检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：杨林王秀荣张桂红陈苏红廖明中国动物疫病预防控制中心华南农业大学兽医学院农业部养禽与禽病防治重点开放实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

本研究通过对我国养猪业危害严重的四种重要病毒病:猪瘟(CSFV)、猪口蹄疫(FMDV)、猪繁殖与呼吸综合症(PRRSV)和猪流感开展特异引物和探针的设计、靶基因扩增和克隆、芯片杂交与反应条件优化等实验,筛选出四条敏感性好、特异性高的探针... 详细信息

本研究通过对我国养猪业危害严重的四种重要病毒病:猪瘟(CSFV)、猪口蹄疫(FMDV)、猪繁殖与呼吸综合症(PRRSV)和猪流感开展特异引物和探针的设计、靶基因扩增和克隆、芯片杂交与反应条件优化等实验,筛选出四条敏感性好、特异性高的探针用于猪重要病毒病检测基因芯片的制备,同时开展了探针的优化实验,确立了不对称PCR引物浓度比例,为建立猪重要病毒病基因芯片诊断技术平台奠定了基础。

关键词：猪基因芯片指针

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口蹄疫病毒NSP 3ABC基因在昆虫细胞中的分泌表达及其活性检测

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生物工程学报 2007年第3期23卷 540-545页

作者：马江涛卢曾军曹轶梅郭慧琛郭建宏祝秀梅杨孝朴刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院

用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细... 详细信息

用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒。重组病毒感染Sf9昆虫细胞,采用通过SDS-PAGE和Western blot检测,证明目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达产物分泌至细胞培养上清中,并具有良好的生物活性。表达的目的蛋白经过镍柱亲和层析法纯化后,用间接ELISA方法检测与口蹄疫病毒感染动物血清的反应性,证明表达目的蛋白与感染动物血清有很好的反应性而与正常动物以及免疫动物血清不发生反应。该研究为建立一种更加敏感和特异的口蹄疫病毒感染动物与疫苗免疫动物的鉴别诊断方法奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因杆状病毒分泌性表达

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检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立

检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：刘茂军靳岷杜改梅邵国青张映山西农业大学金陵科技学院动物科学与技术学院江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室

选用猪肺炎支原体168株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接酶联免疫吸附方法(ELISA)。结果显示,ELISA试验的最佳反应条件:抗原包被浓度为1.5μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度为1:100,酶标抗体1∶10000稀释;包被液为pH9.6的碳... 详细信息

选用猪肺炎支原体168株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接酶联免疫吸附方法(ELISA)。结果显示,ELISA试验的最佳反应条件:抗原包被浓度为1.5μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度为1:100,酶标抗体1∶10000稀释;包被液为pH9.6的碳酸盐缓冲液,2%明胶作封闭液,洗涤液为含0.5%PBST,稀释液为4%PEG6000-PBST;抗原抗体最佳结合时间为90min,酶标抗体最佳作用时间为60min。使用猪肺炎支原体168株作为包被抗原建立的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒具有较高的特异性、敏感性和较好的重复性。

关键词：猪肺炎支原体间接ELISA

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H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白基因的克隆及原核表达

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实用诊断与治疗杂志 2007年第12期21卷 885-887,I0011页

作者：易华山侯顺利独军政胡永浩常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州市730046 甘肃农业大学动物医学院兰州军区疾病预防控制中心

目的:为防控禽流感在家禽和水禽中的流行,从而控制对人的感染,探讨一种能区别自然感染鸡和疫苗免疫鸡的鉴别诊断方法。方法:采用RT-PCR方法扩增禽流感病毒H9N2的NS1基因(660bp);并将该片段克隆至pET-28(a)质粒中,构建重组表达载体pET-N... 详细信息

目的:为防控禽流感在家禽和水禽中的流行,从而控制对人的感染,探讨一种能区别自然感染鸡和疫苗免疫鸡的鉴别诊断方法。方法:采用RT-PCR方法扩增禽流感病毒H9N2的NS1基因(660bp);并将该片段克隆至pET-28(a)质粒中,构建重组表达载体pET-NS1,转化*** BL21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.7mmol/L的IPTG诱导表达6h,并应用Western-blot方法分析表达产物的反应原性。结果:pET-NS1载体能高效表达NS1蛋白,相对分子质量约25000,纯化产物能与该亚型的AIV活病毒感染鸡血清发生特异性反应而与灭活病毒免疫鸡血清不发生反应。结论:NS1基因在大肠埃希氏菌中的表达产物可用来鉴别禽流感免疫鸡群和感染鸡群。

关键词：禽流感非结构蛋白表达 H9N2

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马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白真核表达载体的构建与瞬时表达

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中国预防兽医学报 2006年第2期28卷 133-135页

作者：杜建王志亮金宁一张念祖农业部动物检疫所国家外来动物疫病诊断中心解放军军需大学病毒基因工程重点实验室吉林长春130062 农业部热带亚热带动物病毒学重点实验室云南昆明650224

将马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白基因GL插入真核表达载体pVAX1中构建真核表达载体pVAX1-GL,酶切和测序结果表明构建是正确的,用脂质体转染试剂将其转染BHK-21细胞并通过间接免疫荧光试验检测其在体外的表达情况,结果在转染的细胞表面观察到... 详细信息

将马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白基因GL插入真核表达载体pVAX1中构建真核表达载体pVAX1-GL,酶切和测序结果表明构建是正确的,用脂质体转染试剂将其转染BHK-21细胞并通过间接免疫荧光试验检测其在体外的表达情况,结果在转染的细胞表面观察到绿色荧光,证明基因得到了表达,而对照则无绿色荧光,本研究为马动脉炎基因疫苗的研究奠定了基础。

关键词：马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白真核表达载体

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猪圆环病毒诊断技术研究进展

猪圆环病毒诊断技术研究进展

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第二届全国现代免疫诊断技术学术研讨会

作者：全艳平张亚非崔尚金赵玉军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与流行病学中心哈尔滨150001 兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110161 哈尔滨市科技情报研究所哈尔滨150006 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与流行病学中心哈尔滨150001 兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

猪圆环病毒(PorcineCircovirus,PCV)是1974年德国学者Tischer首次从猪肾传代细胞系PK-15中发现的一种污染病毒,由于该病毒不产生细胞病变,所以以前一直未被发现.PCV属于圆环病毒科,单链环状DNA病毒,该科还包括人TT病毒(TTV),鸡贫血病毒(... 详细信息

猪圆环病毒(PorcineCircovirus,PCV)是1974年德国学者Tischer首次从猪肾传代细胞系PK-15中发现的一种污染病毒,由于该病毒不产生细胞病变,所以以前一直未被发现.PCV属于圆环病毒科,单链环状DNA病毒,该科还包括人TT病毒(TTV),鸡贫血病毒(CAV),鹦鹉喙羽病病毒(PBFDV),地三叶草矮化病毒(SCSV)、椰树叶腐烂病毒(CFDV)和香蕉簇顶病毒(BBTV).PCV病毒粒子呈20面体对称,无囊膜,直径约为17nm,病毒DNA以滚环方式复制.PCV对外界抵抗力较强,对酸、氯仿不敏感,不能凝集动物红细胞.研究表明从PK-15细胞中分离的圆环病毒无致病性,命名为PCV1;而在一种新病--猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)中分离到了猪圆环病毒有致病性,命名为PCV2.这两种类型PCV之间有抗原部分交叉反应,两者基因组结构有显著差别,PCV1的基因组全长1759nt,PCV2基因组全长1767/1768nt,核苷酸同源性68-76﹪,而PCV2毒株之间的核苷酸同源性高于96﹪.从PCV的核苷酸序列推导出11个开放读码框,其中ORF1和ORF2是两个重要渎码框,ORF1编码病毒的复制酶,ORF2编码病毒的衣壳蛋白.本文讨论，1病毒分离，2.多重PCR(multipiexPCR)，3PCR-限制性片段长度多态性分析(PCR-restrictionfragmentlengthpolymorphism,PCR-RFLP)，4免疫组织化学试验(Immunohistochemicalaasay,IHC)，5原位杂交试验(insituhybridization,ISH)，6.酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)，7间接免疫荧光试验。

关键词：猪圆环病毒免疫诊断猪断奶后多系统衰竭综合征多重PCR 免疫组织化学酶联免疫吸附

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