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第七届重金属污染防治技术及风险评价研讨会

作者：杨丽贺卓燕传明盛下放何琳燕农业部农业环境微生物重点实验室南京农业大学生命科学学院

为进一步探明植物促生细菌与钝化剂联合阻控蔬菜吸收重金属的作用及其机制,本研究比较了2株植物促生芽孢细菌和生物炭复配处理阻控辣椒吸收重金属的作用,并初步考察处理组对土壤环境质量的影响。结果表明,单独添加生物炭、接种Bacillusp... 详细信息

为进一步探明植物促生细菌与钝化剂联合阻控蔬菜吸收重金属的作用及其机制,本研究比较了2株植物促生芽孢细菌和生物炭复配处理阻控辣椒吸收重金属的作用,并初步考察处理组对土壤环境质量的影响。结果表明,单独添加生物炭、接种BacillusparalicheniformisL11或***44、生物炭与L4或L11复配处理均能降低辣椒果实中Pb、Cd含量。其中***44及其与生物炭复配使辣椒果实中Pb、Cd含量分别显著降低68.9%～72.2%、79.0%～88.3%,低于国家食品安全标准中蔬菜果实Pb、Cd限量,同时增加了辣椒果实中可溶性蛋白和Vc的含量。接菌处理可以增加辣椒根际土壤产芽孢细菌数量,提高水溶性有机质含量,pH值上升,促进土壤蔗糖酶和过氧化氢酶活性增加,有利于降低辣椒果实中Pb、Cd含量。

关键词：芽孢杆菌生物炭辣椒重金属土壤酶活性

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可替宁(Cotinine)降解菌Nocardioides ***2195的分离鉴定与降解机制的初步研究

可替宁(Cotinine)降解菌Nocardioides ***2195的分离鉴定与降解机...

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第二十次全国环境微生物学学术研讨会

作者：邱吉国张艳婷赵玲玲蒋建东洪青何健南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

可替宁(Cotinine)是尼古丁(Nicotine)在人体内的主要代谢产物,对人体有潜在的致癌和致畸作用.摄入人体内的尼古丁约有70-80％被转化成***并不能完全被人体分解,约有10-15％的Cotinine随尿液排出体外.据统计全世界每年大约消费5.5万亿支... 详细信息

可替宁(Cotinine)是尼古丁(Nicotine)在人体内的主要代谢产物,对人体有潜在的致癌和致畸作用.摄入人体内的尼古丁约有70-80％被转化成***并不能完全被人体分解,约有10-15％的Cotinine随尿液排出体外.据统计全世界每年大约消费5.5万亿支香烟(约5万吨Nicotine),因此有大量的Cotinine被排入到环境之中并产生潜在的危害.微生物是降解环境污染物的主力军,具有高效、经济、环保等优势.迄今为止,尚未有纯培养微生物降解Cotinine的报道.

关键词：可替宁降解菌菌株鉴定代谢产物降解机理

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玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01突变体文库的构建

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江苏农业学报 2017年第2期33卷 -页

作者：朱子薇潘丽婷周义东王燕霞史建荣洪青徐剑宏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全风险评估实验室(南京)/江苏省转基因安全评价公共服务中心/江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心江苏南京210014

构建玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01突变体文库,以期获得丢失玉米赤霉烯酮降解功能的突变子,克隆玉米赤霉烯酮降解酶基因,阐明MQ01降解玉米赤霉烯酮的分子机制。将携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA电转化至玉米赤... 详细信息

构建玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01突变体文库,以期获得丢失玉米赤霉烯酮降解功能的突变子,克隆玉米赤霉烯酮降解酶基因,阐明MQ01降解玉米赤霉烯酮的分子机制。将携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA电转化至玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01中,50℃高温条件下,把穿梭载体pMarA上转座子TnYLB-1随机插入到菌株MQ01基因组中,获得转座子插入突变的阳性克隆,构建MQ01菌株的突变体文库,随机挑选突变子采用PCR和Southern杂交方法进行验证。本研究成功获得了3 000多个TnYLB-1转座子插入突变的阳性克隆,构建了*** MQ01的突变子文库,结果显示TnYLB-1转座子以单拷贝的形式随机插入到*** MQ01的基因组DNA中,从而可以从转座子突变文库中筛选丢失玉米赤霉烯酮降解功能的转座突变子,从菌株MQ01中克隆玉米赤霉烯酮降解酶基因。

关键词：玉米赤霉烯酮 BacillusamyloliquefaciensMQ01 转座子突变突变体文库

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转pdmAB拟南芥与Sphingobium sp.1017-1联合修复环境中取代脲类除草剂的研究

转pdmAB拟南芥与Sphingobium sp.1017-1联合修复环境中取代脲类除...

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第二十次全国环境微生物学学术研讨会

作者：黄俊伟谢香庭陶青何健闫新蒋建东南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物重点实验室南京210095 大北农生物技术中心北京100193

杂草可以迅速耗尽土壤中作物和其它目的植物所需要的有价值养分.目前有许多类型的除草剂用于控制杂草,取代脲类除草剂自上世纪中期被推入市场以来,在世界范围内被广泛施用,成为除草剂大家庭中一个重要成员.由于其具有相对较高的水溶性... 详细信息

杂草可以迅速耗尽土壤中作物和其它目的植物所需要的有价值养分.目前有许多类型的除草剂用于控制杂草,取代脲类除草剂自上世纪中期被推入市场以来,在世界范围内被广泛施用,成为除草剂大家庭中一个重要成员.由于其具有相对较高的水溶性和较低的土壤吸附能力,在各地不同区域的地下水、溪流、湖泊、海水中均检测到了取代脲类除草剂的存在.这些残留带来两个问题,一是严重污染环境,二是对下茬作物产生药害.此外,取代脲类除草剂对人体及动物具有致癌作用.因此,去除环境中残留的取代脲类除草剂显得非常必要.利用转基因植物与微生物联合修复土壤污染物具有低成本、环境友好型等特点，受到极大的关注。研究结果表明转pdmAB拟南芥与助Sphingobium sp.1017-1联合修复取代脲类除草剂污染土壤及水体可能成为一种有效且环境友好型的方法。

关键词：环境污染取代脲类除草剂微生物强化修复转基因植物

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蜜蜂螺原体几丁质脱乙酰酶基因的克隆、表达及酶学性质

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南京农业大学学报 2016年第3期39卷 417-424页

作者：危蓉萍杨东航卜莹莹纪燕玲于汉寿南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物重点实验室江苏南京210095

[目的]通过表达载体p ET-28a（＋）在大肠杆菌中克隆表达蜜蜂螺原体Spiroplasma melliferum CH-1中可能与致病相关的几丁质脱乙酰酶（chitin deacetylase,CDA）基因chid,并测定其部分酶学性质,为进一步研究该基因在蜜蜂螺原体致病过程... 详细信息

[目的]通过表达载体p ET-28a（＋）在大肠杆菌中克隆表达蜜蜂螺原体Spiroplasma melliferum CH-1中可能与致病相关的几丁质脱乙酰酶（chitin deacetylase,CDA）基因chid,并测定其部分酶学性质,为进一步研究该基因在蜜蜂螺原体致病过程中的作用奠定基础。[方法]利用Overlap Extension PCR（OE-PCR）定点突变技术,在引物设计时插入目的突变,通过3次PCR获得突变后的目的片段,测序验证后构建重组质粒p ETchid,挑取BLchid表达菌株。IPTG诱导表达目的蛋白,NTA-Ni2＋柱纯化,Western blotting验证,紫外分光光度法测定其酶活力和酶学性质。[结果]DNA测序结果表明：chid基因中待突变位点已由TGA突变为TGG,成功克隆到chid基因全长,并得到外源表达的完整目的蛋白。该基因编码区为672 bp,编码的氨基酸构成相对分子质量约28×103的蛋白,同源性比较发现其与*** KC3/BC3/IPMB4A菌株序列相似性为97%。测得外源表达的该酶活力最高可达10.14 U·m L-1,最适温度为50℃左右,最适p H值为7.0~7.5。[结论]首次克隆了螺原体几丁质脱乙酰酶基因chid,并得到具有活性的外源目的蛋白,为后续研究螺原体与宿主蜜蜂的相互作用及其致病机制提供了重要信息。

关键词：蜜蜂螺原体几丁质脱乙酰酶定点突变克隆表达酶学性质

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耕作方式和秸杆还田对纤维素降解细菌多样性的影响

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土壤学报 2016年第4期53卷 1027-1036页

作者：景音娟李传海朱安宁邹芳肖永良曹慧南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点实验室南京210095 封丘农业生态国家试验站土壤与农业可持续发展国家重点实验室(中国科学院南京土壤研究所) 南京210008

免耕和秸秆还田是培肥地力的重要措施,明确其对土壤纤维素降解细菌群落的影响对于土壤质量提升具有重要意义。选择中国科学院封丘农业生态国家试验站耕作秸秆还田(WtS)、免耕秸秆还田(WntS)、耕作秸秆不还田(Wt)和免耕秸秆不还田(Wnt)4... 详细信息

免耕和秸秆还田是培肥地力的重要措施,明确其对土壤纤维素降解细菌群落的影响对于土壤质量提升具有重要意义。选择中国科学院封丘农业生态国家试验站耕作秸秆还田(WtS)、免耕秸秆还田(WntS)、耕作秸秆不还田(Wt)和免耕秸秆不还田(Wnt)4种处理小区并采集土壤样品,用CMC-Na刚果红培养基对纤维素降解细菌计数,采用PCR-RFLP技术研究保护性耕作和秸秆还田对纤维素降解细菌群落的影响。结果表明,秸秆还田与免耕处理均不同程度提高了纤维素降解细菌数量。WtS、WntS、Wt和Wnt4个纤维素降解细菌基因文库中,OTUs数量分别为23、26、20和19个,秸秆还田加免耕处理多样性指数最高。本文获得的纤维素降解细菌共属于11个属,秸秆还田土壤中Streptomycetaceae、Flavobacterium、Sphingobium相对丰度明显多于秸秆不还田处理土壤;免耕处理土壤中Pseudomonas、Phyllobacterium、Paenibacillus、Promicromonosporaceae、Sphingobacterium相对丰度明显高于耕作处理土壤。典范对应分析显示四种处理纤维素降解细菌群落结构发生了较大变化,p H、全磷、有机碳和全钾与免耕处理呈显著正相关性,全氮、碱解氮、速效钾、速效磷和有机碳与秸秆还田处理呈显著正相关性。免耕和秸秆还田能提高土壤中纤维素降解细菌数量及多样性,改变纤维素降解细菌群落结构。

关键词：免耕秸秆还田纤维素降解细菌多样性 PCR-RFLP

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一种检测2'-甲基-6'-乙基-2-氯乙酰苯胺水解酶活性的方法

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生态与农村环境学报 2016年第4期32卷 682-686页

作者：王飞李周坤董维亮崔中利江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室/江西农业大学生物科学与工程学院江西南昌330045 南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

建立了一种快速测定Delftia acidovorans T3-6菌株2'-甲基-6'-乙基-2-氯乙酰苯胺(CMEPA)水解酶活性的方法。在20 mmol·L^(-1)Tris-HCl(p H值为7.0)缓冲液中,10~50μmol·L^(-1)的CMEPA水解产物2-甲基-6-乙基苯胺(MEA)... 详细信息

建立了一种快速测定Delftia acidovorans T3-6菌株2'-甲基-6'-乙基-2-氯乙酰苯胺(CMEPA)水解酶活性的方法。在20 mmol·L^(-1)Tris-HCl(p H值为7.0)缓冲液中,10~50μmol·L^(-1)的CMEPA水解产物2-甲基-6-乙基苯胺(MEA)在铁氰化钾催化下与4-氨基安替比林反应生成紫红色物质,该物质在535 nm处的吸光度(y)与MEA浓度(x)呈正相关(y=0.014 6x-0.005 4,R2=0.998 8)。底物CMEPA、十二烷基硫酸钠(SDS)、甲醇等有机试剂以及1 mmol·L^(-1)金属离子对显色反应无显著影响,温度和p H值对显色反应影响显著。4-氨基安替比林显色法对菌株T3-6粗酶液酶活性的测定结果与二氯甲烷萃取-紫外分光光度法无显著差异。该方法也适用于其他苯胺苯酚类衍生物的测定。

关键词： 2-甲基-6-乙基苯胺(MEA) 4-氨基安替比林显色法分光光度法 Delftia acidovorans T3-6

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一株烟草秸秆降解菌的分离、鉴定及酶学性质研究

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土壤 2016年第5期48卷 939-945页

作者：邹芳赵娟雷燕萍祖朝龙曹慧南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 安徽省农业科学院烟草研究所合肥230031

从皖南地区烟稻轮作田土壤中经CMC-Na初筛获得5株纤维素降解菌,经DNS法测定纤维素酶活性复筛得到一株降解活性较高的降解菌YC-2。根据该菌16S r DNA序列比对结果,结合形态和生理生化特征,确定YC-2为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。... 详细信息

从皖南地区烟稻轮作田土壤中经CMC-Na初筛获得5株纤维素降解菌,经DNS法测定纤维素酶活性复筛得到一株降解活性较高的降解菌YC-2。根据该菌16S r DNA序列比对结果,结合形态和生理生化特征,确定YC-2为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对YC-2酶学性质进行相关研究,并分析YC-2对烟碱的耐受情况及对烟草秸秆的降解情况,结果表明：在7天内,YC-2对烟草秸秆降解率为10.14%;酶学特性表现为最适反应温度为60℃且在15-60℃之间具有稳定性;最适反应pH为7.0,在pH 4.0-7.5范围内稳定性较好;YC-2在浓度为1-2 g/L烟碱中能快速生长,而在高浓度的烟碱中生长受到抑制。因此,菌株YC-2产纤维素酶活性较高、相对耐热耐碱且对烟杆有一定分解作用,通过进一步诱变选育和发酵条件优化有较好的田间应用潜力。

关键词：枯草芽孢杆菌纤维素酶产酶特性

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Delftia sp.T3-6酰胺水解酶DamH晶体制备及X-射线衍射分析

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江西农业大学学报 2016年第6期38卷 1154-1160页

作者：王飞张碧滢赵晓艳王秀玲吴晓玉崔中利江西农业大学生物科学与工程学院/江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室江西南昌330045 南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点实验室江苏南京210095

Dam H是菌株Delftia sp.T3-6产生的具有酯键水解活性的酰胺酶,对其原核表达、纯化、结晶条件及蛋白晶体X-射线衍射条件进行了研究。经过原核表达,采用Ni-NTA亲和层析法和透析法纯化蛋白,成功获得了适合晶体生长的蛋白Dam H。289 K下采... 详细信息

Dam H是菌株Delftia sp.T3-6产生的具有酯键水解活性的酰胺酶,对其原核表达、纯化、结晶条件及蛋白晶体X-射线衍射条件进行了研究。经过原核表达,采用Ni-NTA亲和层析法和透析法纯化蛋白,成功获得了适合晶体生长的蛋白Dam H。289 K下采用座滴气相扩散法进行晶体筛选和制备,在蛋白浓度为15 mg/m L及含有0.2 mol/L乙酸铵,pH 7.1,21%(W/V)聚乙二醇3350的缓冲液中获得了理想的蛋白晶体。在低温100 K下通过X-射线衍射仪(Rigaku Micro Max-007 HF)收集了晶体衍射数据。晶体衍射分辨率为3.4,空间群为三斜晶系P1,晶胞参数为a=14.1,b=23.9,c=85.7,α=112.6°,β=77.2°,γ=89.1°。结晶条件的优化和晶体制备为Delftia sp.T3-6 Dam H高分辨率晶体制备提供了参考,晶体衍射数据的收集为Dam H三维结构的解析奠定了前期基础,将有助于阐明Dam H的催化机制。

关键词：酰胺水解酶纯化结晶条件优化 X-射线衍射

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南京市春季不同功能区大气微生物群落结构及多样性分析

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中国农学通报 2016年第32期32卷 174-181页

作者：曲浩丽赵娟肖永良曹慧南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点实验室南京210095 农业部南京农业机械化研究所南京210014

研究旨在明确南京市不同功能区大气降尘中的微生物多样性分布规律,为控制某些空气传播的微生物病原菌提供理论依据。采用3种空气采样方法对比,通过PCR扩增、基因克隆、RFLP和序列分析对南京市3个不同功能区(NAU,NBG,XWG)的空气降尘进行... 详细信息

研究旨在明确南京市不同功能区大气降尘中的微生物多样性分布规律,为控制某些空气传播的微生物病原菌提供理论依据。采用3种空气采样方法对比,通过PCR扩增、基因克隆、RFLP和序列分析对南京市3个不同功能区(NAU,NBG,XWG)的空气降尘进行细菌16S r DNA及真菌18S r DNA分析。结果显示,芽孢杆菌属(Bacillus),假单孢菌属(Pseudomona)及微球菌属(Micrococcus)在南京春季空气细菌中占比较大;而青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)、链格菌属(Alternaria)及挫孔菌属(Sistotrema)是真菌优势菌属。同时,空气微生物中也存在粘质沙雷氏菌等条件致病菌。该试验确定了春季南京市不同功能区细菌真菌丰度及多样性分布规律,为江苏省乃至全国对空气质量的监测及对大气微生物的研究提供了可行性方法。

关键词：空气细菌空气真菌群落结构微生物多样性 PCR-RFLP

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