检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2008年第9期48卷 1141-1146页

作者：于汉寿阮康勤纪燕玲陈永萱王志伟南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

【目的】调查我国植物花上的螺原体的存在,搜集我国的螺原体资源,并研究它们的基本生物学特性。【方法】常规螺原体分离、培养方法,应用暗视野显微镜和透射电子显微镜观察螺原体形态,根据16S rDNA和ITS序列构建系统发育树研究螺原体分... 详细信息

【目的】调查我国植物花上的螺原体的存在,搜集我国的螺原体资源,并研究它们的基本生物学特性。【方法】常规螺原体分离、培养方法,应用暗视野显微镜和透射电子显微镜观察螺原体形态,根据16S rDNA和ITS序列构建系统发育树研究螺原体分离菌株可能的分类地位。【结果】分别从油菜(Brassica napus)、杜鹃(Rhododendron simsii)、红花酢浆草(Oxalis corymbosa)3种植物花表分离到4株螺原体CNR-1和CNR-2、CNA-1、CRW-1,对其形态、部分生理生化特性及分子生物学特性进行了初步研究。这4株螺原体在R-2液体培养基中生长良好,都能通过孔径为0.22μm的微孔滤膜;在R-2固体培养基上呈圆形或颗粒状菌落,菌落直径约50～600μm;在生长的某个阶段可呈典型的螺旋状,菌体直径为37.04～370.40nm,长度约0.89～11.88μm;它们都能利用葡萄糖作为碳源,不能利用尿素;在不含胎牛血清的R-2培养基中,它们都不能生长;菌株CNR-1、CNA-1能强烈代谢精氨酸,而CNR-2和CRW-1不能代谢精氨酸;在氨苄青霉素钠浓度高达2000U/mL的R-2培养基中,分离菌株生长良好。根据16S rDNA序列构建的系统发育树显示,分离菌株CNR-1和CNR-2、CNA-1与蜜蜂螺原体Spiroplasma melliferum聚类较近,而CRW-1与***聚类较近;根据ITS序列构建的系统发育树显示,CRW-1形成一个单独的分枝,其它3个菌株仍与***聚类。【结论】以上结果初步表明,分离菌株CNR-1和CNR-2、CNA-1极有可能是Spiroplasma melliferum,而CRW-1可能是一个新的螺原体种,但还需要血清学试验进一步验证。

关键词：螺原体生物学特性油菜杜鹃红花酢浆草

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一株铅镉抗性菌株WS34的生物学特性及其对植物修复铅镉污染土壤的强化作用

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环境科学学报 2008年第10期28卷 1961-1968页

作者：江春玉盛下放何琳燕马海艳孙乐妮张艳峰农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京农业大学生命科学学院南京210095

从土壤样品中筛选出一株对碳酸铅、碳酸镉活化能力最强的铅镉抗性细菌WS34,并研究其生物学特性.经生理生化特征及16SrDNA序列分析,菌株WS34被鉴定为伯克霍尔德氏菌属(***34).菌株WS34对多种重金属和抗生素具有抗性,具有溶磷、分泌吲哚... 详细信息

从土壤样品中筛选出一株对碳酸铅、碳酸镉活化能力最强的铅镉抗性细菌WS34,并研究其生物学特性.经生理生化特征及16SrDNA序列分析,菌株WS34被鉴定为伯克霍尔德氏菌属(***34).菌株WS34对多种重金属和抗生素具有抗性,具有溶磷、分泌吲哚乙酸、产生铁载体和ACC脱氨酶的能力,并对温度、pH、盐浓度具有一定耐受性.利用盆栽试验研究了菌株WS34、EDTA及EDTA和WS34复合3种处理下对印度芥菜和油菜生长及富集铅镉能力的影响.结果表明,菌株WS34能促进供试植物生长,使印度芥菜和油菜的干重分别比对照增加21.4%～76.3%和18.0%～236%,铅镉积累量比对照增加9.0%～46.4%和13.9%～329%,且油菜中的增加量大于印度芥菜.EDTA能使印度芥菜和油菜的铅镉积累量比对照分别增加25.1%～475%和10.1%～84.5%.***-1EDTA+菌株WS34的复合处理下,植物的重金属吸收量与EDTA处理相当甚至高于EDTA处理.

关键词：重金属抗性细菌生物学特性铅镉植物修复

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地衣芽孢杆菌碱性果胶酶基因PelA的克隆与原核表达

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工业微生物 2008年第1期38卷 24-29页

作者：刘连成沈标陆健梅琴徐莲南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

通过PCR扩增的方法，从本实验室筛选保存的Bacillus licheniformis DG-3菌株中扩增出碱性果胶酶的结构基因pelA，序列分析表明，所获PelA基因与已报道的*** 14A菌株的pelA基因的同源性为100％。将pelA基因在大肠杆菌中表达，发酵液菌体... 详细信息

通过PCR扩增的方法，从本实验室筛选保存的Bacillus licheniformis DG-3菌株中扩增出碱性果胶酶的结构基因pelA，序列分析表明，所获PelA基因与已报道的*** 14A菌株的pelA基因的同源性为100％。将pelA基因在大肠杆菌中表达，发酵液菌体的碱性果胶酶酶活为12u／mL。4～8mmol／L的Ca^2＋对碱性果胶酶具有显著的激活作用。

关键词：碱性果胶酶地衣芽孢杆菌克隆表达

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乐果降解菌L3的分离、鉴定及降解性能

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中国环境科学 2008年第11期28卷 994-998页

作者：王堃王志春李荣郜彦彦李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

从某农药厂废水处理池活性污泥中分离到1株以乐果为唯一碳源生长的细菌,命名为L3.根据其生理生化特征和16S r RNA(GenBank Accession ***004590)基因序列分析,将该菌株初步鉴定为副球菌属(Paracoccus sp.).该菌株能在6h内降解100mg/L的... 详细信息

从某农药厂废水处理池活性污泥中分离到1株以乐果为唯一碳源生长的细菌,命名为L3.根据其生理生化特征和16S r RNA(GenBank Accession ***004590)基因序列分析,将该菌株初步鉴定为副球菌属(Paracoccus sp.).该菌株能在6h内降解100mg/L的乐果至检出限以下.L3降解乐果的最适pH值为7.0,最适温度为35℃.土壤试验表明,L3可在3d内降解250mg/kg乐果至检出限以下.

关键词：乐果生物降解副球菌属

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中国土壤生物学研究的回顾与展望

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土壤学报 2008年第5期45卷 830-836页

作者：曹慧崔中利李顺鹏南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

土壤生物是土壤发生与发展的重要推动力,是土壤生态系统中最为活跃的组成部分。本文在系统查阅近10年来国内外土壤生物学文献的基础上,分析了中国土壤生物学研究的现状特点,从土壤生态学、土壤生物化学、土壤微生物学、土壤?植物系统、... 详细信息

土壤生物是土壤发生与发展的重要推动力,是土壤生态系统中最为活跃的组成部分。本文在系统查阅近10年来国内外土壤生物学文献的基础上,分析了中国土壤生物学研究的现状特点,从土壤生态学、土壤生物化学、土壤微生物学、土壤?植物系统、土壤动物学几个方面概括了土壤生物学研究的主要进展。结合国际土壤科学发展的前沿和热点问题,建议重点开展土壤生物与全球环境变化、土壤生物与土壤质量、土壤生物多样性与生态功能、微生物宏基因组学与活性物质开发、土壤污染与生物修复、土壤酶学与元蛋白质组技术等方面的研究。

关键词：土壤生物学微生物多样性分子生态学元蛋白质组技术宏基因组文库

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恶臭假单胞菌DLL-E4对硝基苯酚降解途径关键基因pnpC的突变分析

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生态与农村环境学报 2008年第4期24卷 77-82页

作者：沈文静张静曹慧崔中利南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

通过同源重组成功地敲除了恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)DLL-E4菌株的偏三苯酚1,2-双加氧酶基因(pnpC).pnpC插入失活菌株DLL-△pnpCl失去了降解对硝基苯酚(PNP)和对苯二酚(HQ)的能力,而pnpC敲除菌株DLL-△pnpC恢复了利用PNP和HQ的能... 详细信息

通过同源重组成功地敲除了恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)DLL-E4菌株的偏三苯酚1,2-双加氧酶基因(pnpC).pnpC插入失活菌株DLL-△pnpCl失去了降解对硝基苯酚(PNP)和对苯二酚(HQ)的能力,而pnpC敲除菌株DLL-△pnpC恢复了利用PNP和HQ的能力,但是降解速率降低.在不同硫酸铵分级梯度下PNP和邻苯二酚分别诱导的DLL-E4和DLL-△pnpC粗酶液对邻苯二酚的降解活性存在明显差异,表明恶臭假单胞菌DLL-E4中除pnpC参与PNP降解代谢过程外,还存在另一个双加氧酶替代了敲除的pnpC的功能,使得DLL-△pnpC代谢PNP的过程得以继续.

关键词：恶臭假单胞菌DLL-FA 偏三苯酚1,2-双加氧酶基因对硝基苯酚基因敲除降解

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对硝基苯酚降解菌Pseudomonas ***-7的降解特性及其降解相关基因的克隆

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微生物学报 2008年第11期48卷 1486-1492页

作者：董小军洪青李恋李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

【目的】本研究的目的是分离对硝基苯酚(PNP)降解菌,研究其对PNP的降解特性;克隆其降解相关基因,并进行表达。【方法】本研究通过富集培养法和系列稀释平板涂布法分离PNP降解菌株;采用形态观察、生理生化特征测定和16S rDNA分析对菌株... 详细信息

【目的】本研究的目的是分离对硝基苯酚(PNP)降解菌,研究其对PNP的降解特性;克隆其降解相关基因,并进行表达。【方法】本研究通过富集培养法和系列稀释平板涂布法分离PNP降解菌株;采用形态观察、生理生化特征测定和16S rDNA分析对菌株进行初步鉴定;通过摇瓶试验研究菌株降解特性;利用SEFA-PCR技术克隆降解相关基因,并亚克隆到表达载体pET29a中,构建重组表达质粒pETpnpC,再转入受体菌*** BL21(DE3)中进行诱导表达;通过分光光度法测定表达产物的酶活力。【结果】分离到一株PNP降解菌PDS-7,将该菌株鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas sp.);该菌株能够以PNP作为唯一碳源、氮源和能源生长,菌株对PNP的最高耐受浓度为80mg/L,最适降解温度为30°C,偏碱性条件有利于菌株对PNP的降解;克隆了PNP降解过程中的偏苯三酚1,2-双加氧酶基因pnpC及马来酰醋酸还原酶基因pnpD(GenBank登陆号EU233791);将pnpC在*** BL21(DE3)菌株进行了诱导表达,表达产物对偏苯三酚和邻苯二酚均有邻位开环活性,比活力分别为0.45U/mg protein和0.37U/mg protein,表明偏苯三酚1,2-双加氧酶基因pnpC得到了活性表达。【结论】分离鉴定了一株PNP降解菌Pseudomonas ***-7,研究了该菌株的降解特性,克隆和表达了降解相关基因。

关键词：对硝基苯酚 Pseudomonas sp.PDS-7 降解特性基因克隆

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抗甲磺隆假单胞菌的分离及其乙酰乳酸合酶的大小亚基ilvIH基因的克隆和表达

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微生物学报 2008年第11期48卷 1493-1498页

作者：孙笑非黄星陈博李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸Val、Leu、Ile生物合成过程中关键酶,是乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂如磺酰脲类、咪唑啉酮类、嘧啶水杨酸和磺酰氨类的作用靶标。【目... 详细信息

乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸Val、Leu、Ile生物合成过程中关键酶,是乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂如磺酰脲类、咪唑啉酮类、嘧啶水杨酸和磺酰氨类的作用靶标。【目的】获得抗甲磺隆的乙酰乳酸合酶基因,构建其表达载体,并分析基因中的位点突变与乙酰乳酸合酶对磺酰脲类除草剂抗性产生原因。【方法】从长期使用甲磺隆的土壤中分离到1株抗甲磺隆的菌株Lm10,利用PCR技术从Lm10总DNA中克隆到乙酰乳酸合酶的大小亚基基因ilvIH,对ilvIH氨基酸序列进行比对分析。分别将ilvI和ilvH分别连接到表达载体pET29a(+)多克隆位点,转化大肠杆菌(Escherichia coli)获得转化子BL21(pET-I)和BL21(pET-H),并诱导表达。【结果】菌株Lm10鉴定为假单孢菌(Pseudomonas sp.),对甲磺隆的最高耐受浓度达到14000μmol//L,且对各种乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性。Lm10与甲磺隆敏感菌株KT2440的小亚基氨基酸序列完全相同,而大亚基有6个氨基酸位点发生变异。转化子在IPTG诱导下,乙酰乳酸合酶的大小亚基的蛋白成功表达,粗酶液酶活试验结果表明Lm10的ilvI基因表达的乙酰乳酸合酶大亚基对甲磺隆有很强的抗性。【结论】发现菌株Lm10的乙酰乳酸合酶大亚基对甲磺隆有很强的抗性,抗甲磺隆菌株Lm10与敏感菌株KT2440的ilvI有6个氨基酸位点差异,这些位点突变可能是乙酰乳酸合酶对甲磺隆抗性产生的原因。

关键词：乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂除草剂抗性细菌乙酰乳酸合酶 ilvIH

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遗传稳定型六六六、多菌灵降解基因工程菌构建(英文)

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微生物学报 2008年第1期48卷 45-50页

作者：武俊许敬亮洪青李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过PCR的方法从六六六降解菌Sphingomonas ***-A扩增出完整的脱氯化氢酶基因linA。将其克隆到含有mini-Tn5的自杀性质粒pUT4K上,构建成质粒pUT/mini-Tn5-linA.通过三亲杂交,在辅助质粒RK600的帮助下,将pUT/mini-Tn5-linA转移到一株高... 详细信息

通过PCR的方法从六六六降解菌Sphingomonas ***-A扩增出完整的脱氯化氢酶基因linA。将其克隆到含有mini-Tn5的自杀性质粒pUT4K上,构建成质粒pUT/mini-Tn5-linA.通过三亲杂交,在辅助质粒RK600的帮助下,将pUT/mini-Tn5-linA转移到一株高效降解多菌灵菌株Rhodococcus ***-6中。利用mini-Tn5的转座作用将linA基因整合到DJL-6的染色体DNA上,得到工程菌株DJL-6A。该工程菌具有同时降解多菌灵和六六六的功能,且对于初始浓度为0.05μg/mL和5μg/mL的六六六的降解活性与亲本菌株BHC-A相当。在不加任何选择压力的条件下工程菌株进行连续传代,结果证明linA基因可以持续稳定的存在于宿主的染色体DNA上。

关键词：脱氯化氢酶基因linA 转座载体pUT/mini-Tn5 多功能工程菌

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多功能农药降解基因工程菌株m-CDS-1环境释放安全评价

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微生物学报 2008年第11期48卷 1479-1485页

作者：蒋建东李荣郭新强陈凯李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

【目的】为了评价多功能农药降解基因工程菌株m-CDS-1的环境释放中间试验水平的安全性。【方法】通过农药检测、平板计数、Most probable number-PCR(MPN-PCR)和Denaturing Gradient Gel Electrophoresis(DGGE)等方法在江苏大丰进行了... 详细信息

【目的】为了评价多功能农药降解基因工程菌株m-CDS-1的环境释放中间试验水平的安全性。【方法】通过农药检测、平板计数、Most probable number-PCR(MPN-PCR)和Denaturing Gradient Gel Electrophoresis(DGGE)等方法在江苏大丰进行了工程菌株m-CDS-1田间降解农药效果、定殖动态和对土壤微生物群落结构影响的研究。【结果】投加1.01×107CFU/g干土的工程菌株m-CDS-1在30d时均能完全降解10.71mg/kg的甲基对硫磷和1.29mg/kg的呋喃丹。平板计数表明工程菌株m-CDS-1在土壤中快速下降;MPN-PCR检测结果显示,在4d,15d和30d时,0～10cm混合土壤中该工程菌株的数目分别为2.15±0.98×106CFU/g干土,3.70±4.66×104CFU/g干土和检测不出。工程菌株m-CDS-1的投加不会对土壤可培养三大微生物菌群数量产生显著影响;基于细菌16S rDNA V3区的DGGE分析结果表明,施加农药对细菌菌落结构有显著影响,4d,11d,30d时农药施用区与空白对照区的图谱相似性分别为17.16%,49.81%和75.01%,但到60d时的相似性为98.62%。工程菌株m-CDS-1释放在前期对细菌群落结构有一定影响,4d,11d和30d工程菌株释放区相对于空白的相似性分别为49.57%,38.30%和83.30%。在60d时,空白、施药和施菌小区的图谱相似性都在90%以上。【结论】工程菌株m-CDS-1不仅可同时高效降解甲基对硫磷和呋喃丹,仍保持了实验室内的原有特性,而且不会成为优势菌群长期在土壤环境中存在,也不会对土壤微生物群落结构造成长期影响。

关键词：基因工程菌株m—CDS-1 环境释放安全评价农药降解 Most probable number-PCR(MPN-PCR) Denaturing Gradient Gel Electrophoresis(DGGE)

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