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土壤学报 2015年第2期52卷 406-414页

作者：陈坤李传海朱安宁彭文涛钱明媚曹慧南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点实验室南京210095 封丘农田生态系统国家试验站土壤与农业可持续发展国家重点实验室(中国科学院南京土壤研究所) 南京210008

研究了免耕秸秆覆盖（CntWntS）、耕作秸秆覆盖（CntWtS）、免耕秸秆不覆盖（CntWnt）和耕作秸秆不覆盖（CntWt）四种保护性耕作措施对黄淮海平原典型潮土中纤维素降解菌多样性的影响。采用PCRRFLP技术分别对纤维素降解菌cbh I基因进行... 详细信息

研究了免耕秸秆覆盖（CntWntS）、耕作秸秆覆盖（CntWtS）、免耕秸秆不覆盖（CntWnt）和耕作秸秆不覆盖（CntWt）四种保护性耕作措施对黄淮海平原典型潮土中纤维素降解菌多样性的影响。采用PCRRFLP技术分别对纤维素降解菌cbh I基因进行多样性分析。结果表明,CntWntS与CntWnt相比,纤维素降解菌的数量增加了148%,而CntWtS与CntWt相比,纤维素降解菌的数量也增加了130%。纤维素降解菌cbh I基因分型在四个处理小区比较丰富,共有44个OTUs,其中CntWntS、CntWtS、CntWnt、CntWt处理中分别有35、34、30、30个OTUs。多样性指数分析显示,Shannon-Wiener指数的数值范围为3.09~3.36。系统发育分析表明,文库中的纤维素降解菌分别属于Basidiomycota（担子菌门）和Ascomycota（子囊菌门）,同时发现土壤中存在大量的未培养纤维素降解菌。因此,免耕和秸秆覆盖等保护性耕作能够明显提高土壤中纤维素降解菌数量和cbh I基因多样性。

关键词：保护性耕作纤维素降解菌 cbh Ⅰ基因多样性 PCR-RFLP分析

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Isolation, transposon mutagenesis, and characterization of the novel picolinic acid-degrading strain Alcaligenes faecalis JQ135

Isolation, transposon mutagenesis, and characterization of t...

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第十九次全国环境微生物学学术研讨会

作者：邱吉国张俊杰杨猷建张艳婷蒋建东洪青闫新何健南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

Picolinic acid (PA) is a natural by-product from the microbial degradation of 2-aminophenol and *** intermediate 2-aminomuconic 6-semialdehyde was instable and 2-picolinic acid was abiotically formed simultaneously as a dead end *** this study,a bacterial strain JQ 135 capbale of degrading PA efficiently was isolated from Municipal wastewater.

关键词：

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具有自絮凝特性的乙酸降解菌的筛选及其降解特性

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南京农业大学学报 2015年第5期38卷 830-837页

作者：邹彩连赵国成蒋翊宸林栋青顾向阳南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 建湖县农业技术推广服务中心江苏盐城224700

[目的]探索利用耐盐絮凝细菌降解硫胶废水中的乙酸，解除乙酸对自养型硫细菌的抑制作用，提高硫胶废水中硫代硫酸盐的降解速率的可行性。[方法]从盐碱土中富集分离耐盐或嗜盐的乙酸降解菌，采用摇瓶培养试验筛选出具有絮凝功能的菌株，... 详细信息

[目的]探索利用耐盐絮凝细菌降解硫胶废水中的乙酸，解除乙酸对自养型硫细菌的抑制作用，提高硫胶废水中硫代硫酸盐的降解速率的可行性。[方法]从盐碱土中富集分离耐盐或嗜盐的乙酸降解菌，采用摇瓶培养试验筛选出具有絮凝功能的菌株，通过生理生化特性测定和16SrDNA序列的分析，将所得菌株鉴定至相应的属或种。通过摇瓶试验研究温度、pH、盐度和底物浓度等因素对分离菌株降解性能的影响，获得最佳的降解条件。在硫胶废水中接种絮凝细菌置于最适条件下培养，待乙酸完全降解后将培养液用滤纸过滤除去细菌絮体，然后在滤液中接人适量硫杆菌，并以含有乙酸的硫胶废水原水作对照，比较硫代硫酸盐的降解速率。[结果]从盐碱土中成功分离到1株具有絮凝功能的乙酸降解细菌SSl，以乙酸为碳源生长时絮凝指数达86．41％，根据生理生化特性和16SrDNA序列比对结果，菌株SS1被鉴定为Pseudomonas sp．。菌株SS1是1株中度嗜盐菌，最高可耐受NaCl的质量浓度为75g·L^-1，其降解乙酸的最适条件为30～35℃、pH8．5、NaCl5～30g·L^-1和乙酸1—4g·L^-1。接种SSl絮体质量浓度为1．6g·L^-1时，硫胶废水中的乙酸降解速率可达200mg·L^-1·h^-1，乙酸可在6h内完全降解，硫代硫酸盐完全氧化所需的时间可缩短至48h。[结论]***是1株中度嗜盐且具有良好絮凝功能的乙酸降解细菌，该菌株可解除乙酸对盐生硫杆菌的抑制作用，加快硫代硫酸盐的降解，因而在硫胶废水的生物处理中具有较好的应用潜力。

关键词：硫胶废水硫代硫酸盐盐生硫杆菌絮凝细菌

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苏辽粳稻区稻瘟病菌群体多样性比较

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植物病理学报 2015年第2期45卷 158-166页

作者：史明乐刘志恒陈毓苓田薆楠姚恋秋任春梅缪倩于汉寿程兆榜南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物重点实验室南京210095 江苏省农业科学院植物保护研究所南京210014 沈阳农业大学植物保护学院沈阳110866

采用四套鉴别品种对苏辽稻瘟菌进行鉴定,结果表明:257株菌被中国鉴别品种分为7群23个小种,其中苏辽菌株分别为5群12个小种、7群21个小种,江苏优势小种ZG1占其菌株数的52.92%;辽宁优势小种ZG1、ZC15占其菌株数的30.84%、19.63%。苏辽菌... 详细信息

采用四套鉴别品种对苏辽稻瘟菌进行鉴定,结果表明:257株菌被中国鉴别品种分为7群23个小种,其中苏辽菌株分别为5群12个小种、7群21个小种,江苏优势小种ZG1占其菌株数的52.92%;辽宁优势小种ZG1、ZC15占其菌株数的30.84%、19.63%。苏辽菌株分别含37、46个日本小种,江苏优势小种011、011.2、000占其菌株数的25.33%、14.67%、12.67%,辽宁优势小种011.2占其菌株数的28.97%;LTH近等基因系将苏、辽菌株划分为27、23个反应型。利用Pot2-rep-PCR技术进行遗传多样性分析,在75%相似水平上可将参试菌株划分为13个系谱,江苏12个系谱中优势系谱L11、L12、L4分别占其菌株数的22.67%、16.67%、17.33%,辽宁6个系谱中优势系谱L12占其菌株数的55.14%。苏辽相比,辽宁菌株毒力普遍强于江苏,两地稻瘟菌株的毒性多样性与遗传多样性的丰富度相反。综合分析显示,苏辽两地稻瘟菌是两个在致病型和遗传结构上相近而又异质性明显的不同群体。

关键词：稻瘟病菌江苏辽宁致病性遗传多样性

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Rhodococcus sp.T1菌株胞内精恶唑禾草灵酯酶酶学性质及分离纯化

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南京农业大学学报 2015年第1期38卷 78-84页

作者：董维亮侯颖王飞李周坤黄彦崔中利南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003 江西农业大学生物科学与工程学院江西南昌330045

[目的]Rhodococcus sp.T1是一株高效的精恶唑禾草灵（FE）降解菌株,T1菌株可以断裂FE的酯键将其转化为精恶唑禾草灵酸（FA）。对T1菌株胞内精恶唑禾草灵酯酶的酶学性质进行研究并对其进行分离纯化,以期为生物修复精恶唑禾草灵污染提供... 详细信息

[目的]Rhodococcus sp.T1是一株高效的精恶唑禾草灵（FE）降解菌株,T1菌株可以断裂FE的酯键将其转化为精恶唑禾草灵酸（FA）。对T1菌株胞内精恶唑禾草灵酯酶的酶学性质进行研究并对其进行分离纯化,以期为生物修复精恶唑禾草灵污染提供更多的理论依据。[方法]以酯酶的通用底物乙酸-1-萘酯作为定量测定胞内酯酶活力的底物,分析温度和p H值对酯酶活力和稳定性的影响,同时探讨金属离子对酯酶活力的影响;通过硫酸铵沉淀、疏水层析、DEAE离子交换层析和Superdex-200凝胶层析柱组合技术对精恶唑禾草灵酯酶进行分离纯化,计算了纯化过程中酯酶的比活力、纯化倍数和回收率。[结果]胞内酯酶最适反应p H值为8.0,在p H 4.0-10.0内处理24 h活性稳定;最适反应温度为42℃,在温度50℃以下处理30 min活性稳定;1.0 mmol·L^-1Ag^＋对酯酶活力有强烈的抑制作用。纯化后的酯酶比活力从0.058 U·mg^-1提高到21.5 U·mg^-1,纯化倍数为369.5倍,回收率为3%。纯化后的粗酶经SDS-PAGE电泳后至少有4条明显的蛋白条带,通过酶谱确定精恶唑禾草灵酯酶条带的相对分子质量为42.3×10^3。[结论]精恶唑禾草灵酯酶具有较好的酸碱稳定性和热稳定性,在精恶唑禾草灵污染土壤修复中可能具有较好的应用潜力。

关键词： Rhodococcus sp.T1 精恶唑禾草灵分离纯化酶学性质酯酶酶谱

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碳稳定同位素示踪免耕水稻土固定CO2自养微生物多样性

碳稳定同位素示踪免耕水稻土固定CO2自养微生物多样性

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第八次全国土壤生物与生物化学学术研讨会暨第三次全国土壤健康学术研讨会

作者：钱明媚肖永良彭文涛曹慧南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

自养微生物有极强的环境适应性,在二氧化碳固定方面有很大潜力,但免耕耕作对水稻土CO固定自养微生物数量和种类的影响仍不清楚。采用稳定性同位素核酸探针（DNA-SIP）技术,结合PCR-RFLP方法,研究了南方免耕水稻土中CO固定自养微生物的... 详细信息

自养微生物有极强的环境适应性,在二氧化碳固定方面有很大潜力,但免耕耕作对水稻土CO固定自养微生物数量和种类的影响仍不清楚。采用稳定性同位素核酸探针（DNA-SIP）技术,结合PCR-RFLP方法,研究了南方免耕水稻土中CO固定自养微生物的多样性。结果表明,铁渗潜育水耕人为土FG和普通铁渗水耕人为土TF经CO标记处理80 d后,密度梯度离心分离的15层DNA样品中的cbbLR基因第8层最高,分别为1.36×10～5拷贝·g干土和2.21×10～5拷贝·g干土。以分离的7、8层DNA为模板,构建了包括两种土壤CO标记和CO对照的cbbLR基因文库,8个基因文库中672个克隆经酶切后分为30个OTUs类型,分布在5个目、9个科和12个已知属。土壤FG以Bradyrhizobium和Rubrivivax为主要类群,占全部克隆数的60.40%和13.86%,土壤TF中的微生物种属分布比较均匀,Rhodopseudomonas、Rhodospirillum、Methylibium和Variovorax分别占全部克隆数的20.90%、11.94%、16.42%和10.45%。两种土壤CO标记的cbbLR基因文库OTU类型、多样性指数均高于CO对照文库,其群落结构也有明显的变化。因此,免耕水稻土存在高度多样性的二氧化碳固定自养微生物,在农田土壤碳素循环方面具有重要作用。

关键词：微生物多样性水稻土稳定同位素示踪

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碳稳定同位素示踪免耕水稻土固定CO2自养微生物多样性

碳稳定同位素示踪免耕水稻土固定CO2自养微生物多样性

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第八次全国土壤生物与生物化学学术研讨会、第三次全国土壤健康学术研讨会暨第二届国际有机农业发展与健康高峰论坛

作者：钱明媚肖永良彭文涛曹慧南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

自养微生物有极强的环境适应性,在二氧化碳固定方面有很大潜力,但免耕耕作对水稻土CO2固定自养微生物数量和种类的影响仍不清楚.采用稳定性同位素核酸探针(DNA-SIP)技术,结合PCR-RFLP方法,研究了南方免耕水稻土中CO2固定自养微生物的多...

自养微生物有极强的环境适应性,在二氧化碳固定方面有很大潜力,但免耕耕作对水稻土CO2固定自养微生物数量和种类的影响仍不清楚.采用稳定性同位素核酸探针(DNA-SIP)技术,结合PCR-RFLP方法,研究了南方免耕水稻土中CO2固定自养微生物的多样性.结果表明,铁渗潜育水耕人为土FG和普通铁渗水耕人为土TF经13CO2标记处理80 d后,密度梯度离心分离的15层DNA样品中的cbbLR基因第8层最高,分别为1.36× 105拷贝·g-1干土和2.21×105拷贝·g-1干土.以分离的7、8层DNA为模板,构建了包括两种土壤13CO2标记和12CO2对照的cbbLR基因文库,8个基因文库中672个克隆经酶切后分为30个OTUs类型,分布在5个目、9个科和12个已知属.土壤FG以Bradyrhizobium和Rubrivivax为主要类群,占全部克隆数的60.40％和13.86％,土壤TF中的微生物种属分布比较均匀,Rhodopseudomonas、Rhodospirillum、Methylibium和Variovorax分别占全部克隆数的20.90％、11.94％、16.42％和10.45％.两种土壤13CO2标记的cbbLR基因文库OTU类型、多样性指数均高于12CO2对照文库,其群落结构也有明显的变化.因此,免耕水稻土存在高度多样性的二氧化碳固定自养微生物,在农田土壤碳素循环方面具有重要作用.

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赤霉病菌拮抗菌Bacillus subtilis AF0907抗菌物质研究

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中国生物防治学报 2015年第3期31卷 378-385页

作者：胡晓丹王建伟李孝敬祭芳史建荣徐剑宏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室/江苏省转基因安全评价公共服务中心南京210014 江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心南京210014

菌株AF0907是从土壤中分离到的1株对小麦赤霉病菌具有显著拮抗作用的枯草芽孢杆菌,该菌株不仅对小麦赤霉病菌具有很好的拮抗活性,对其他多种植物病原菌都具有很好的拮抗效果。为了明确菌株AF0907对赤霉病菌的抑菌机理,本研究首先使用平... 详细信息

菌株AF0907是从土壤中分离到的1株对小麦赤霉病菌具有显著拮抗作用的枯草芽孢杆菌,该菌株不仅对小麦赤霉病菌具有很好的拮抗活性,对其他多种植物病原菌都具有很好的拮抗效果。为了明确菌株AF0907对赤霉病菌的抑菌机理,本研究首先使用平板对持法对拮抗物质进行定位,结果表明该菌分泌的拮抗物质主要位于细胞上清液中。采用不同饱和度的硫酸铵沉淀细胞上清液,确定了60%的硫酸铵饱和度是沉淀该拮抗物质的最佳条件;分别研究了温度、p H值、蛋白酶K、氯仿对该拮抗物质活性的影响,结果表明该拮抗物质在低温下比较稳定,在60℃以上的高温下,活性迅速降低;在酸性或碱性条件下不稳定;该拮抗物质分别加入蛋白酶K和氯仿作用后拮抗活性分别下降了60.68%、80.07%,因此,初步判断该拮抗物质为蛋白质。利用DEAE-52离子交换柱层析法分离纯化了该拮抗蛋白并进行了SDS-PAGE电泳,结果显示该拮抗蛋白的分子量为48 k Da;利用PPSQ-31A蛋白自动测序仪测定拮抗蛋白N-末端15个氨基酸序列为:His-Glu-Phe-Pro-Thr-Tyr-Lys-His-Met-Tyr-Gln-Val-Met-His-Leu。

关键词：小麦赤霉病菌枯草芽孢杆菌拮抗菌拮抗蛋白

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除草剂二甲戊灵微生物降解代谢及其分子机制

除草剂二甲戊灵微生物降解代谢及其分子机制

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第十八次全国环境微生物学学术研讨会

作者：倪海燕李娜王飞何健洪青李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

二硝基苯胺类除草剂二甲戊灵在农业中应用十分广泛，但在保证农业正常生产，保障人们生活需求的同时，也不可避免地带来严重的环境污染.因此，研究除草剂二甲戊灵的微生物降解代谢过程及其分子机制具有非常重要的理论意义和实际应用价值...

二硝基苯胺类除草剂二甲戊灵在农业中应用十分广泛，但在保证农业正常生产，保障人们生活需求的同时，也不可避免地带来严重的环境污染.因此，研究除草剂二甲戊灵的微生物降解代谢过程及其分子机制具有非常重要的理论意义和实际应用价值.以二甲戊灵为唯一碳源，连续传代富集筛选得到一株能够降解并利用二甲戊灵为碳源生长的菌株Y3.通过菌株生理生化实验和菌株16S rRNA系统发育进化分析将菌株Y3鉴定为Bacillus sp..

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定点突变对酰胺水解酶DamH可溶性表达和酶活的影响

定点突变对酰胺水解酶DamH可溶性表达和酶活的影响

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2015年中国微生物学会学术年会

作者：王飞李周坤周杰崔中利江西农业大学生物科学与工程学院江西南昌 330045 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点实验室江苏南京 210095 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点实验室江苏南京 210095

DamH是一种具有酯酶活性的酰胺水解酶,其非活性中心氨基酸残基的突变对重组酶可溶性表达和比酶活产生一定的影响.[目的]本文拟探索DamH的活性中心氨基酸残基构成,并对其非活性中心氨基酸残基突变对可溶性表达和比酶活的影响进行研究.[方...

DamH是一种具有酯酶活性的酰胺水解酶,其非活性中心氨基酸残基的突变对重组酶可溶性表达和比酶活产生一定的影响.[目的]本文拟探索DamH的活性中心氨基酸残基构成,并对其非活性中心氨基酸残基突变对可溶性表达和比酶活的影响进行研究.[方法]通过重叠延伸的方法对DamH可能的活性中心氨基酸S149,E244和H274以及非活性中心氨基酸D165及N192进行定点突变,通过静息细胞测活验证了S149,E244和H274在催化2-氯-N-(2'-甲基-6'-乙基苯基)乙酰胺(CMEPA)水解反应中的作用,通过Ni2+-NTA亲和层析对D165及N192突变子进行纯化,对突变株和野生型比酶活进行比较.

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