检索结果-内蒙古大学图书馆

2010高热病流行趋势及应对研讨会探析猪高热性疾病——猪高热性疾病的快速诊断

兽药市场指南 2010年第9期 5-6页

作者：周斌农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

2010年8月1-2日，由成功牧业和齐鲁制药集团举办的“2010高热病流行趋势及应对研讨会”在安徽省合肥市召开，来自安徽省各地的规模养殖场场长及技术人员50多人参加了此次会议，在此次会议上，农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室周... 详细信息

2010年8月1-2日，由成功牧业和齐鲁制药集团举办的“2010高热病流行趋势及应对研讨会”在安徽省合肥市召开，来自安徽省各地的规模养殖场场长及技术人员50多人参加了此次会议，在此次会议上，农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室周斌博士、安徽农业大学动物科技学院传染病研究室李郁教授分别就高热性疾病的诊断与防控与大家进行了精彩分享，本刊特将精彩内容整理如下。

关键词：快速诊断流行趋势高热病疾病热性动物科技学院重点开放实验室安徽农业大学

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羊源弗氏柠檬酸杆菌微量凝集试验抗体检测方法的建立

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农业生物技术学报 2025年第06期 1409-1416页

作者：李静刘艺婷杨金钱丁略烜薛云丁轲司丽芳赵战勤河南科技大学动物科技学院/洛阳市动物细菌性传染病防控技术重点实验室河南科技大学动物科技学院/河南省高等学校环境与畜产品安全重点学科开放实验室

羊弗氏柠檬酸杆菌病是羊(Ovis aries)的一种新发传染病，为建立该病的快速诊断方法，本研究以羊源致病性弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii) LK-1株的灭活菌体为抗原，通过各反应条件的优化建立了微量凝集试验(micro-agglutination t... 详细信息

羊弗氏柠檬酸杆菌病是羊(Ovis aries)的一种新发传染病，为建立该病的快速诊断方法，本研究以羊源致病性弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii) LK-1株的灭活菌体为抗原，通过各反应条件的优化建立了微量凝集试验(micro-agglutination test, MAT)抗体检测方法。结果显示，凝集抗原的最佳反应浓度为2.0×109cfu/mL，最佳反应温度和时间分别为37℃、7～9 h。该方法能够特异性检测羊源弗氏柠檬酸杆菌，对8种常见羊疫病菌阳性血清的检测结果均为阴性(效价≤1∶2)。敏感性试验和疫苗免疫抗体检测结果显示，该方法能检测到弗氏柠檬杆菌灭活疫苗免疫羊后14 d的血清抗体(效价≥1∶4)，首免后21 d和二免后14 d (首免后35 d)的血清抗体效价分别达到1∶16和1∶64以上。批内变异系数均为0、批间变异系数为5.43%～6.60%，表明重复性良好。利用该方法检测374份临床血清样品，并与ELISA方法对比，结果显示，2种检测方法的总阳性率分别为9.9%和10.7%，检测结果的一致性良好(Kappa值为0.897)，初步表明在河南省部分区域的羊群中存在弗氏柠檬酸杆菌感染。本研究为羊弗氏柠檬酸杆菌病的疫苗抗体评价和流行病学调查提供参考。

关键词：羊弗氏柠檬酸杆菌微量凝集试验抗体

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检测牛奶中结合珠蛋白的电流型免疫传感器的研制

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南京农业大学学报 2011年第5期34卷 112-116页

作者：丁守强刘彬谭勋潘韬浙江大学动物科学学院/农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室浙江杭州310029 全国畜牧总站北京100125

为构建可定量检测牛奶中结合珠蛋白(Hp)含量的电流型免疫传感器,以三电极系统中的金电极为工作电极,采用层层自组装技术将L-半胱氨酸、纳米金颗粒和抗牛Hp抗体依次组装在工作电极上,制成免疫传感器。制成的免疫传感器对Hp的线性检测范围... 详细信息

为构建可定量检测牛奶中结合珠蛋白(Hp)含量的电流型免疫传感器,以三电极系统中的金电极为工作电极,采用层层自组装技术将L-半胱氨酸、纳米金颗粒和抗牛Hp抗体依次组装在工作电极上,制成免疫传感器。制成的免疫传感器对Hp的线性检测范围为15～100 mg.L-1,最低检测限为0.63 mg.L-1,并具有较好的重现性和稳定性。分别采用该传感器和ELISA检测试剂盒对隐性乳房炎患牛乳样中的Hp含量进行检测的结果表明,两种检测结果间无显著差异(P>0.05)。结论:制备的免疫传感器可定量检测牛奶中的结合珠蛋白(Hp)。

关键词：牛奶结合珠蛋白免疫传感器

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我国17株绵羊肺炎支原体分子分型及其菌体蛋白免疫印迹

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微生物学报 2011年第10期51卷 1421-1426页

作者：许健储岳峰高鹏程赵萍贺英剡根强逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心兰州730046 石河子大学动物科技学院石河子832000

【目的】分别从基因和蛋白水平研究我国部分地区绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)分离株的分子特征,并了解其免疫原性蛋白的差异。【方法】对分离自8个地区的17株绵羊肺炎支原体进行扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Len... 详细信息

【目的】分别从基因和蛋白水平研究我国部分地区绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)分离株的分子特征,并了解其免疫原性蛋白的差异。【方法】对分离自8个地区的17株绵羊肺炎支原体进行扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulphate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE)分析,采用NTsys-2.10e软件对AFLP和SDS-PAGE结果进行聚类,并用绵羊肺炎支原体模式株Y98高免血清对部分分离株进行免疫印迹分析。【结果】当相似系数分别为0.78和0.85时,绵羊肺炎支原体分离株可根据8个来源地区分成8个AFLP群和8个SDS-PAGE群;用8株分离株进行免疫印迹共出现6条蛋白条带,分子质量分别为105 kDa、83 kDa、65 kDa、42 kDa、40 kDa或26 kDa,其中83 kDa和40 kDa蛋白为8个菌株保守的免疫原性蛋白。【结论】我国部分地区绵羊肺炎支原体分离株之间存在遗传差异,不同分离株的主要免疫原性蛋白也存在一定差异,但83 kDa和40 kDa蛋白为其保守的免疫原性蛋白。本研究首次对我国部分地区绵羊肺炎支原体分离株进行了分子分型与免疫印迹分析,结果将为绵羊肺炎支原体病的新型诊断技术开发和疫苗研制奠定理论基础。

关键词：绵羊肺炎支原体 AFLP SDS-PAGE 免疫印迹

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口蹄疫病毒NSP 3ABC基因在昆虫细胞中的分泌表达及其活性检测

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生物工程学报 2007年第3期23卷 540-545页

作者：马江涛卢曾军曹轶梅郭慧琛郭建宏祝秀梅杨孝朴刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院

用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细... 详细信息

用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒。重组病毒感染Sf9昆虫细胞,采用通过SDS-PAGE和Western blot检测,证明目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达产物分泌至细胞培养上清中,并具有良好的生物活性。表达的目的蛋白经过镍柱亲和层析法纯化后,用间接ELISA方法检测与口蹄疫病毒感染动物血清的反应性,证明表达目的蛋白与感染动物血清有很好的反应性而与正常动物以及免疫动物血清不发生反应。该研究为建立一种更加敏感和特异的口蹄疫病毒感染动物与疫苗免疫动物的鉴别诊断方法奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因杆状病毒分泌性表达

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猪源札幌病毒衣壳蛋白的原核表达及免疫原性检测

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中国兽医科学 2014年第12期44卷 1273-1278页

作者：杨勃兰喜杨彬柳纪省单兴娜刘伟王恩丽张韵马小军甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为获得猪源札幌病毒(SaV)衣壳蛋白(VP1),以SaV CH430株的RNA为模板,采用RT-PCR扩增VP1基因;将其克隆到原核表达载体pET-30a中,并将成功构建的原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。结果显示,获得的VP1基因全长为1 635bp... 详细信息

为获得猪源札幌病毒(SaV)衣壳蛋白(VP1),以SaV CH430株的RNA为模板,采用RT-PCR扩增VP1基因;将其克隆到原核表达载体pET-30a中,并将成功构建的原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。结果显示,获得的VP1基因全长为1 635bp,编码545个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,目的条带大小为63ku,与预期结果相符。重组菌在37℃、IPTG终浓度为0.8mmol/L、诱导表达6h时重组蛋白的表达量达到最大值,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在。将纯化的VP1重组蛋白免疫家兔,得到了超免疫血清。Western-blot分析表明,该重组蛋白与超免疫血清具有良好的反应原性。上述试验结果为深入研究VP1蛋白的功能和研制ELISA诊断试剂盒奠定了基础。

关键词：猪札幌病毒衣壳蛋白原核表达

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猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗研究进展

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中国农学通报 2010年第23期26卷 7-11页

作者：张奕强王猛刘文倩刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046 四川农业大学动物生物技术中心雅安四川625014

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是威胁世界养猪业的最主要的疾病之一,每年都给养猪业带来巨大的经济损失。目前,世界上还没有对PRRS确实有效的防控措施,免疫预防是防控的主要手段。基因工程疫苗是现在疫苗研究的重点,特别是核酸疫苗不仅能引... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是威胁世界养猪业的最主要的疾病之一,每年都给养猪业带来巨大的经济损失。目前,世界上还没有对PRRS确实有效的防控措施,免疫预防是防控的主要手段。基因工程疫苗是现在疫苗研究的重点,特别是核酸疫苗不仅能引起体液免疫和激发较强的细胞免疫,而且其生产工艺简单,稳定性好,成本低,便于贮藏,不具有感染性,不会出现毒力返强等安全问题。现在对PRRS核酸疫苗的研究已初具成效,现就核酸疫苗的研究进展进行综述。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗预防

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绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位基因(pdha)的克隆、表达及其免疫学活性测定

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农业生物技术学报 2012年第3期20卷 275-282页

作者：许健储岳峰高鹏程赵萍贺英剡根强逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心石河子大学动物科技学院

丙酮酸脱氢酶α-亚单位（PDHA）在病原体丙酮酸脱氢酶的催化过程中发挥着重要作用。为表达绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae）PDHA蛋白并测定其免疫学活性,应用PCR方法扩增出绵羊肺炎支原体pdha基因并对其序列进行分析,将pdha... 详细信息

丙酮酸脱氢酶α-亚单位（PDHA）在病原体丙酮酸脱氢酶的催化过程中发挥着重要作用。为表达绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae）PDHA蛋白并测定其免疫学活性,应用PCR方法扩增出绵羊肺炎支原体pdha基因并对其序列进行分析,将pdha基因中色氨酸密码子TGA优化为TGG后进行全基因合成,插入到pET32-a（+）载体上,构建了pET32-a（+）-pdha重组质粒,将重组质粒转化到大肠杆菌（Escherichia coli）BL21中诱导表达PDHA蛋白,并通过免疫印迹及小鼠（Mus musculus）免疫试验对其免疫学活性进行测定。结果pdha基因全长1125bp,编码375aa,（G+C）%为34.76%,第304;06位、379;81位、586;88位、592;94位、625;27位、811;13位、889;91位及964;66位TGA在支原体中编码色氨酸而不是作为终止密码子;基因序列比对及进化树分析显示,绵羊肺炎支原体pdha基因与10种支原体的pdha基因序列同源性为32.6%;5.3%,氨基酸序列同源性为39.3%;0.6%,基因序列和氨基酸序列均与猪肺炎支原体（***）有同源性,分别为85.3%和90.6%;绵羊肺炎支原体pdha基因在33℃、IPTG0.25mmol/L诱导6h的表达条件下,表达量最高;重组的PDHA蛋白可与绵羊肺炎支原体高免血清具有免疫印迹条带,在免疫小鼠后血清抗体效价与对照组相比,均显著升高（P<0.05）。本实验首次成功克隆表达了绵羊肺炎支原体pdha基因,并证明其重组PDHA蛋白具有较好的免疫学活性。为绵羊支原体肺炎基因工程疫苗及诊断研究提供候选靶标。

关键词：绵羊肺炎支原体 pdha基因克隆 PDHA蛋白表达免疫学活性

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马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白真核表达载体的构建与瞬时表达

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中国预防兽医学报 2006年第2期28卷 133-135页

作者：杜建王志亮金宁一张念祖农业部动物检疫所国家外来动物疫病诊断中心解放军军需大学病毒基因工程重点实验室吉林长春130062 农业部热带亚热带动物病毒学重点实验室云南昆明650224

将马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白基因GL插入真核表达载体pVAX1中构建真核表达载体pVAX1-GL,酶切和测序结果表明构建是正确的,用脂质体转染试剂将其转染BHK-21细胞并通过间接免疫荧光试验检测其在体外的表达情况,结果在转染的细胞表面观察到... 详细信息

将马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白基因GL插入真核表达载体pVAX1中构建真核表达载体pVAX1-GL,酶切和测序结果表明构建是正确的,用脂质体转染试剂将其转染BHK-21细胞并通过间接免疫荧光试验检测其在体外的表达情况,结果在转染的细胞表面观察到绿色荧光,证明基因得到了表达,而对照则无绿色荧光,本研究为马动脉炎基因疫苗的研究奠定了基础。

关键词：马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白真核表达载体

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旋毛虫TsP53抗原基因的原核表达及抗原性分析

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中国兽医科学 2010年第4期40卷 373-377页

作者：王鸿盛李文卉盖文燕姚菊霞曲自刚王艳华张德林薛慧文付宝权甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

应用RT-PCR方法从旋毛虫肌幼虫总RNA中获得TsP53基因片段,限制性酶切后连接到表达质粒pET30a中,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切、PCR分析及测序鉴定后,将重组表达质粒pET30a-TsP53转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达... 详细信息

应用RT-PCR方法从旋毛虫肌幼虫总RNA中获得TsP53基因片段,限制性酶切后连接到表达质粒pET30a中,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切、PCR分析及测序鉴定后,将重组表达质粒pET30a-TsP53转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物,对表达产物纯化后通过间接ELISA鉴定重组蛋白的抗原性。结果显示,成功构建了重组表达质粒pET30a-TsP53,测序结果表明插入片段为1 176 bp,编码391个氨基酸残基,与旋毛虫P53抗原基因序列(U25127)有99%的同源性,开放阅读框正确。含有pET30a-TsP53重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子质量约为50 ku,主要以包涵体形式存在。间接ELISA结果表明,重组抗原可以被旋毛虫感染不同时期的猪血清特异性识别,有望用于旋毛虫病的免疫诊断。

关键词：旋毛虫 TsP53 原核表达抗原性

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