修复

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降解菌DDS-1产3-AC-DON氧化酶的酶学特性

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中国农业科学 2013年第11期46卷 2240-2248页

作者：徐剑宏潘艳梅胡晓丹祭芳殷宪超史建荣江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室/江苏省转基因安全评价公共服务中心南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)降解菌Devosia ***-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性,掌握DDS-1降解3-AC-DON到3-酮基-DON特性,为该酶的开发应用奠定理论基础。【方法】LG培养基培养DON毒素降解菌Devosia ***-1后,... 详细信息

【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)降解菌Devosia ***-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性,掌握DDS-1降解3-AC-DON到3-酮基-DON特性,为该酶的开发应用奠定理论基础。【方法】LG培养基培养DON毒素降解菌Devosia ***-1后,用PBS离心洗涤菌体后采用超声波破碎,用硫酸铵沉淀菌体破碎液获得粗酶液;然后在不同的酶反应体系中检测3-AC-DON氧化酶的酶活性。【结果】降解菌DDS-1产生3-AC-DON氧化酶的最适条件为:pH 7.0、25℃、培养36 h;该酶酶反应的最适温度为35℃,最适反应pH为7.0;该酶在20—40℃,pH 5.0—9.0的范围内能保持80%以上的酶活性;大多数金属离子在浓度为0.2—2 mmol.L-1对3-AC-DON氧化酶有促进作用;乙二胺四乙酸(EDTA)对该酶活性有抑制作用;酶的定域试验结果显示该酶为胞内酶;DDS-1产生的粗酶液能很好地降解小麦中的DON、3-AC-DON毒素。【结论】Devosia ***-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性研究表明,DDS-1产生的3-AC-DON氧化酶具有较好的温度和酸碱稳定性,该酶反应需要金属离子作为辅因子。

关键词： 3-AC-DON 降解徳沃斯氏菌酶活性

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花生连作红壤芽孢杆菌的群落多样性及其生防效果研究

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土壤 2012年第5期44卷 776-781页

作者：李婧陈广波张坤崔中利曹慧南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

芽孢杆菌是土壤中常见的微生物类群，在土壤生态系统中占据重要地位。本研究发现低丘红壤区花生连作红壤中芽孢杆菌的数量为2．0×10^5～2．3×10^5cfu／g干土。通过构建3个样品的基因文库，共得到9个种类；16SrDNA测序结果表... 详细信息

芽孢杆菌是土壤中常见的微生物类群，在土壤生态系统中占据重要地位。本研究发现低丘红壤区花生连作红壤中芽孢杆菌的数量为2．0×10^5～2．3×10^5cfu／g干土。通过构建3个样品的基因文库，共得到9个种类；16SrDNA测序结果表明该地区芽孢杆菌的优势类型有短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、高地芽孢杆菌，分别占总克隆的54％、12％和14％。并研究了施用不同微生物制剂对连作花生产量和生育性状的影响，结果显示，施用光合细菌和枯草芽孢杆菌能够在一定程度上提高花生的产量，枯草芽孢杆菌和光合细菌混合施用的增产效果最好，比对照提高了32．14％。

关键词：花生连作:微生物多样性芽孢杆菌 RFLP分析枯草芽孢杆菌

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分离自我国蜜蜂的一株新的致病螺原体及其基本特性

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微生物学通报 2012年第2期39卷 273-281页

作者：李霞张杰马云龙于汉寿南京农业大学农业部环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

【目的】通过分析分离自我国患病蜜蜂体内的螺原体MF1006的基本生物学特征,初步确定其分类地位及致病性。【方法】应用暗视野显微镜和透射电子显微镜观察螺原体形态,运用常规螺原体分离和培养方法、分子生物学方法和血清学方法研究螺原... 详细信息

【目的】通过分析分离自我国患病蜜蜂体内的螺原体MF1006的基本生物学特征,初步确定其分类地位及致病性。【方法】应用暗视野显微镜和透射电子显微镜观察螺原体形态,运用常规螺原体分离和培养方法、分子生物学方法和血清学方法研究螺原体分离菌株可能的分类地位,并采用饲喂接种法研究其致病性。【结果】菌株MF1006具有典型的螺旋形和运动性,能通过0.22μm孔径的滤膜,与我国之前发现的引起蜜蜂螺原体病的参比菌株Spiroplasma melliferum CH-1的基本生物学特征差异较大。*** CH-1抗血清对其没有抑制作用。根据16S rDNA、ITS序列构建系统发育树显示,菌株MF1006与在法国发现的引起蜜蜂"五月病"的Spiroplasma apis的亲缘关系最近。此外,菌株MF1006对供试意蜂有较强的致病性。【结论】分离菌株MF1006是在我国蜜蜂体内发现的除***以外的另一种致病螺原体。

关键词：螺原体蜜蜂生物学特性致病性

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南京及周边地区螺原体菌株的系统发育及遗传多样性分析

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南京农业大学学报 2012年第2期35卷 45-50页

作者：李霞于汉寿回丽静刘淑园阮康勤陈永萱南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

利用系统发育分析和RAPD技术对我国南京及周边地区的20株昆虫和植物花螺原体的分类地位和遗传多样性进行分析。结果表明:大多数菌株与Spiroplasma melliferum聚类,位于以16S rDNA序列构建的螺原体系统发育树的Citri-Chry-sopicola-Miru... 详细信息

利用系统发育分析和RAPD技术对我国南京及周边地区的20株昆虫和植物花螺原体的分类地位和遗传多样性进行分析。结果表明:大多数菌株与Spiroplasma melliferum聚类,位于以16S rDNA序列构建的螺原体系统发育树的Citri-Chry-sopicola-Mirum类群;菌株ZHUF0901和MF0905位于Apis群内,但二者又分为2个不同的分支。利用筛选的34条RAPD引物共检测出664个位点,其中多态性位点数644个,多态性比率为96.99%。UPGMA聚类分析表明,在相似性系数达到0.6时,与Spiroplasma melliferum聚类的18株菌可根据螺原体宿主的不同分为明显的3个类群,菌株ZHUF0901与MF0905各为一类。同一时期不同宿主(植物花、蜜蜂以及其他昆虫)中的蜜蜂螺原体Spiroplasma melliferum亲缘关系很近,说明自然界中螺原体可通过水平传播方式进行传播。

关键词：螺原体系统发育分析遗传多样性 RAPD

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Pseudomonas sp.L19抗除草剂AHAS基因的克隆、表达及特性

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应用与环境生物学报 2012年第1期18卷 49-54页

作者：郎志飞俞欣妍黄星张隽何健南京农业大学植物保护学院南京210095 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物重点开放实验室南京210095

乙酰羟酸合酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类和嘧啶水杨酸类等乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗此类除草剂的AHAS突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值.从长期使用甲磺隆的农田土壤中分离到1... 详细信息

乙酰羟酸合酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类和嘧啶水杨酸类等乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗此类除草剂的AHAS突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值.从长期使用甲磺隆的农田土壤中分离到1株对乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂有广谱抗性的菌株L19,根据表型特征、生理生化特性和16S rDNA序列系统发育分析,将其鉴定为假单孢菌属(Pseudomonas sp.).利用PCR技术从Pseudomonas sp.L19的总DNA中克隆AHAS基因,氨基酸序列比对结果表明,L19与对除草剂敏感菌株*** KT2440的AHAS调节亚基氨基酸序列完全相同,而催化亚基有4个氨基酸位点不同:[Val 29→Ala(L19→KT2440),Pro93→Ser,Val 345→Ala,Pro 484→Arg].分别将菌株L19与KT2440的AHAS催化亚基克隆到pET29a(+)的多克隆位点,构建了表达载体pET-L19AHASc和pET-KT2440AHASc,通过镍柱亲和层析纯化得到带有组氨酸标签的乙酰羟酸合酶.抗性试验结果表明菌株L19的乙酰羟酸合酶对四大类乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂的抗性均要强于KT2440的乙酰羟酸合酶,对甲磺隆、咪唑乙烟酸、唑嘧磺草胺和嘧草醚的抗性倍数分别达到53.6、9.3、8.2和9.5倍.菌株L19的乙酰羟酸合酶比活力、对ThDP和Mg2+的Kc值相应地比KT2440乙酰羟酸合酶的要低;而对底物丙酮酸钠的米氏常数Km值要比KT2440乙酰羟酸合酶的要高近1倍.

关键词：乙酰羟酸合酶抑制剂除草剂抗性乙酰羟酸合酶 Pseudomonas 酶学特性

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缩二脲降解菌在作物根际的GFP标记示踪

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土壤学报 2012年第6期49卷 1194-1201页

作者：平泉瑞陆艳娜黄为一南京农业大学生命科学学院微生物学系南京农业大学农业部环境微生物重点开放实验室南京210095

通过三亲结合对缩二脲降解菌GW-1菌株成功进行了绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因标记,标记菌株命名为GW-1-GFP。实验证明外源质粒对宿主菌的生长未带来不利的影响,且经高效液相色谱测定该标记菌株降解缩二脲的能力与... 详细信息

通过三亲结合对缩二脲降解菌GW-1菌株成功进行了绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因标记,标记菌株命名为GW-1-GFP。实验证明外源质粒对宿主菌的生长未带来不利的影响,且经高效液相色谱测定该标记菌株降解缩二脲的能力与出发菌株无显著差异(p<0.05)。经抗生素抗性和荧光追踪证明标记菌株GW-1-GFP能够很好地在土壤中定殖,第25天时在不同处理的土壤中标记菌株对缩二脲的降解能力都超过50%,45 d后该标记菌株在土壤中已难以检测。经标记菌株GW-1-GFP菌悬液浸润的小麦种子发芽后,通过荧光观察显示降解缩二脲的标记菌株GW-1-GFP在小麦根部定殖良好,且该标记菌株能在一定程度上缓解缩二脲对小麦的毒害作用。该研究为验证、追踪土壤中功能微生物菌剂与作物根部的亲和性和生态有效性提供了简易、直观的检测方法。

关键词：缩二脲降解 gfp标记微生物菌剂定殖示踪土壤小麦根际

来源：评论

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转基因抗虫棉对棉田土壤细菌数量及群落结构的影响

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农业环境科学学报 2012年第4期31卷 736-742页

作者：陈俊辉王扬扬郑婕李荣闫新李顺鹏蒋建东南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物重点开放实验室南京210095

以转基因抗虫棉(GK12、33B)及其亲本对照(SM、5415)为材料,利用稀释平板法和基于rRNA基因PCR扩增的变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术研究了棉田土壤中细菌数量和群落结构在转基因棉种植第一年的动态变化。结果表明:棉田土壤细菌数量随棉花生... 详细信息

以转基因抗虫棉(GK12、33B)及其亲本对照(SM、5415)为材料,利用稀释平板法和基于rRNA基因PCR扩增的变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术研究了棉田土壤中细菌数量和群落结构在转基因棉种植第一年的动态变化。结果表明:棉田土壤细菌数量随棉花生育期逐渐增加,于花铃中期达到最大值,转基因棉与其亲本之间细菌数量差异不显著。放线菌数量随生育期变化较小,转基因棉与其亲本之间在花铃中期出现显著差异。DGGE结果显示,转基因棉和亲本都存在丰富且相似的条带,聚类分析表明大多数转基因棉和亲本间条带相似性达80%以上,根据不同的生理期分成2个簇;主成分分析表明转基因棉和亲本细菌群落结构没有显著差异,但在不同生育期存在一定差异,表明生育期是影响细菌群落结构的主要因素,与聚类分析结果相吻合。研究结果初步说明转基因棉对棉田土壤细菌数量和群落结构没有显著影响。

关键词：转基因抗虫棉细菌群落变性梯度凝胶电泳(DGGE) 主成分分析

来源：评论

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