检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2005年第2期32卷 34-38页

作者：徐剑宏洪青汪婷张小华李顺鹏南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过接合使供体大肠杆菌DH5α中的质粒pSC123上的转座子插入到受体菌CFDS1基因组DNA中,以引起该菌株的基因插入突变。利用转座子上的卡那霉素抗性基因和呋喃丹降解过程中红色物质的产生与否初步筛选出6株突变株,分别命名为CFDSM1～CFDSM... 详细信息

通过接合使供体大肠杆菌DH5α中的质粒pSC123上的转座子插入到受体菌CFDS1基因组DNA中,以引起该菌株的基因插入突变。利用转座子上的卡那霉素抗性基因和呋喃丹降解过程中红色物质的产生与否初步筛选出6株突变株,分别命名为CFDSM1～CFDSM6。紫外扫描和气谱检测结果进一步证明这些突变子确实失去了对呋喃丹的降解能力。根据转座子的序列设计引物,以6株突变株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,并对PCR产物进行限制性酶切分析,结果表明这些突变子中呋喃丹降解基因的失活就是由于转座子的插入而导致的。

关键词：呋喃丹转座子标签法降解突变

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对硝基苯酚冲击对UASB反应器中污泥活性和微生物种群的影响

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微生物学通报 2007年第6期34卷 1123-1128页

作者：梅琴高国庆虞方伯刘连成沈标南京农业大学农业部环境微生物工程重点开放实验室南京210095

研究了在稳定运行的上流式厌氧污泥床(Upflow Anaerobic Sludge Blanket,UASB)反应器中,对硝基苯酚(p-NP)冲击对反应器活性的影响。采用PCR-DGGE技术监测了反应器受对硝基苯酚冲击后微生物种群多样性的变化。实验结果表明,p-NP冲击对污... 详细信息

研究了在稳定运行的上流式厌氧污泥床(Upflow Anaerobic Sludge Blanket,UASB)反应器中,对硝基苯酚(p-NP)冲击对反应器活性的影响。采用PCR-DGGE技术监测了反应器受对硝基苯酚冲击后微生物种群多样性的变化。实验结果表明,p-NP冲击对污泥的产甲烷活性和COD去除活性均有严重的抑制,污泥活性的恢复需要较长时间;高浓度冲击比低浓度冲击产生更严重的影响,20mg/L和40mg/Lp-NP冲击后污泥活性的恢复期分别为16d和27d。p-NP冲击后,真细菌和古菌的多样性均发生了显著的变化,而且p-NP冲击对真细菌的影响大于对古菌的影响。p-NP冲击后甲烷产量下降的主要与Methanosaetasp.的活性下降以及Methanomicrobia sp.丰度的下降有关。而冲击后真细菌的主要变化表现为Chloroflexisp.、Bacteroidesp.和Anaerovibrio sp.的丰度均下降;Rheinheimera sp.在受到20mg/Lp-NP冲击时丰度下降,继续受到40mg/Lp-NP冲击时该种群消失。Flavobacteria sp.是p-NP冲击后新出现的细菌种群,可能与p-NP的降解有关。

关键词：对硝基苯酚冲击微生物种群多样性污泥活性

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氟铃脲降解菌FLN-1的分离鉴定及降解特性

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环境科学学报 2009年第6期29卷 1178-1183页

作者：张隽黄星邱吉国李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从农药厂废水处理池的活性污泥中分离到1株能降解氟铃脲的菌株,命名为FLN-1.根据表型特征、生理生化特性及16S rDNA序列同源性分析,将FLN-1初步归类为红球菌属(Rhodococcus sp.).研究结果表明,该菌能在含氟铃脲(50mg.L-1)的基础盐液体... 详细信息

从农药厂废水处理池的活性污泥中分离到1株能降解氟铃脲的菌株,命名为FLN-1.根据表型特征、生理生化特性及16S rDNA序列同源性分析,将FLN-1初步归类为红球菌属(Rhodococcus sp.).研究结果表明,该菌能在含氟铃脲(50mg.L-1)的基础盐液体培养基中降解氟铃脲,5d降解率达85%,降解最适pH为6.0～9.0,最适温度为25～40℃,降解速率随初始接种量的增加而增大;100mg.L-1的葡萄糖、酵母膏和蛋白胨对菌株降解氟铃脲具有促进作用.酶的定域试验表明,降解氟铃脲的酶为胞内酶.

关键词：氟铃脲生物降解红球菌FLN-1 酶的定域

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海州香薷(Elsholtzia splendens)根际铜抗性细菌的筛选及生物多样性

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微生物学报 2009年第10期49卷 1360-1366页

作者：孙乐妮何琳燕张艳峰张文辉王琪盛下放南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

【目的】重金属耐性植物海州香薷根际铜抗性细菌的筛选及生物多样性研究将有助于了解微生物-超富集植物相互关系和植物修复机理、开发微生物-香薷重金属修复新技术。【方法】采用稀释平板涂布法从海州香薷根际筛选铜抗性菌株,测定菌株... 详细信息

【目的】重金属耐性植物海州香薷根际铜抗性细菌的筛选及生物多样性研究将有助于了解微生物-超富集植物相互关系和植物修复机理、开发微生物-香薷重金属修复新技术。【方法】采用稀释平板涂布法从海州香薷根际筛选铜抗性菌株,测定菌株溶磷和产生吲哚乙酸、铁载体、1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶的特性,采用16S rDNA限制性酶切多态性分析(amplified rDNA restriction analysis,ARDRA)研究铜抗性细菌的遗传多样性,根据16S rDNA相似性对产ACC脱氨酶的菌株进行了鉴定。【结果】分离纯化到27株抗Cu2+20 mg/L的细菌,所有菌株均能产生吲哚乙酸或其衍生物,44.4%的分离菌株能够分泌高量的铁载体。分离菌株在60%相似性水平上可聚类分为7个群。5株细菌具ACC脱氨酶活性,菌株2EBS12、2EBS13、2EBS15、3EBS11属于不动杆菌属(Acinetobacter),菌株2EBS14属于产碱菌属(Alcaligenes)。【结论】海州香薷根际铜抗性细菌具有丰富多样的生物学特性和遗传多样性,不动杆菌属和产碱杆菌属细菌具ACC脱氨酶活性。

关键词：铜抗性细菌生物多样性 ACC脱氨酶海州香薷

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具溶磷能力的植物内生促生细菌的分离筛选及其生物多样性

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微生物学报 2010年第6期50卷 710-716页

作者：黄静盛下放何琳燕南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

【目的】具溶磷能力的植物内生促生细菌的分离筛选及生物多样性的研究将有助于扩大溶磷微生物来源、丰富功能内生细菌资源库及开发新的改善土壤磷素营养途径。【方法】结合内生细菌分离方法从油菜和玉米体内分离筛选具溶磷能力的内生细... 详细信息

【目的】具溶磷能力的植物内生促生细菌的分离筛选及生物多样性的研究将有助于扩大溶磷微生物来源、丰富功能内生细菌资源库及开发新的改善土壤磷素营养途径。【方法】结合内生细菌分离方法从油菜和玉米体内分离筛选具溶磷能力的内生细菌,测定菌株摇瓶条件下的溶磷能力,并研究其产生吲哚乙酸(IAA)、铁载体、1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶等的特性,采用16SrDNA限制性酶切片段长度多态性分析(RFLP)研究了具溶磷能力的植物内生促生细菌的遗传多样性,并挑选典型菌株进行了鉴定。【结果】分离筛选到32株具稳定溶磷能力的植物内生细菌,所有菌株都能从磷酸钙中释放出有效磷并使培养液pH值降低,释放的有效磷浓度最高达到537.6mg/L。分离自油菜的供试细菌都能产生吲哚乙酸和铁载体,分离自玉米的供试细菌中有68.4%的菌株产生吲哚乙酸,63.2%的菌株产生铁载体,63.2%的菌株具ACC脱氨酶活性。分离菌株在76%相似性水平上可聚类分为8个群。11株典型菌株归属于泛菌属(Pantoea)、假单胞菌属(Pseudomonas)、伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)、不动杆菌属(Acinetobacter)及罗尔斯顿菌属(Ralstonia)等5个属。【结论】油菜和玉米体内溶磷细菌具有丰富多样的生物学特性和遗传多样性。

关键词：溶磷作用内生促生细菌生物多样性 ACC脱氨酶玉米油菜

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对硝基苯酚降解菌Pseudomonas ***-7的降解特性及其降解相关基因的克隆

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微生物学报 2008年第11期48卷 1486-1492页

作者：董小军洪青李恋李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

【目的】本研究的目的是分离对硝基苯酚(PNP)降解菌,研究其对PNP的降解特性;克隆其降解相关基因,并进行表达。【方法】本研究通过富集培养法和系列稀释平板涂布法分离PNP降解菌株;采用形态观察、生理生化特征测定和16S rDNA分析对菌株... 详细信息

【目的】本研究的目的是分离对硝基苯酚(PNP)降解菌,研究其对PNP的降解特性;克隆其降解相关基因,并进行表达。【方法】本研究通过富集培养法和系列稀释平板涂布法分离PNP降解菌株;采用形态观察、生理生化特征测定和16S rDNA分析对菌株进行初步鉴定;通过摇瓶试验研究菌株降解特性;利用SEFA-PCR技术克隆降解相关基因,并亚克隆到表达载体pET29a中,构建重组表达质粒pETpnpC,再转入受体菌*** BL21(DE3)中进行诱导表达;通过分光光度法测定表达产物的酶活力。【结果】分离到一株PNP降解菌PDS-7,将该菌株鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas sp.);该菌株能够以PNP作为唯一碳源、氮源和能源生长,菌株对PNP的最高耐受浓度为80mg/L,最适降解温度为30°C,偏碱性条件有利于菌株对PNP的降解;克隆了PNP降解过程中的偏苯三酚1,2-双加氧酶基因pnpC及马来酰醋酸还原酶基因pnpD(GenBank登陆号EU233791);将pnpC在*** BL21(DE3)菌株进行了诱导表达,表达产物对偏苯三酚和邻苯二酚均有邻位开环活性,比活力分别为0.45U/mg protein和0.37U/mg protein,表明偏苯三酚1,2-双加氧酶基因pnpC得到了活性表达。【结论】分离鉴定了一株PNP降解菌Pseudomonas ***-7,研究了该菌株的降解特性,克隆和表达了降解相关基因。

关键词：对硝基苯酚 Pseudomonas sp.PDS-7 降解特性基因克隆

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利用枯草芽孢杆菌ytkA和ywoF基因启动子与信号肽重组分泌表达mpd基因

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生物工程学报 2006年第2期22卷 249-256页

作者：张晓舟闫新崔中利李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pNW33N和去除了信号肽编码序列的成熟mpd基因构建了穿梭启动子探针pNW33N-mpd。用该探针从质粒pMPDP3和pMPDP29上克隆来自于枯草芽孢杆菌ytkA和ywoF基因上游的启动子功能片段,构建了穿梭表达载体pNYTM和... 详细信息

用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pNW33N和去除了信号肽编码序列的成熟mpd基因构建了穿梭启动子探针pNW33N-mpd。用该探针从质粒pMPDP3和pMPDP29上克隆来自于枯草芽孢杆菌ytkA和ywoF基因上游的启动子功能片段,构建了穿梭表达载体pNYTM和pNYWM。将表达载体pNYTM和pNYWM转入枯草芽孢杆菌1A751获得表达菌株1A751(pNYTM)和1A751(pNYTM),mpd基因在ytkA和ywoF基因的启动子和信号肽的带动下实现了分泌表达且具有天然活性,结果表明ytkA基因的启动子强度强于ywoF基因的启动子。利用ytkA基因的强启动子和nprB基因的分泌型信号肽编码序列构建了新的穿梭分泌表达载体pYNMK,并使mpd基因在枯草芽孢杆菌WB800中得到了更高水平的分泌表达,表达菌株WB800(pYNMK)在培养到第84h时甲基对硫磷水解酶酶活达到最高值为10.40u/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的10.8倍,重组表达产物有91.4%分泌在培养基中。

关键词：枯草芽孢杆菌 ytkA基因 ywoF基因启动子信号肽 mpd基因分泌表达

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抗甲磺隆假单胞菌的分离及其乙酰乳酸合酶的大小亚基ilvIH基因的克隆和表达

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微生物学报 2008年第11期48卷 1493-1498页

作者：孙笑非黄星陈博李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸Val、Leu、Ile生物合成过程中关键酶,是乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂如磺酰脲类、咪唑啉酮类、嘧啶水杨酸和磺酰氨类的作用靶标。【目... 详细信息

乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸Val、Leu、Ile生物合成过程中关键酶,是乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂如磺酰脲类、咪唑啉酮类、嘧啶水杨酸和磺酰氨类的作用靶标。【目的】获得抗甲磺隆的乙酰乳酸合酶基因,构建其表达载体,并分析基因中的位点突变与乙酰乳酸合酶对磺酰脲类除草剂抗性产生原因。【方法】从长期使用甲磺隆的土壤中分离到1株抗甲磺隆的菌株Lm10,利用PCR技术从Lm10总DNA中克隆到乙酰乳酸合酶的大小亚基基因ilvIH,对ilvIH氨基酸序列进行比对分析。分别将ilvI和ilvH分别连接到表达载体pET29a(+)多克隆位点,转化大肠杆菌(Escherichia coli)获得转化子BL21(pET-I)和BL21(pET-H),并诱导表达。【结果】菌株Lm10鉴定为假单孢菌(Pseudomonas sp.),对甲磺隆的最高耐受浓度达到14000μmol//L,且对各种乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性。Lm10与甲磺隆敏感菌株KT2440的小亚基氨基酸序列完全相同,而大亚基有6个氨基酸位点发生变异。转化子在IPTG诱导下,乙酰乳酸合酶的大小亚基的蛋白成功表达,粗酶液酶活试验结果表明Lm10的ilvI基因表达的乙酰乳酸合酶大亚基对甲磺隆有很强的抗性。【结论】发现菌株Lm10的乙酰乳酸合酶大亚基对甲磺隆有很强的抗性,抗甲磺隆菌株Lm10与敏感菌株KT2440的ilvI有6个氨基酸位点差异,这些位点突变可能是乙酰乳酸合酶对甲磺隆抗性产生的原因。

关键词：乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂除草剂抗性细菌乙酰乳酸合酶 ilvIH

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遗传稳定型六六六、多菌灵降解基因工程菌构建(英文)

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微生物学报 2008年第1期48卷 45-50页

作者：武俊许敬亮洪青李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过PCR的方法从六六六降解菌Sphingomonas ***-A扩增出完整的脱氯化氢酶基因linA。将其克隆到含有mini-Tn5的自杀性质粒pUT4K上,构建成质粒pUT/mini-Tn5-linA.通过三亲杂交,在辅助质粒RK600的帮助下,将pUT/mini-Tn5-linA转移到一株高... 详细信息

通过PCR的方法从六六六降解菌Sphingomonas ***-A扩增出完整的脱氯化氢酶基因linA。将其克隆到含有mini-Tn5的自杀性质粒pUT4K上,构建成质粒pUT/mini-Tn5-linA.通过三亲杂交,在辅助质粒RK600的帮助下,将pUT/mini-Tn5-linA转移到一株高效降解多菌灵菌株Rhodococcus ***-6中。利用mini-Tn5的转座作用将linA基因整合到DJL-6的染色体DNA上,得到工程菌株DJL-6A。该工程菌具有同时降解多菌灵和六六六的功能,且对于初始浓度为0.05μg/mL和5μg/mL的六六六的降解活性与亲本菌株BHC-A相当。在不加任何选择压力的条件下工程菌株进行连续传代,结果证明linA基因可以持续稳定的存在于宿主的染色体DNA上。

关键词：脱氯化氢酶基因linA 转座载体pUT/mini-Tn5 多功能工程菌

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耐盐及苯乙酸、甲基对硫磷降解基因工程菌的构建

引用

微生物学报 2003年第5期43卷 554-559页

作者：刘智洪青徐剑宏张国顺李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

H1 (Halomonassp.)是一株耐高盐浓度 (1 8%NaCl,W V)和降解苯乙酸的菌株 ,pDT3质粒为pUC1 9插入甲基对硫磷水解酶基因 (mpd基因 )构建而成。采用HindⅢ酶切 ,获得含有完整mpd基因片段 ,克隆到广宿主质粒pKT2 3 0和pBBR1 MCS2上 ,构建... 详细信息

H1 (Halomonassp.)是一株耐高盐浓度 (1 8%NaCl,W V)和降解苯乙酸的菌株 ,pDT3质粒为pUC1 9插入甲基对硫磷水解酶基因 (mpd基因 )构建而成。采用HindⅢ酶切 ,获得含有完整mpd基因片段 ,克隆到广宿主质粒pKT2 3 0和pBBR1 MCS2上 ,构建成质粒pKT MP和pBBR MP。通过三亲杂交 ,在辅助质粒pRK2 0 1 3的帮助下 ,将质粒pKT MP和pBBR MP转移到H1中 ,得到的工程菌H pKT MP和H pBBR MP具有耐盐、降解苯乙酸和水解甲基对硫磷的功能 ,其中H pBBR MP水解酶活性与亲本菌株甲基对硫磷降解菌 (Pseudomonasputida)DLL E4相当 ,而H pKT MP水解酶活性要提高 1倍左右。经过传代试验。

关键词：耐盐苯乙酸甲基对硫磷降解基因工程菌三亲杂交含盐废水

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