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第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会

作者：孙笑非黄星李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶 acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸 Val、Leu、Ile 生物合成过程中关键酶。本文从长期受甲磺隆污染的土壤中分离,纯化出1株甲磺隆的抗性菌 Lm10。经形态、生理生化特... 详细信息

乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶 acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸 Val、Leu、Ile 生物合成过程中关键酶。本文从长期受甲磺隆污染的土壤中分离,纯化出1株甲磺隆的抗性菌 Lm10。经形态、生理生化特性测定、16S rDNA 序列同源性比较和系统进化树的分析将甲磺隆抗性菌 Lm10鉴定为假单孢菌(***)。菌株 Lm10对甲磺隆的最高耐受浓度达到13.75nmol/L,且对各种乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性。利用 PCR 技术从 Lm10总 DNA 中克隆到 AHAS 大小亚基基因 ilvIH,氨基酸比对结果表明菌株 Lm10与标准菌株 kt2440的 IlvI 的5个位点有差异,而小亚基则与标准菌株 kt2440的 ilvH 完全相同。为阐明抗性产生机制和通过基因工程获得性能更优良的乙酰乳酸合酶基因提供了重要的理论基础和应用价值。

关键词： ALS inhibitors herbicides herbicides-resistant bacterium acetohydroxyacid synthase ilvIH

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两株抗除草剂克雷伯氏菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

两株抗除草剂克雷伯氏菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：沈晶晶黄星俞欣妍李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

乙酰羟酸合成酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类及嘧啶水杨酸类等乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的乙酰羟基酸合成酶突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值。本文... 详细信息

乙酰羟酸合成酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类及嘧啶水杨酸类等乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的乙酰羟基酸合成酶突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值。本文从长期使用磺酰脲类除草剂的农田土壤中分离到二株磺酰脲类除草剂抗性细菌 HR9和 HR11,根据表型特征、生理生化特性及16SrDNA 序列系统发育分析,将 HR9和 HR11初步鉴定为克雷伯氏菌 (Klebsiella sp.)。菌株 HR9和 HR11对甲磺隆的最高耐受浓度分别达到9600μmol/L 和8200 μmol/L,且对各种乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性。利用 PCR 技术从 HR9和 HR11 总 DNA 中克隆到 AHAS 大小亚基基因 ilvIH,比对结果表明菌株 HR11与菌株 HR9的 IlvI 有6个位点的氨基酸有差异,HR9、HR11与除草剂敏感型的 *** 的 IlvI 各有37和34个位点的氨基酸有差异。

关键词：乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂除草剂抗性细菌乙酰羟酸合酶 ilvH

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邻单胞菌M6中甲基对硫磷水解酶（MPH）的纯化及性质的研究

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高技术通讯 2006年第1期16卷 84-87页

作者：徐玮林恒刘卫东李顺鹏崔中利南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过热变性、硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex-A50阴离子交换层析和CM Sepharose Fast Flow阳离子交换层析等一系列步骤从有机磷农药降解菌Plesiomonas sp.M6中获得了甲基对硫磷水解酶（Methyl parathion hydrolase，MPH，EC3．1．8．3）的... 详细信息

通过热变性、硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex-A50阴离子交换层析和CM Sepharose Fast Flow阳离子交换层析等一系列步骤从有机磷农药降解菌Plesiomonas sp.M6中获得了甲基对硫磷水解酶（Methyl parathion hydrolase，MPH，EC3．1．8．3）的电泳纯。酶谱显示和SDS-PAGE电泳表明纯化的酶只有一条条带，其分子量约为33kD。该酶热稳定性比较高，55℃、15min处理后酶活保持稳定，最适反应pH为9．0，景适反应温度在10℃左右。动力学分析表明其对甲基对硫磷的米氏常数（Km）为2．14mmol／L，最大反应速度（Vmax）为14．08μmol／***，转换数（kcat）为2863s^-1。

关键词：甲基对硫磷水解酶(MPH) 邻单胞菌M6 纯化性质

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Burkholderia ***-1降解硝基苯酚类化合物的特性研究

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环境科学 2006年第3期27卷 582-585页

作者：张忠辉洪青洪元范赵子如李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从长期受农药污染的土壤中分离到1株高效杀螟硫磷降解菌株***-1,它能以3-甲基-4-硝基苯酚(MNP)为唯一碳源和氮源进行生长.该菌能在9h内将0.6mmol.L-1MNP完全转化成邻甲基对苯二酚(MHQ),并能继续降解MHQ.该菌降解MNP的最适温度和pH分别... 详细信息

从长期受农药污染的土壤中分离到1株高效杀螟硫磷降解菌株***-1,它能以3-甲基-4-硝基苯酚(MNP)为唯一碳源和氮源进行生长.该菌能在9h内将0.6mmol.L-1MNP完全转化成邻甲基对苯二酚(MHQ),并能继续降解MHQ.该菌降解MNP的最适温度和pH分别为30℃和7.0,菌株降解MNP的速率和起始接种量呈正相关.降解MNP的酶为诱导酶.

关键词：生物降解硝基酚类化合物亚硝酸盐诱导酶

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甲氰菊酯降解菌JQL4-5的分离鉴定及降解特性研究

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环境科学 2006年第10期27卷 2100-2104页

作者：洪源范洪青武俊张忠辉李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从农药厂废水处理池的活性污泥中分离到1株能以甲氰菊酯为唯一碳源生长的细菌,命名为JQL4-5.根据其生理生化特征和16S rDNA(GenBank Accession ***177525)序列相似性分析,将该菌株鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.).该菌株在24h内... 详细信息

从农药厂废水处理池的活性污泥中分离到1株能以甲氰菊酯为唯一碳源生长的细菌,命名为JQL4-5.根据其生理生化特征和16S rDNA(GenBank Accession ***177525)序列相似性分析,将该菌株鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.).该菌株在24h内对20 mg/L的甲氰菊酯的降解率达到99.8%.降解甲氰菊酯的最适温度为30℃,pH为7.0,降解速率与初始接种量呈正相关.酶的定域试验表明,降解甲氰菊酯的酶为胞内酶.

关键词：甲氰菊酯生物降解鞘氨醇单胞菌JQL4—5 酶的定域

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异丙隆降解菌Y57的分离鉴定及其降解特性

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中国环境科学 2006年第3期26卷 315-319页

作者：孙纪全黄星何健许敬亮李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

从农药厂的活性污泥中分离出1株能高效降解异丙隆的细菌Y57,通过生理生化鉴定和16SrDNA同源性序列分析,鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.).接种量为1%的Y57可以在48h之内将30mg/L的异丙隆完全降解,降解率达到99%以上,降解最适pH值... 详细信息

从农药厂的活性污泥中分离出1株能高效降解异丙隆的细菌Y57,通过生理生化鉴定和16SrDNA同源性序列分析,鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.).接种量为1%的Y57可以在48h之内将30mg/L的异丙隆完全降解,降解率达到99%以上,降解最适pH值为7.0,降解效率与接种量呈正相关,在通气良好状况下降解速率较高.1mmol/L的Li+、Ca2+、Mg2+可以提高Y57降解异丙隆速率;1mmol/L的Ni2+、Zn2+对降解有明显的抑制作用;1000mg/L的酵母粉、葡萄糖、牛肉膏或蛋白胨对降解具有抑制作用.降解谱实验表明,Y57还可以降解绿麦隆、敌草隆、敌稗等除草剂.

关键词：微生物降解异丙隆苯基脲

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江西典型红壤区土壤细菌基因组文库构建及功能初步分析

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土壤学报 2006年第6期43卷 1037-1042页

作者：黄婷婷崔中利张璐曹慧李顺鹏南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

地球上的微生物，仅原核生物细胞总数就大约在4×10^30～6×10^30，包含的独立基因型在10^6～10^8种之间。因此，微生物所具备的分类、功能、遗传和系统发育等多样性在维持生物圈生态平衡和为人类提供资源方面起着重要的作用。... 详细信息

地球上的微生物，仅原核生物细胞总数就大约在4×10^30～6×10^30，包含的独立基因型在10^6～10^8种之间。因此，微生物所具备的分类、功能、遗传和系统发育等多样性在维持生物圈生态平衡和为人类提供资源方面起着重要的作用。然而长期以来由于受到研究方法和手段的限制，土壤中绝大多数微生物的功能还不清楚。环境样品的宏基因组学（metagenomics）是对环境样品中微生物群体基因组进行的分析，该方法在众多用于获得未培养微生物的生理和遗传特性的方法中，逐渐显示出强大的优势。

关键词：红壤 DNA提取基因组文库序列分析

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降解菌CDS-1产呋喃丹水解酶的条件及酶学特征

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中国环境科学 2006年第2期26卷 210-213页

作者：徐剑宏洪青严秋香洪源范李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

Sphingomonas ***-1是一株呋喃丹高效降解菌．为了给利用该菌产生的酶去除环境中的呋喃丹残留提供一些理论依据，对CDS-1产生的呋喃丹水解酶粗酶进行了研究．结果表明，在LB培养基中。CDS-1产生呋喃丹水解酶的晟适条件为pa6～8、30℃、... 详细信息

Sphingomonas ***-1是一株呋喃丹高效降解菌．为了给利用该菌产生的酶去除环境中的呋喃丹残留提供一些理论依据，对CDS-1产生的呋喃丹水解酶粗酶进行了研究．结果表明，在LB培养基中。CDS-1产生呋喃丹水解酶的晟适条件为pa6～8、30℃、培养30h；该酶在20—30℃、pH〉6．0的条件下比较稳定：在pH6．5和30℃时显示最大的呋喃丹水解酶活性；大多数金属离子浓度在0.2mmol／L时对其酶活有促进作用：酶定域实验结果显示该酶为胞内酶．

关键词：呋喃丹酶促降解酶活酶的定域

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噻吩磺隆降解菌FLX的分离鉴定及降解特性

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中国环境科学 2006年第2期26卷 214-218页

作者：黄星何健潘继杰洪青李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

从生产噻吩磺隆的农药厂内土壤中采取土样,经驯化富集后筛选到1株能高效降解噻吩磺隆的细菌FLX,根据表型特征、生理生化特性及16SrDNA分析,鉴定FLX初步为寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.).FLX能在含50mg/L噻吩磺隆的基础盐液体培养基... 详细信息

从生产噻吩磺隆的农药厂内土壤中采取土样,经驯化富集后筛选到1株能高效降解噻吩磺隆的细菌FLX,根据表型特征、生理生化特性及16SrDNA分析,鉴定FLX初步为寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.).FLX能在含50mg/L噻吩磺隆的基础盐液体培养基中降解噻吩磺隆,48h降解率达83.34%.FLX降解噻吩磺隆的最适pH值为7.0,最适温度为35℃,在所试的金属离子中,Zn2+、Al3+、Cu2+、Ba2+、Fe3+等对FLX的降解影响较小;Hg2+,Co2+则抑制FLX的生长与降解.酶的定域实验表明,该菌中噻吩磺隆水解酶为胞内酶.

关键词：噻吩磺隆寡养单胞菌生物降解

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以质粒载体构建土壤宏基因组文库的研究

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土壤学报 2006年第3期43卷 513-516页

作者：樊奔崔中利邱珊莲曹慧李顺鹏南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从土壤中提取土壤总DNA,切割成一定长度的DNA片段并连接到载体上,然后转化宿主菌,形成一个重组DNA文库即宏基因组（metagenome）文库.目前对宏基因组的研究在国际上是土壤微生物学研究的前沿领域和热点.文库构建后可以根据宿主细菌获得... 详细信息

从土壤中提取土壤总DNA,切割成一定长度的DNA片段并连接到载体上,然后转化宿主菌,形成一个重组DNA文库即宏基因组（metagenome）文库.目前对宏基因组的研究在国际上是土壤微生物学研究的前沿领域和热点.文库构建后可以根据宿主细菌获得的功能筛选相应的克隆;也可以用已知的探针分离目的基因片段,加上表达调控元件后获取活性产物,所以通过宏基因组文库可以规避微生物培养的限制而寻找新的功能基因或者直接筛选活性物质;在早期宏基因组还被用来研究土壤微生物的遗传多样性.因此构建宏基因组文库是研究微生物分子生态学和开发微生物资源的强有力工具.本研究从土壤中直接分离DNA,部分酶切后分别回收2～6kb和6～9kb片段,然后分别与pUC19质粒载体连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α构建了土壤宏基因组文库,实验中比较了不同DNA片段长度和不同的转化方法对文库构建的影响.

关键词：土壤总DNA 宏基因组 DNA文库活性物质

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