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第八届海峡两岸菌物学学术研讨会

作者：李娜王世明陈军李玉祥赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

鲨烯合酶是灵芝三萜生物合成的关键酶,灵芝鲨烯合酶基因的表达和活性的高低决定了灵芝中三萜含量的高低。根据已经获得的灵芝鲨烯合酶全长cDNA序列设计一对专一引物,通过PCR扩增得到了灵芝鲨烯合酶基因的基因组全长,序列长1984bp,含有3... 详细信息

鲨烯合酶是灵芝三萜生物合成的关键酶,灵芝鲨烯合酶基因的表达和活性的高低决定了灵芝中三萜含量的高低。根据已经获得的灵芝鲨烯合酶全长cDNA序列设计一对专一引物,通过PCR扩增得到了灵芝鲨烯合酶基因的基因组全长,序列长1984bp,含有3个内含子。根据其基因组序列设计引物,采用SEFA-PCR的方法,以总DNA为模板,克隆了灵芝鲨烯合酶基因的启动子序列,长1042bp。序列分析发现灵芝鲨烯合酶基因启动子中没有明显的TATA和CAAT框,但是含有CCAAT-binding factor、GATA-1、GC-box、TFIID等重要的转录因子的结合位点,以及在人和酿酒酵母鲨烯合酶基因启动子中发现的甾醇调节相关的顺式调控元件。

关键词：灵芝三萜生物合成转录调控

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辛硫磷降解菌XSP-1的分离、鉴定及其降解特性研究

辛硫磷降解菌XSP-1的分离、鉴定及其降解特性研究

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第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会

作者：沈雨佳洪源范洪青李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

从农药厂污泥中分离到1株能以辛硫磷为唯一碳源生长的细菌,命名为 XSP-1.根据其生理生化特征和16S rRNA 基因序列相似性分析,将该菌株初步鉴定为戴尔福特菌属(Delftia sp.).该菌株能在7h 内完全降解100mg/L 的辛硫磷.XSP-1降解辛硫磷的... 详细信息

从农药厂污泥中分离到1株能以辛硫磷为唯一碳源生长的细菌,命名为 XSP-1.根据其生理生化特征和16S rRNA 基因序列相似性分析,将该菌株初步鉴定为戴尔福特菌属(Delftia sp.).该菌株能在7h 内完全降解100mg/L 的辛硫磷.XSP-1降解辛硫磷的最适 pH 为7.0,最适温度为35℃,降解速率与初始接种量呈正相关,该菌株对甲基对硫磷、毒死蜱、杀螟硫磷也有较好的降解能力.根据已报道有机磷农药降解基因 mpd 的保守序列设计引物, 未从该菌株中扩增到目标条带,但是该菌株是否带有新的有机磷农药降解基因仍需要进一步研究.

关键词：辛硫磷生物降解戴尔福特菌属 XSP-1

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遗传稳定型六六六、甲基对硫磷降解基因工程菌的构建及特性研究

遗传稳定型六六六、甲基对硫磷降解基因工程菌的构建及特性研究

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第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会

作者：陆鹏洪源范洪青李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

通过转座子介导同源重组的方法,将甲基对硫磷水解酶基因 mpd 导入到六六六降解菌 BHC-A 的染色体上, 构建了能同时降解六六六和甲基对硫磷的基因工程菌 BHC-A-mpd.对其生长特性和降解特性的研究表明,工程菌在 LB 培养基中的生长特性与... 详细信息

通过转座子介导同源重组的方法,将甲基对硫磷水解酶基因 mpd 导入到六六六降解菌 BHC-A 的染色体上, 构建了能同时降解六六六和甲基对硫磷的基因工程菌 BHC-A-mpd.对其生长特性和降解特性的研究表明,工程菌在 LB 培养基中的生长特性与原始菌株没有差别,生长至对数期 A值都可达到2.5;对六六六的降解特性和原始菌株相同,可在10h 内将5mg/L 的六六六完全降解.mpd 基因在 BHc-A-mpd 中稳定表达,BHC-A-mpd 可以降解多种有机磷类农药.该基因工程菌的构建为六六六和甲基对硫磷复合污染环境的生物修复奠定了基础.

关键词：六六六甲基对硫磷生物降解基因工程菌

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高效降解氯嘧磺隆菌株LW-3的分离鉴定及降解特性研究

高效降解氯嘧磺隆菌株LW-3的分离鉴定及降解特性研究

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第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会

作者：王哲顾立锋孙纪全王保战李荣李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

从长期受氯嘧磺隆污染的土壤中分离到一株能同时高效降解氯嘧磺隆的菌株 LW-3,经过生理生化实验和 16S rDNA 序列同源性分析,将该菌株鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。菌株 LW-3能以氯嘧磺隆为唯一氮源生长;在30～35℃,pH6.5～7.2... 详细信息

从长期受氯嘧磺隆污染的土壤中分离到一株能同时高效降解氯嘧磺隆的菌株 LW-3,经过生理生化实验和 16S rDNA 序列同源性分析,将该菌株鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。菌株 LW-3能以氯嘧磺隆为唯一氮源生长;在30～35℃,pH6.5～7.2时降解性能良好,在相同温度下 pH 的变化对其降解效果有较大的影响。在 pH6.5,温度32℃时,50mg/L 氯嘧磺隆经过7天,降解率达70%—80%左右。

关键词：氯嘧磺隆鉴定生物降解 LW-3

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生淀粉糖化酶产生菌Cellulosimicrobium ***的分离鉴定及酶学性质研究

生淀粉糖化酶产生菌Cellulosimicrobium ***的分离鉴定及酶学性质...

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：李风玲张璐刘连成沈标南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

从淀粉制品厂周围土壤中分离到一株高产生淀粉糖化酶的菌株 SDE,经形态、生理生化及16S rDNA 序列分析将其鉴定为 Cellulosimicrobium sp.。SDE 菌株的最适产酶条件为 pH7.0,培养温度为30℃。培养42h 粗酶液的酶活达176.7U/mL。该酶以... 详细信息

从淀粉制品厂周围土壤中分离到一株高产生淀粉糖化酶的菌株 SDE,经形态、生理生化及16S rDNA 序列分析将其鉴定为 Cellulosimicrobium sp.。SDE 菌株的最适产酶条件为 pH7.0,培养温度为30℃。培养42h 粗酶液的酶活达176.7U/mL。该酶以生玉米淀粉为底物时,最适作用 pH6.0,最适作用温度40℃;pH6.0～7.0范围内酶活力稳定;在 Ca存在下,酶的热稳定性很高,80℃保温一个小时后,酶活力仍保持50%;Cu、Ba对酶活有强烈的抑制作用;Zn、Ca有很强的激活作用。

关键词： Cellulosimicrobium sp. 生淀粉糖化酶酶学性质

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转座子插入法构建甲基对硫磷趋化突变株及对原位降解能力的影响

转座子插入法构建甲基对硫磷趋化突变株及对原位降解能力的影响

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：蒋建东文阳郭新强陈凯李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

本文以甲基对硫磷(MP)降解菌 Pseudomonas putida DLL-1为研究材料,通过转座子随机插入突变的方式从12,000多个插入突变子中筛选得到2株在趋化平板上没有趋化圈的突变株 A3-27,a4-8,通过 SEFA-PCR 的方法克隆出被插入失活的基因片段,结... 详细信息

本文以甲基对硫磷(MP)降解菌 Pseudomonas putida DLL-1为研究材料,通过转座子随机插入突变的方式从12,000多个插入突变子中筛选得到2株在趋化平板上没有趋化圈的突变株 A3-27,a4-8,通过 SEFA-PCR 的方法克隆出被插入失活的基因片段,结果表明突变株 A3-27是编码3(β)-异丙基苹果酸脱氢酶的 leuB 基因被失活的亮氨酸营养缺陷型, 而突变子 a4-8为编码鞭毛丝状部结构蛋白基因 flic 被插入失活的趋化突变株。趋化突变株 a4-8对土壤中农药原位降解能力的研究表明,在含50mg/kg 的 MP 的灭菌与未灭菌土壤中, 趋化突变株在3d 时对 MP 的降解能力低于原始野生型菌株 DLL-1约40%,说明趋化性在农药的原位降解过程中发挥重要作用。

关键词：趋化性转座子 Mini-Tn5 fliC 基因原位降解

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两株抗除草剂克雷伯氏菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

两株抗除草剂克雷伯氏菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：沈晶晶黄星俞欣妍李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

乙酰羟酸合成酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类及嘧啶水杨酸类等乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的乙酰羟基酸合成酶突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值。本文... 详细信息

乙酰羟酸合成酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类及嘧啶水杨酸类等乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的乙酰羟基酸合成酶突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值。本文从长期使用磺酰脲类除草剂的农田土壤中分离到二株磺酰脲类除草剂抗性细菌 HR9和 HR11,根据表型特征、生理生化特性及16SrDNA 序列系统发育分析,将 HR9和 HR11初步鉴定为克雷伯氏菌 (Klebsiella sp.)。菌株 HR9和 HR11对甲磺隆的最高耐受浓度分别达到9600μmol/L 和8200 μmol/L,且对各种乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性。利用 PCR 技术从 HR9和 HR11 总 DNA 中克隆到 AHAS 大小亚基基因 ilvIH,比对结果表明菌株 HR11与菌株 HR9的 IlvI 有6个位点的氨基酸有差异,HR9、HR11与除草剂敏感型的 *** 的 IlvI 各有37和34个位点的氨基酸有差异。

关键词：乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂除草剂抗性细菌乙酰羟酸合酶 ilvH

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抗除草剂假单胞菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

抗除草剂假单胞菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

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第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会

作者：孙笑非黄星李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶 acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸 Val、Leu、Ile 生物合成过程中关键酶。本文从长期受甲磺隆污染的土壤中分离,纯化出1株甲磺隆的抗性菌 Lm10。经形态、生理生化特... 详细信息

乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶 acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸 Val、Leu、Ile 生物合成过程中关键酶。本文从长期受甲磺隆污染的土壤中分离,纯化出1株甲磺隆的抗性菌 Lm10。经形态、生理生化特性测定、16S rDNA 序列同源性比较和系统进化树的分析将甲磺隆抗性菌 Lm10鉴定为假单孢菌(***)。菌株 Lm10对甲磺隆的最高耐受浓度达到13.75nmol/L,且对各种乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性。利用 PCR 技术从 Lm10总 DNA 中克隆到 AHAS 大小亚基基因 ilvIH,氨基酸比对结果表明菌株 Lm10与标准菌株 kt2440的 IlvI 的5个位点有差异,而小亚基则与标准菌株 kt2440的 ilvH 完全相同。为阐明抗性产生机制和通过基因工程获得性能更优良的乙酰乳酸合酶基因提供了重要的理论基础和应用价值。

关键词： ALS inhibitors herbicides herbicides-resistant bacterium acetohydroxyacid synthase ilvIH

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Burkholderia ***-1降解硝基苯酚类化合物的特性研究

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环境科学 2006年第3期27卷 582-585页

作者：张忠辉洪青洪元范赵子如李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从长期受农药污染的土壤中分离到1株高效杀螟硫磷降解菌株***-1,它能以3-甲基-4-硝基苯酚(MNP)为唯一碳源和氮源进行生长.该菌能在9h内将0.6mmol.L-1MNP完全转化成邻甲基对苯二酚(MHQ),并能继续降解MHQ.该菌降解MNP的最适温度和pH分别... 详细信息

从长期受农药污染的土壤中分离到1株高效杀螟硫磷降解菌株***-1,它能以3-甲基-4-硝基苯酚(MNP)为唯一碳源和氮源进行生长.该菌能在9h内将0.6mmol.L-1MNP完全转化成邻甲基对苯二酚(MHQ),并能继续降解MHQ.该菌降解MNP的最适温度和pH分别为30℃和7.0,菌株降解MNP的速率和起始接种量呈正相关.降解MNP的酶为诱导酶.

关键词：生物降解硝基酚类化合物亚硝酸盐诱导酶

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甲氰菊酯降解菌JQL4-5的分离鉴定及降解特性研究

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环境科学 2006年第10期27卷 2100-2104页

作者：洪源范洪青武俊张忠辉李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从农药厂废水处理池的活性污泥中分离到1株能以甲氰菊酯为唯一碳源生长的细菌,命名为JQL4-5.根据其生理生化特征和16S rDNA(GenBank Accession ***177525)序列相似性分析,将该菌株鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.).该菌株在24h内... 详细信息

从农药厂废水处理池的活性污泥中分离到1株能以甲氰菊酯为唯一碳源生长的细菌,命名为JQL4-5.根据其生理生化特征和16S rDNA(GenBank Accession ***177525)序列相似性分析,将该菌株鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.).该菌株在24h内对20 mg/L的甲氰菊酯的降解率达到99.8%.降解甲氰菊酯的最适温度为30℃,pH为7.0,降解速率与初始接种量呈正相关.酶的定域试验表明,降解甲氰菊酯的酶为胞内酶.

关键词：甲氰菊酯生物降解鞘氨醇单胞菌JQL4—5 酶的定域

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