检索结果-内蒙古大学图书馆

高技术通讯 2006年第1期16卷 84-87页

作者：徐玮林恒刘卫东李顺鹏崔中利南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过热变性、硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex-A50阴离子交换层析和CM Sepharose Fast Flow阳离子交换层析等一系列步骤从有机磷农药降解菌Plesiomonas sp.M6中获得了甲基对硫磷水解酶（Methyl parathion hydrolase，MPH，EC3．1．8．3）的... 详细信息

通过热变性、硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex-A50阴离子交换层析和CM Sepharose Fast Flow阳离子交换层析等一系列步骤从有机磷农药降解菌Plesiomonas sp.M6中获得了甲基对硫磷水解酶（Methyl parathion hydrolase，MPH，EC3．1．8．3）的电泳纯。酶谱显示和SDS-PAGE电泳表明纯化的酶只有一条条带，其分子量约为33kD。该酶热稳定性比较高，55℃、15min处理后酶活保持稳定，最适反应pH为9．0，景适反应温度在10℃左右。动力学分析表明其对甲基对硫磷的米氏常数（Km）为2．14mmol／L，最大反应速度（Vmax）为14．08μmol／***，转换数（kcat）为2863s^-1。

关键词：甲基对硫磷水解酶(MPH) 邻单胞菌M6 纯化性质

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Burkholderia ***-1降解硝基苯酚类化合物的特性研究

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环境科学 2006年第3期27卷 582-585页

作者：张忠辉洪青洪元范赵子如李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从长期受农药污染的土壤中分离到1株高效杀螟硫磷降解菌株***-1,它能以3-甲基-4-硝基苯酚(MNP)为唯一碳源和氮源进行生长.该菌能在9h内将0.6mmol.L-1MNP完全转化成邻甲基对苯二酚(MHQ),并能继续降解MHQ.该菌降解MNP的最适温度和pH分别... 详细信息

从长期受农药污染的土壤中分离到1株高效杀螟硫磷降解菌株***-1,它能以3-甲基-4-硝基苯酚(MNP)为唯一碳源和氮源进行生长.该菌能在9h内将0.6mmol.L-1MNP完全转化成邻甲基对苯二酚(MHQ),并能继续降解MHQ.该菌降解MNP的最适温度和pH分别为30℃和7.0,菌株降解MNP的速率和起始接种量呈正相关.降解MNP的酶为诱导酶.

关键词：生物降解硝基酚类化合物亚硝酸盐诱导酶

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甲氰菊酯降解菌JQL4-5的分离鉴定及降解特性研究

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环境科学 2006年第10期27卷 2100-2104页

作者：洪源范洪青武俊张忠辉李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从农药厂废水处理池的活性污泥中分离到1株能以甲氰菊酯为唯一碳源生长的细菌,命名为JQL4-5.根据其生理生化特征和16S rDNA(GenBank Accession ***177525)序列相似性分析,将该菌株鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.).该菌株在24h内... 详细信息

从农药厂废水处理池的活性污泥中分离到1株能以甲氰菊酯为唯一碳源生长的细菌,命名为JQL4-5.根据其生理生化特征和16S rDNA(GenBank Accession ***177525)序列相似性分析,将该菌株鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.).该菌株在24h内对20 mg/L的甲氰菊酯的降解率达到99.8%.降解甲氰菊酯的最适温度为30℃,pH为7.0,降解速率与初始接种量呈正相关.酶的定域试验表明,降解甲氰菊酯的酶为胞内酶.

关键词：甲氰菊酯生物降解鞘氨醇单胞菌JQL4—5 酶的定域

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江西典型红壤区土壤细菌基因组文库构建及功能初步分析

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土壤学报 2006年第6期43卷 1037-1042页

作者：黄婷婷崔中利张璐曹慧李顺鹏南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

地球上的微生物，仅原核生物细胞总数就大约在4×10^30～6×10^30，包含的独立基因型在10^6～10^8种之间。因此，微生物所具备的分类、功能、遗传和系统发育等多样性在维持生物圈生态平衡和为人类提供资源方面起着重要的作用。... 详细信息

地球上的微生物，仅原核生物细胞总数就大约在4×10^30～6×10^30，包含的独立基因型在10^6～10^8种之间。因此，微生物所具备的分类、功能、遗传和系统发育等多样性在维持生物圈生态平衡和为人类提供资源方面起着重要的作用。然而长期以来由于受到研究方法和手段的限制，土壤中绝大多数微生物的功能还不清楚。环境样品的宏基因组学（metagenomics）是对环境样品中微生物群体基因组进行的分析，该方法在众多用于获得未培养微生物的生理和遗传特性的方法中，逐渐显示出强大的优势。

关键词：红壤 DNA提取基因组文库序列分析

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异丙隆降解菌Y57的分离鉴定及其降解特性

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中国环境科学 2006年第3期26卷 315-319页

作者：孙纪全黄星何健许敬亮李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

从农药厂的活性污泥中分离出1株能高效降解异丙隆的细菌Y57,通过生理生化鉴定和16SrDNA同源性序列分析,鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.).接种量为1%的Y57可以在48h之内将30mg/L的异丙隆完全降解,降解率达到99%以上,降解最适pH值... 详细信息

从农药厂的活性污泥中分离出1株能高效降解异丙隆的细菌Y57,通过生理生化鉴定和16SrDNA同源性序列分析,鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.).接种量为1%的Y57可以在48h之内将30mg/L的异丙隆完全降解,降解率达到99%以上,降解最适pH值为7.0,降解效率与接种量呈正相关,在通气良好状况下降解速率较高.1mmol/L的Li+、Ca2+、Mg2+可以提高Y57降解异丙隆速率;1mmol/L的Ni2+、Zn2+对降解有明显的抑制作用;1000mg/L的酵母粉、葡萄糖、牛肉膏或蛋白胨对降解具有抑制作用.降解谱实验表明,Y57还可以降解绿麦隆、敌草隆、敌稗等除草剂.

关键词：微生物降解异丙隆苯基脲

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降解菌CDS-1产呋喃丹水解酶的条件及酶学特征

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中国环境科学 2006年第2期26卷 210-213页

作者：徐剑宏洪青严秋香洪源范李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

Sphingomonas ***-1是一株呋喃丹高效降解菌．为了给利用该菌产生的酶去除环境中的呋喃丹残留提供一些理论依据，对CDS-1产生的呋喃丹水解酶粗酶进行了研究．结果表明，在LB培养基中。CDS-1产生呋喃丹水解酶的晟适条件为pa6～8、30℃、... 详细信息

Sphingomonas ***-1是一株呋喃丹高效降解菌．为了给利用该菌产生的酶去除环境中的呋喃丹残留提供一些理论依据，对CDS-1产生的呋喃丹水解酶粗酶进行了研究．结果表明，在LB培养基中。CDS-1产生呋喃丹水解酶的晟适条件为pa6～8、30℃、培养30h；该酶在20—30℃、pH〉6．0的条件下比较稳定：在pH6．5和30℃时显示最大的呋喃丹水解酶活性；大多数金属离子浓度在0.2mmol／L时对其酶活有促进作用：酶定域实验结果显示该酶为胞内酶．

关键词：呋喃丹酶促降解酶活酶的定域

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噻吩磺隆降解菌FLX的分离鉴定及降解特性

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中国环境科学 2006年第2期26卷 214-218页

作者：黄星何健潘继杰洪青李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

从生产噻吩磺隆的农药厂内土壤中采取土样,经驯化富集后筛选到1株能高效降解噻吩磺隆的细菌FLX,根据表型特征、生理生化特性及16SrDNA分析,鉴定FLX初步为寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.).FLX能在含50mg/L噻吩磺隆的基础盐液体培养基... 详细信息

从生产噻吩磺隆的农药厂内土壤中采取土样,经驯化富集后筛选到1株能高效降解噻吩磺隆的细菌FLX,根据表型特征、生理生化特性及16SrDNA分析,鉴定FLX初步为寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.).FLX能在含50mg/L噻吩磺隆的基础盐液体培养基中降解噻吩磺隆,48h降解率达83.34%.FLX降解噻吩磺隆的最适pH值为7.0,最适温度为35℃,在所试的金属离子中,Zn2+、Al3+、Cu2+、Ba2+、Fe3+等对FLX的降解影响较小;Hg2+,Co2+则抑制FLX的生长与降解.酶的定域实验表明,该菌中噻吩磺隆水解酶为胞内酶.

关键词：噻吩磺隆寡养单胞菌生物降解

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以质粒载体构建土壤宏基因组文库的研究

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土壤学报 2006年第3期43卷 513-516页

作者：樊奔崔中利邱珊莲曹慧李顺鹏南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从土壤中提取土壤总DNA,切割成一定长度的DNA片段并连接到载体上,然后转化宿主菌,形成一个重组DNA文库即宏基因组（metagenome）文库.目前对宏基因组的研究在国际上是土壤微生物学研究的前沿领域和热点.文库构建后可以根据宿主细菌获得... 详细信息

从土壤中提取土壤总DNA,切割成一定长度的DNA片段并连接到载体上,然后转化宿主菌,形成一个重组DNA文库即宏基因组（metagenome）文库.目前对宏基因组的研究在国际上是土壤微生物学研究的前沿领域和热点.文库构建后可以根据宿主细菌获得的功能筛选相应的克隆;也可以用已知的探针分离目的基因片段,加上表达调控元件后获取活性产物,所以通过宏基因组文库可以规避微生物培养的限制而寻找新的功能基因或者直接筛选活性物质;在早期宏基因组还被用来研究土壤微生物的遗传多样性.因此构建宏基因组文库是研究微生物分子生态学和开发微生物资源的强有力工具.本研究从土壤中直接分离DNA,部分酶切后分别回收2～6kb和6～9kb片段,然后分别与pUC19质粒载体连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α构建了土壤宏基因组文库,实验中比较了不同DNA片段长度和不同的转化方法对文库构建的影响.

关键词：土壤总DNA 宏基因组 DNA文库活性物质

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利用枯草芽孢杆菌ytkA和ywoF基因启动子与信号肽重组分泌表达mpd基因

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生物工程学报 2006年第2期22卷 249-256页

作者：张晓舟闫新崔中利李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pNW33N和去除了信号肽编码序列的成熟mpd基因构建了穿梭启动子探针pNW33N-mpd。用该探针从质粒pMPDP3和pMPDP29上克隆来自于枯草芽孢杆菌ytkA和ywoF基因上游的启动子功能片段,构建了穿梭表达载体pNYTM和... 详细信息

用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pNW33N和去除了信号肽编码序列的成熟mpd基因构建了穿梭启动子探针pNW33N-mpd。用该探针从质粒pMPDP3和pMPDP29上克隆来自于枯草芽孢杆菌ytkA和ywoF基因上游的启动子功能片段,构建了穿梭表达载体pNYTM和pNYWM。将表达载体pNYTM和pNYWM转入枯草芽孢杆菌1A751获得表达菌株1A751(pNYTM)和1A751(pNYTM),mpd基因在ytkA和ywoF基因的启动子和信号肽的带动下实现了分泌表达且具有天然活性,结果表明ytkA基因的启动子强度强于ywoF基因的启动子。利用ytkA基因的强启动子和nprB基因的分泌型信号肽编码序列构建了新的穿梭分泌表达载体pYNMK,并使mpd基因在枯草芽孢杆菌WB800中得到了更高水平的分泌表达,表达菌株WB800(pYNMK)在培养到第84h时甲基对硫磷水解酶酶活达到最高值为10.40u/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的10.8倍,重组表达产物有91.4%分泌在培养基中。

关键词：枯草芽孢杆菌 ytkA基因 ywoF基因启动子信号肽 mpd基因分泌表达

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中度嗜盐菌Halomonas ***-1耐盐相关DNA片段的克隆

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应用与环境生物学报 2006年第3期12卷 375-378页

作者：洪青徐剑宏王云端武俊张晓舟李顺鹏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

通过固体亚硝基胍诱变获得了Halom ***-1的盐敏感突变株BYS-1M.以pBBR1MCS-2为载体在***5α中构建了BYS-1的基因文库.以文库菌***5α(pBBR-X)为供体菌、***803(pRK2013)为辅助菌、BYS-1M为受体菌进行三亲接合,筛选到了恢复耐盐性能的接... 详细信息

通过固体亚硝基胍诱变获得了Halom ***-1的盐敏感突变株BYS-1M.以pBBR1MCS-2为载体在***5α中构建了BYS-1的基因文库.以文库菌***5α(pBBR-X)为供体菌、***803(pRK2013)为辅助菌、BYS-1M为受体菌进行三亲接合,筛选到了恢复耐盐性能的接合子HR-23,提取接合子HR-23的重组质粒pHR23,酶切确定其插入的耐盐相关DNA片段大小分为5.4 kb.该片段为Halom ***-1耐盐相关基因的克隆奠定了基础.

关键词：中度嗜盐菌耐盐相关DNA片段克隆

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