检索结果-内蒙古大学图书馆

环境科学 2008年第7期29卷 1973-1976页

作者：陆鹏洪源范洪青蒋新李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 中国科学院南京土壤研究所土壤与农业可持续发展国家重点实验室南京210008

通过转座子介导同源重组的方法,将甲基对硫磷水解酶基因mpd导入到六六六降解菌BHC-A的染色体上,构建了能同时降解六六六和甲基对硫磷的基因工程菌BHC-A-mpd.对其生长特性和降解特性的研究表明,工程菌在LB培养基中的生长特性与原始菌株... 详细信息

通过转座子介导同源重组的方法,将甲基对硫磷水解酶基因mpd导入到六六六降解菌BHC-A的染色体上,构建了能同时降解六六六和甲基对硫磷的基因工程菌BHC-A-mpd.对其生长特性和降解特性的研究表明,工程菌在LB培养基中的生长特性与原始菌株没有差别,生长至对数期A600 nm值都可达到2.5;对六六六的降解特性和原始菌株相同,可在10 h内将5 mg/L的六六六完全降解.mpd基因在BHC-A-mpd中稳定表达,BHC-A-mpd可以降解多种有机磷类农药.该基因工程菌的构建为六六六和甲基对硫磷复合污染环境的生物修复奠定了基础.

关键词：六六六甲基对硫磷生物降解基因工程菌

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Pseudomonas putida GM6多聚磷酸盐激酶(ppk)基因的克隆及表达

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土壤学报 2007年第4期44卷 727-733页

作者：管莉菠蔡天明李波何健李顺鹏崔中利南京农业大学生命科学学院微生物学系南京农业大学农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

以一株高效聚磷菌Pseudomonas putidaGM6为研究材料。为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphos-phate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约... 详细信息

以一株高效聚磷菌Pseudomonas putidaGM6为研究材料。为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphos-phate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约528 bp)。随后采用快速染色体步移方法(Self-formed adap-tor PCR,SEFA-PCR)技术扩增片段的上下游基因序列,将三个序列拼接,用OMIGA软件分析其ORFs,推测ppk基因全长为2 220 bp(GenBank accession number DQ133537)。构建的多聚磷酸盐激酶表达菌株***21(DE3)/pET29a-ppk经IPTG诱导后3 h时,明显出现分子量约为81 kDa的表达产物。且表达菌株在12 h时的磷去除率高达80%(对照菌株的磷去除率仅为18%),远高于已报道的40%的去除率。这表明ppk基因在***中的过量表达,导致了***菌体中poly-P的大量聚集,从而大大去除了培养基中的磷酸盐。

关键词：多聚磷酸盐激酶 ppk全基因及上下游序列快速染色体步移方法(SEFA—PCR)

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中度嗜盐细菌Halomonas ***-1甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆和表达

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微生物学报 2004年第1期44卷 72-74页

作者：洪青何健刘智李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

Halomonassp .BYS 1是一株能矿化苯乙酸的中度嗜盐细菌 ,该菌能在 0～ 2 0 %NaCl的条件下生长。甜菜碱是其主要渗透保护剂 ,通过在培养基中添加甜菜碱合成前体 (胆碱、甘氨酸 )的方法发现它能以胆碱为前体合成甜菜碱。通过PCR的方法克... 详细信息

Halomonassp .BYS 1是一株能矿化苯乙酸的中度嗜盐细菌 ,该菌能在 0～ 2 0 %NaCl的条件下生长。甜菜碱是其主要渗透保护剂 ,通过在培养基中添加甜菜碱合成前体 (胆碱、甘氨酸 )的方法发现它能以胆碱为前体合成甜菜碱。通过PCR的方法克隆了甜菜碱醛脱氢酶基因 (betB) ,测序后在大肠杆菌中进行了高效表达 ,表达产物占菌体总蛋白的 31 5 % ,酶活为 38 5U mg 。

关键词：嗜盐细菌甜菜碱醛脱氢酶基因克隆表达

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甲基对硫磷长期污染对土壤微生物的生态效应

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农村生态环境 2004年第4期20卷 48-50页

作者：张瑞福崔中利何健黄婷婷李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

研究了有机磷农药甲基对硫磷长期污染对土壤微生物的影响,结果表明:污染土壤中细菌、放线菌、真菌数量变化不大,自生固氮菌和反硝化细菌数量减少,氨化细菌、亚硝化细菌、硝化细菌数量有所增加;与对照土壤相比,污染土壤呼吸作用下降29.9... 详细信息

研究了有机磷农药甲基对硫磷长期污染对土壤微生物的影响,结果表明:污染土壤中细菌、放线菌、真菌数量变化不大,自生固氮菌和反硝化细菌数量减少,氨化细菌、亚硝化细菌、硝化细菌数量有所增加;与对照土壤相比,污染土壤呼吸作用下降29.93%,而氨化作用和硝化作用则增强。1g对照土壤(以干土计)中微生物总DNA提取量为(13.01±1.91)μg,污染土壤中则为(12.23±1.36)μg。

关键词：甲基对硫磷长期污染土壤微生物生态效应

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亚硝酸盐对EBPR工艺除磷效率的影响

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南京农业大学学报 2017年第2期40卷 266-272页

作者：乐星星顾向阳南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

[目的]比较亚硝酸盐对不同进水碳源驯化的强化生物除磷(EBPR)污泥除磷活性的抑制作用,分析亚硝酸盐影响EBPR污泥除磷效率的机制。[方法]采用厌氧-好氧型序批式生物反应器(SBR),分别以乙酸(SBR-1)和丙酸(SBR-2)为进水碳源驯化EBPR污泥,... 详细信息

[目的]比较亚硝酸盐对不同进水碳源驯化的强化生物除磷(EBPR)污泥除磷活性的抑制作用,分析亚硝酸盐影响EBPR污泥除磷效率的机制。[方法]采用厌氧-好氧型序批式生物反应器(SBR),分别以乙酸(SBR-1)和丙酸(SBR-2)为进水碳源驯化EBPR污泥,待反应器达到稳态运行状态后取1个运行周期,定期取样测定混合液中磷酸根和亚硝氮质量浓度的周期变化,比较亚硝酸盐对2种EBPR污泥除磷活性的影响,测定2种EBPR污泥的脱氮活性;通过研究亚硝酸盐对运行周期中聚磷菌胞内聚羟基烷酸(PHA)和糖原合成与分解代谢的影响,分析亚硝酸盐抑制EBPR除磷活性的机制。[结果]以乙酸为进水碳源的SBR-1和以丙酸为进水碳源的SBR-2分别经过8和11 d的驯化期成功实现了稳定的EBPR功能,除磷效率稳定在98%以上;较高浓度的亚硝酸盐对乙酸驯化的EBPR污泥和丙酸驯化的EBPR污泥均可产生抑制作用,其中以丙酸驯化的EBPR污泥对亚硝酸盐更为敏感,在亚硝氮质量浓度大于或等于5 mg·L^(-1)时即会丧失磷的吸收功能;乙酸驯化的EBPR污泥和丙酸驯化的EBPR污泥均有一定的脱氮能力,以乙酸为碳源驯化而成的EBPR污泥其脱氮活性明显高于丙酸驯化而成的EBPR污泥;在亚硝酸盐抑制除磷活性的同时聚磷菌胞内PHA和糖原代谢也受到明显的抑制作用。[结论]与乙酸驯化的EBPR污泥相比,丙酸驯化的EBPR污泥对亚硝酸盐引起的抑制作用更为敏感,以乙酸为进水碳源有利于EBPR工艺的稳定运行。

关键词：强化生物除磷亚硝酸盐糖原聚羟基烷酸

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纤维素降解菌Aspergillus ***1的产酶条件及酶学特性

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微生物学通报 2010年第8期37卷 1194-1199页

作者：赵方圆范宁杰陈一楠李顺鹏黄星南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

从牛羊粪堆肥中筛选出一株纤维素降解菌Aspergillus ***1,主要研究了液体发酵培养基中碳源、氮源、培养温度、起始pH、通气量以及接种菌龄对菌株YN1的羧甲基纤维素酶活(CMC酶活)及滤纸酶活的影响。研究结果表明,在优化条件下,该菌的CMC... 详细信息

从牛羊粪堆肥中筛选出一株纤维素降解菌Aspergillus ***1,主要研究了液体发酵培养基中碳源、氮源、培养温度、起始pH、通气量以及接种菌龄对菌株YN1的羧甲基纤维素酶活(CMC酶活)及滤纸酶活的影响。研究结果表明,在优化条件下,该菌的CMC酶活、滤纸酶活在培养第3天分别达到0.53U/mL和0.15U/mL。在酶学特性研究中,菌株YN1的CMC酶的最适反应温度为70°C,最适反应pH4.0(酶促反应为30min)。用不同温度处理1h或不同pH处理2h,YN1的CMC酶在30°C?50°C或pH3.0?4.0之间仍可保持80%以上的酶活性,对热及酸表现出较高的稳定性。

关键词： Aspergillus sp. 纤维素酶活发酵条件优化酶学特性

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高产水稻土细菌多样性的培养法与非培养法比较研究

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土壤 2008年第6期40卷 903-908页

作者：崔中利刘娟曹慧骆永明赵其国中国科学院南京土壤研究所南京210008 南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

利用细菌的通用引物扩增江西余江县高产水稻土红壤细菌总DNA和平板培养细菌混合总DNA的16S rDNA基因片段,在此基础上分别建立两种16S rDNA文库(文库a和文库b)。从两个文库中各随机挑选100个克隆,扩增出阳性克隆中的插入片段后选用HhaⅠ... 详细信息

利用细菌的通用引物扩增江西余江县高产水稻土红壤细菌总DNA和平板培养细菌混合总DNA的16S rDNA基因片段,在此基础上分别建立两种16S rDNA文库(文库a和文库b)。从两个文库中各随机挑选100个克隆,扩增出阳性克隆中的插入片段后选用HhaⅠ和RsaⅠ两种四碱基酶进行ARDRA(amplified rDNA restriction analysis)分析。统计比较分析发现,文库a的Shannon-Wienner指数、Simpson指数、丰富度、均一度分别为4.432、0.987、18.885和0.973,均高于文库b中相应的多样性参数(分别为2.271、0.758、5.736和0.501),即平板培养方法所展现的细菌群落结构多样性低于土壤中原始的多样性。结果表明,传统培养方法存在着很大的局限性,必须结合新的分子生物学技术手段才能更全面完善地认识土壤微生物群落结构多样性,以期充分利用其中丰富的微生物资源。

关键词：水稻土红壤平板培养细菌 16S rDNA克隆文库 ARDRA 多样性指数

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沙门氏菌草酰乙酸脱羧酶在大肠杆菌中的表达、纯化及其生化鉴定

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南京农业大学学报 2010年第4期33卷 81-86页

作者：齐立辉郑新艳冉婷婷徐朗莱王伟武南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

为深入了解沙门氏菌草酰乙酸脱羧酶的生化特性及功能,将该酶基因克隆到表达载体中,转入大肠杆菌中诱导表达,表达产物经monomeric avidin-Sepharose亲和层析分离纯化,获得了纯的沙门氏菌草酰乙酸脱羧酶。结果表明:纯化后的草酰乙酸脱羧酶... 详细信息

为深入了解沙门氏菌草酰乙酸脱羧酶的生化特性及功能,将该酶基因克隆到表达载体中,转入大肠杆菌中诱导表达,表达产物经monomeric avidin-Sepharose亲和层析分离纯化,获得了纯的沙门氏菌草酰乙酸脱羧酶。结果表明:纯化后的草酰乙酸脱羧酶经SDS-PAGE检测,呈现3条蛋白谱带,相对分子质量分别为65×103、46×103、8.8×103左右;该酶不耐高温,50℃温浴1h后活力几乎完全丧失;其最适pH为6.0左右;1mmol·L-1Zn2+、0.5mmol·L-1草酸和20mmol·L-1丙酮酸几乎完全抑制该酶的活力,10～20mmol·L-1NaCl对该酶有明显激活作用,但200～500mmol·L-1的NaCl对该酶却有明显抑制作用。

关键词：草酰乙酸脱羧酶 Na+泵酶纯化生化特性

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一株红壤花生根际溶磷真菌的分离、鉴定及溶磷能力的研究

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土壤学报 2012年第5期49卷 988-995页

作者：刘文干曹慧樊建波何园球南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 中国科学院南京土壤研究所南京210008

为提高磷素利用率,从花生根际土壤样品中筛选到一株溶磷能力强的菌株B1-A,结合菌落形态特征和ITS rDNA序列分析将其鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger)。菌株B1-A的不同接种量(1%,3%,5%)在两种难溶性磷酸盐(FePO4,AlPO4)培养液的溶磷量和p... 详细信息

为提高磷素利用率,从花生根际土壤样品中筛选到一株溶磷能力强的菌株B1-A,结合菌落形态特征和ITS rDNA序列分析将其鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger)。菌株B1-A的不同接种量(1%,3%,5%)在两种难溶性磷酸盐(FePO4,AlPO4)培养液的溶磷量和pH随时间动态变化表明溶磷量均与pH呈显著负相关,B1-A的溶磷量与接种量、培养时间、磷矿粉浓度有关,实验结果表明菌株B1-A在接种量为3%～5%、培养时间168 h、云南磷矿粉浓度为3 g L-1、江西磷矿粉浓度为5 g L-1时溶磷效果较好。菌株B1-A对磷酸三钙、磷酸铝、磷酸铁、磷矿粉有较强的溶解能力,最高溶磷量分别为418.7、942.3、242.2、177.4 mg L-1,有望为开发高效红壤微生物磷肥提供种质资源。

关键词：溶磷真菌溶磷量接种量红壤

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硫代硫酸盐氧化菌TX的分离、鉴定及其生物学特性

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微生物学通报 2009年第11期36卷 1638-1644页

作者：林栋青张彦科顾向阳南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

从聚硫橡胶废水处理系统中分离到一株硫代硫酸盐氧化细菌TX。根据其形态学特征、生理特征和16S rRNA基因序列相似性分析,将该菌株初步鉴定为盐生硫杆菌属(Halothiobacillus sp.)(GenBank登录号为EU871645)。该菌株能利用硫代硫酸盐、单... 详细信息

从聚硫橡胶废水处理系统中分离到一株硫代硫酸盐氧化细菌TX。根据其形态学特征、生理特征和16S rRNA基因序列相似性分析,将该菌株初步鉴定为盐生硫杆菌属(Halothiobacillus sp.)(GenBank登录号为EU871645)。该菌株能利用硫代硫酸盐、单质硫、连四硫酸盐、硫化物或亚硫酸盐为唯一能源进行自养生长,不能利用葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖、麦芽糖或酵母粉进行异养生长,为专性化能无机自养型硫杆菌。在以硫代硫酸钠为唯一能源的培养基中其最适生长温度为30°C^35°C,最适起始pH值为3.0~5.0。在矿物盐培养基中,硫代硫酸盐最终被氧化成硫酸,造成培养基pH持续下降。在摇瓶分批培养和硫胶废水处理过程中均检测到连四硫酸盐的积累,表明该菌株主要通过连四硫酸盐途径或"S4I"途径进行硫代硫酸盐的生物氧化。

关键词：聚硫橡胶废水处理盐生硫杆菌属硫代硫酸盐生物氧化 “S4I”途径

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