检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2024年第22期57卷 4578-4588页

作者：钱艳红宋帅温肖会牛瑞辉杨燕秋郑博彬袁子国罗胜军广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站华南农业大学兽医学院

【背景】旋毛虫（Trichinella spiralis）是一种食源性人兽共患寄生线虫，被列为世界七大食源性寄生虫，在家畜中，旋毛虫主要感染猪，并且能够通过猪肉及副产品传播给人类，不仅给我国生猪养殖产业带来了巨大的经济损失，而且严重危害... 详细信息

【背景】旋毛虫（Trichinella spiralis）是一种食源性人兽共患寄生线虫，被列为世界七大食源性寄生虫，在家畜中，旋毛虫主要感染猪，并且能够通过猪肉及副产品传播给人类，不仅给我国生猪养殖产业带来了巨大的经济损失，而且严重危害人类健康和公共卫生安全。【目的】建立一种灵敏度高，特异性强，快速自动化的猪旋毛虫血清学检测方法,为阻止人兽共患寄生虫病的传播提供帮助。【方法】利用基因克隆和原核表达技术构建原核表达载体，通过诱导表达获得旋毛虫14-3-3重组蛋白，并验证其反应原性。用制备的重组蛋白包被磁性微粒，以此为检测抗原建立化学发光免疫分析方法，并对建立的方法进行条件优化。最后对优化后的方法进行临界值的界定及特异性、敏感性和重复性的确定；通过对来自广东省和贵州省不同养猪场的1 000份猪临床血清样本进行检测，评估该检测方法的实用性及符合率。【结果】成功表达并纯化出Ts14-3-3重组蛋白，该蛋白能特异性识别猪旋毛虫阳性血清中的抗体。建立的检测方法经过优化，结合缓冲液最佳pH为5,Ts14-3-3重组蛋白最佳包被量为5μg·mg-1-beads，活化剂最佳使用量为50μg·mg-1-beads,1%BSA封闭效果最好，酶标二抗最佳稀释度为1﹕40 000，最佳反应时间为10 min，待检样本最佳孵育时间为5 min，最佳酶促反应时间为2 min。最后经过评估，该检测方法的临界化学发光值为374 185 RLU，与猪弓形虫、猪球虫、猪结肠小袋纤毛虫、猪繁殖与呼吸综合征、经典猪瘟、猪伪狂犬和猪口蹄疫抗体均无交叉反应，该检测方法与现有ELISA检测方法相比敏感性更高，批内和批间重复性均小于10%，检测的1 000份临床猪血清样本中旋毛虫抗体阳性率为0.6%，与市售ELISA试剂盒检出总符合率为98.18%。【结论】成功建立了猪旋毛虫抗体管式化学发光免疫分析检测方法，该检测方法特异性强，稳定性好，与ELISA方法相比更灵敏，快速，临床检测符合率高。

关键词：旋毛虫血清学诊断 Ts14-3-3 原核表达管式化学发光免疫分析

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基于登革病毒噬菌体展示文库的E蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定

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中国动物传染病学报 2023年

作者：陈玲玲范瑞文何雷贾琼秦蓉芬陈玉红李雷斌黄袁慧刘玉良李义平王传彬广西大学动物科学技术学院中国动物疫病预防控制中心山西农业大学动物医学学院中山大学中山医学院和热带病防治研究教育部重点实验室

登革病毒(Dengue virus， DENV)是一种经伊蚊传播的人兽共患病毒，目前没有特异性抗DENV药物和安全且高效的疫苗。为制备可中和DENV的纳米抗体，本研究构建血清II型DENV(DENV-2)特异性噬菌体展示文库，并筛选DENV E蛋白特异性纳米抗体... 详细信息

登革病毒(Dengue virus， DENV)是一种经伊蚊传播的人兽共患病毒，目前没有特异性抗DENV药物和安全且高效的疫苗。为制备可中和DENV的纳米抗体，本研究构建血清II型DENV(DENV-2)特异性噬菌体展示文库，并筛选DENV E蛋白特异性纳米抗体。首先将灭活并浓缩的DENV-2免疫羊驼，采血分离外周血单核细胞(PBMC)并提取总RNA，通过RT-PCR扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)并克隆入pCANTAB-5E质粒，构建成DENV特异性纳米抗体噬菌体展示文库。然后，以DENV-2 E蛋白为抗原淘筛纳米抗体库。将筛选到的2个VHH片段克隆入pPICZαA载体后在毕赤酵母(GS115株)中表达，并纯化抗体。最后，鉴定纯化的纳米抗体与E蛋白的反应性。结果显示：成功构建库容为9.1 × 108个的噬菌体展示文库；经3轮淘筛获得1株与DENV-2 E蛋白特异结合的纳米抗体DV2-Nb2。本研究为DENV诊断和抗体药物研发提供实验技术基础。

关键词：血清II型登革病毒 E蛋白纳米抗体噬菌体展示

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猪德尔塔冠状病毒N蛋白单克隆抗体2D7的制备与生物学特性鉴定

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中国动物传染病学报 2024年第5期32卷 115-125页

作者：张宁赵平刘思雨赵硕陈忠伟何颖欧阳康卢冰霞蒋家霞郭旋林昌华赵武黄伟坚秦毅斌赵凌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室南宁530001 广西大学动物科学技术学院南宁530005 广西职业技术学院南宁530226 广西农垦永新畜牧集团金光有限公司南宁530042 广西农垦永新畜牧集团西江有限公司贵港537100 广西桂垦牧业有限公司南宁530022

为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后... 详细信息

为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后获得PDCoV-N重组蛋白,将其进行纯化后再免疫小鼠,制备针对PDCoV-N蛋白的mAb,并进行了抗体的效价测定、免疫荧光(IFA)、Western blot、亚类的鉴定、mAb特异性的鉴定。结果,成功构建pColdⅡ-PDCoV-N重组原核表达质粒,SDS-PAGE显示重组N蛋白成功表达,分子质量约为38 kDa;经小鼠免疫、细胞融合、亚克隆筛选获得1株分泌PDCoV-N蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞株;制备的腹水经间接ELISA方法测定抗体的效价为2.048×10^(6)。IFA、Western blot试验表明该mAb可以与PDCoV-N蛋白及全病毒特异性结合,亚类鉴定其亚型为IgG1,轻链为κ链。该mAb只与PDCoV反应,而与其他猪肠道病毒无交叉反应,表明本研究制备的mAb具有良好的特异性。本研究成功制备了PDCoV-N蛋白的mAb,为进一步研究PDCoV的生物学特性和诊断试剂的开发提供技术支持。

关键词：猪德尔塔冠状病毒 N蛋白单克隆抗体

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羊源弗氏柠檬酸杆菌微量凝集试验抗体检测方法的建立

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农业生物技术学报 2025年第6期 1409-1416页

作者：李静刘艺婷杨金钱丁略烜薛云丁轲司丽芳赵战勤河南科技大学动物科技学院/洛阳市动物细菌性传染病防控技术重点实验室河南科技大学动物科技学院/河南省高等学校环境与畜产品安全重点学科开放实验室

羊弗氏柠檬酸杆菌病是羊(Ovis aries)的一种新发传染病，为建立该病的快速诊断方法，本研究以羊源致病性弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii) LK-1株的灭活菌体为抗原，通过各反应条件的优化建立了微量凝集试验(micro-agglutination t... 详细信息

羊弗氏柠檬酸杆菌病是羊(Ovis aries)的一种新发传染病，为建立该病的快速诊断方法，本研究以羊源致病性弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii) LK-1株的灭活菌体为抗原，通过各反应条件的优化建立了微量凝集试验(micro-agglutination test, MAT)抗体检测方法。结果显示，凝集抗原的最佳反应浓度为2.0×109cfu/mL，最佳反应温度和时间分别为37℃、7～9 h。该方法能够特异性检测羊源弗氏柠檬酸杆菌，对8种常见羊疫病菌阳性血清的检测结果均为阴性(效价≤1∶2)。敏感性试验和疫苗免疫抗体检测结果显示，该方法能检测到弗氏柠檬杆菌灭活疫苗免疫羊后14 d的血清抗体(效价≥1∶4)，首免后21 d和二免后14 d (首免后35 d)的血清抗体效价分别达到1∶16和1∶64以上。批内变异系数均为0、批间变异系数为5.43%～6.60%，表明重复性良好。利用该方法检测374份临床血清样品，并与ELISA方法对比，结果显示，2种检测方法的总阳性率分别为9.9%和10.7%，检测结果的一致性良好(Kappa值为0.897)，初步表明在河南省部分区域的羊群中存在弗氏柠檬酸杆菌感染。本研究为羊弗氏柠檬酸杆菌病的疫苗抗体评价和流行病学调查提供参考。

关键词：羊弗氏柠檬酸杆菌微量凝集试验抗体

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我国部分省区猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及灭活疫苗的研制

我国部分省区猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及灭活疫苗的研制

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作者：刘松涛华中农业大学

学位级别：硕士

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是一种重要的人兽共患病原菌,各个年龄段的猪只均可感染发病,可引发猪巴氏杆菌性肺炎、猪萎缩性鼻炎,是猪呼吸道疾病综合征（PRDC）的重要致病因子之一,对我国养猪业发展造成了巨大影响。Pm... 详细信息

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是一种重要的人兽共患病原菌,各个年龄段的猪只均可感染发病,可引发猪巴氏杆菌性肺炎、猪萎缩性鼻炎,是猪呼吸道疾病综合征（PRDC）的重要致病因子之一,对我国养猪业发展造成了巨大影响。Pm根据编码荚膜及脂多糖基因簇的不同,可分为5种（A、B、D、E、F）荚膜基因型和8种脂多糖基因型（L1-L8）。有研究表明,我国猪群中Pm流行菌株的基因型存在多样性,而现有的关于我国猪群中Pm的相关数据较少。因此,本研究从我国部分地区规模化猪场患有疑似呼吸系统疾病猪的肺脏组织样品与鼻拭子样品中进行Pm的分离鉴定并对所分离的菌株进行荚膜分型、脂多糖分型、毒力因子检测以及耐药性分析。在此基础上,筛选优势基因型的流行菌株作为种子菌株制备猪巴氏杆菌病灭活疫苗,并对疫苗的安全性,免疫效力等进行初步评估,为巴氏杆菌病的防控奠定基础。主要研究结果如下:1.猪源Pm的分离鉴定及荚膜脂多糖分型在2019-2020年期间,从来源于我国部分地区（湖北、河北、河南、广东、浙江等16个省市）规模化猪场患有疑似呼吸系统疾病以及无典型临床症状猪的肺脏组织样品与鼻拭子样品中共分离出158株Pm,样品平均分离率为11.5%。采用PCR方法对所分离的菌株进行荚膜分型,其中荚膜A型菌株95株（60%）,D型菌株56株（36%）,F型菌株7株（4%）。脂多糖分型鉴定出脂多糖L3型菌株45株（29%）,L6型菌株105株（66%）,未定型菌株8株（5%）。除去8株脂多糖未定型的菌株以外,其余150株Pm共包括4种荚膜脂多糖组合型,其中A:L3型菌株38株（25.3%）,A:L6型菌株50株（33.3%）,D:L6型菌株55株（36.7%）,F:L3型菌株7株（4.7%）。2.猪源Pm毒力基因分布通过PCR方法对所分离的158株Pm进行23种毒力相关基因的检测,结果显示部分毒力基因如nan H、hgb B、hsf-2、plp B、omp A、oma87、ptf A、fim A、sod A、sod C、Fur、omp H的检出率均超过了80%;而毒力基因hgb A与nan B的检出率不足40%;此外,毒力基因tox A与tbp A未被检出。进一步分析发现部分毒力基因如hsf-1、pfh A以及pm HAS在不同荚膜基因型、脂多糖基因型以及荚膜脂多糖组合型Pm菌株中的检出率存在着显著的差异。3.猪源Pm耐药性分析对上述经PCR鉴定并分型的Pm分离株以及之前由本实验室分离的共211株Pm按照美国临床实验室标准化协会（CLSI）公布的抗微生物药物敏感性执行标准（M100Ed30）进行药敏试验,结果表明所有的Pm分离株均对亚胺培南敏感;超过80%以上的Pm分离株对环丙沙星、头孢吡肟、替加环素、氨苄西林、氯霉素敏感;少数分离株对四环素和多粘菌素E敏感。通过PCR方法对所分离的158株Pm进行耐药基因检测,仅检出耐药基因tet B与flo R,检出率分别为38.3%和39.0%。4.猪巴氏杆菌病二价灭活疫苗的制备及免疫效果初步评估选取由本实验室分离并保存的A:L3型菌株HB03及D:L6型菌株HN05作为制备疫苗的种子菌株并对其开展生物学特性研究,将上述两个菌株扩大培养后经一系列操作获得制备疫苗所需菌液,并按一定比例与氢氧化铝佐剂混合制得猪巴氏杆菌病二价灭活疫苗(抗原含量为2.5×1010 CFU/m L)。以KM鼠作为动物模型通过安全性试验以及免疫接种试验对疫苗的安全性及免疫效力进行初步评估,安全性试验结果表明疫苗对小鼠的安全性良好,免疫接种试验结果表明在第二次接种疫苗后的第7天及第14天,小鼠体内产生了较高水平的抗体,且该疫苗能分别对HB03或HN05菌株攻毒提供80%以上的免疫保护率。

关键词：多杀性巴氏杆菌毒力基因耐药性二价灭活疫苗

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猪流行性腹泻病毒S2基因B细胞表位的筛选及其单克隆抗体的制备与鉴定

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畜牧与饲料科学 2022年第4期43卷 14-18页

作者：孟克白伟琴卡楚拉乌志勇苗苗格日勒图伊金霍洛旗动物疫病预防控制中心内蒙古伊金霍洛旗017200 内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018

[目的]应用生物学软件与单克隆抗体技术相结合的方法鉴定PEDV S2基因B细胞表位肽。[方法]利用CLC Sequence viewer 6.8软件及在线数据库IEDB筛选出PEDV S2基因B细胞表位,并人工合成表位肽。将表位肽与钥孔血蓝蛋白(KLH)耦联后作为抗原,... 详细信息

[目的]应用生物学软件与单克隆抗体技术相结合的方法鉴定PEDV S2基因B细胞表位肽。[方法]利用CLC Sequence viewer 6.8软件及在线数据库IEDB筛选出PEDV S2基因B细胞表位,并人工合成表位肽。将表位肽与钥孔血蓝蛋白(KLH)耦联后作为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,通过ELISA法筛选出抗体效价较高的小鼠进行1次加强免疫,3 d后取脾脏制备脾细胞悬液进行细胞融合。经HAT选择培养基培养筛选有效杂交瘤细胞,采用ELISA法筛选阳性克隆继续进行扩大培养。将部分阳性杂交瘤细胞进行小鼠腹腔注射,并收集腹水。通过ELISA方法分别检测小鼠腹水和单克隆细胞株培养上清液抗体效价,确定最高效价作为后备细胞株。[结果]筛选出B细胞表位肽序列为:MQYVYTPTYYML;免疫多肽抗原后融合前血清抗体效价达到1∶2000;BALB/c小鼠腹水及单克隆细胞株培养物上清液ELISA检测结果显示抗体效价达到1∶4000。[结论]筛选出了PEDV S2基因B细胞表位,为PEDV表位肽疫苗载体构建研究提供参考。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S2基因 B细胞表位单克隆抗体

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HSP在热应激条件下调控鸡心肌细胞损伤的功能分析

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动物医学进展 2021年第2期42卷 33-40页

作者：连锐锐李桂明孙传熙李真刘月月杨世发林树乾石有斐殷斌万仁忠山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东省农业科学院家禽研究所山东济南250023

心肌对热敏感,心脏成为热应激损伤的重要器官之一,严重时会引发猝死。热休克蛋白(HPS)是机体在遭受热应激刺激时激活的重要内源性保护机制。为了观察热应激条件下对蛋鸡心肌组织的病理性损伤,以及心肌细胞启动热休克蛋白的变化规律,选... 详细信息

心肌对热敏感,心脏成为热应激损伤的重要器官之一,严重时会引发猝死。热休克蛋白(HPS)是机体在遭受热应激刺激时激活的重要内源性保护机制。为了观察热应激条件下对蛋鸡心肌组织的病理性损伤,以及心肌细胞启动热休克蛋白的变化规律,选用40只300日龄海兰褐蛋鸡构建热应激试验动物模型,通过对血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷草转氨酶(AST)水平的检测以及病理学检测以确定热应激损伤;通过对心肌组织的Hsps的转录水平检测以确定对Hsps的激活;通过系统网络分析,筛选出调控家禽热应激细胞凋亡的相关靶标,并进行相互作用网络和蛋白共表达分析。研究表明,38℃热应激会引起蛋鸡心肌细胞颗粒变性、空泡变性和坏死,导致心肌损伤相关酶谱CK、CK-MB、LDH和AST的上调,还可以激活Cryab、Hsp60、Hsp70和Hsp90转录水平的升高。系统网络分析发现热休克蛋白家族成员CRYAA、HSP90AB1、HSP90B1、HSPA5、HSPD1、DNAJA1和DNAJC3均参与热应激条件下调控家禽细胞凋亡的进程,Hsp90AB1和Hsp90B1可以调控CDK1,Hsp90AB1和HspD1可以与CDK1共表达,Hsp90B1、DNAJC3和IGF1可以调控IL6,影响细胞周期,从而影响细胞凋亡。

关键词：热应激心肌细胞热休克蛋白病理损伤系统网络分析

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小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2019年第10期49卷 1277-1282页

作者：周岩岩李玲霞吴锦艳余树芳李娇阳刘丹冯倩孙晶晶何苗魏凡华尚佑军宁夏大学农学院宁夏银川750021 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

为开发可用于小反刍兽疫病毒(PPRV)诊断及其抗原的检测方法,参考GenBank中PPRV Nigeria75/1株N基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得目的基因后连接到载体pCzn1中,转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株,经PCR和双酶切鉴定测序后,将阳性克隆转化... 详细信息

为开发可用于小反刍兽疫病毒(PPRV)诊断及其抗原的检测方法,参考GenBank中PPRV Nigeria75/1株N基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得目的基因后连接到载体pCzn1中,转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株,经PCR和双酶切鉴定测序后,将阳性克隆转化至大肠杆菌BL21 (DE3)菌株后采用IPTG进行诱导表达。结果表明,成功地构建了含有小反刍兽疫病毒N基因的重组质粒pCzn1-N;诱导条件经过优化后N蛋白为可溶性表达,重组蛋白大小约为64 ku,能够与PPRV阳性血清较好地反应;制备的家兔多克隆抗体效价为1∶128 000,经过纯化后抗体效价为1∶64 000且具有较高的结合特异性;用间接ELISA和Western-blot对N蛋白纯化后制备的家兔多克隆抗体进行分析,发现重组N蛋白的免疫原性良好,且制备的多克隆抗体特异性良好。这表明重组的N蛋白具有较高的特异性及反应活性。

关键词：小反刍兽疫病毒 N基因原核表达

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一例犬吉氏巴贝斯虫病的诊治

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畜牧兽医杂志 2022年第1期41卷 84-86,89页

作者：王品雪杜嘉玥要慧中周璐露刘光远林青西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 家畜疫病病原生物学国家重点实验室(中国农业科学院兰州兽医研究所) 西安西北农林科大动物医院

3岁雄性贵宾犬,体重3.20 kg,免疫完全,未绝育,从未进行过体内外驱虫,院内散养。主诉最近2周发现犬的精神状态渐差,进食量逐渐减少。为了对其进行诊治,采用体格检查、血液学检查以及影像学检查的方法进行诊断,并根据诊断结果进行治疗,结... 详细信息

3岁雄性贵宾犬,体重3.20 kg,免疫完全,未绝育,从未进行过体内外驱虫,院内散养。主诉最近2周发现犬的精神状态渐差,进食量逐渐减少。为了对其进行诊治,采用体格检查、血液学检查以及影像学检查的方法进行诊断,并根据诊断结果进行治疗,结果表明,该犬感染吉氏巴贝斯虫且并发肝脏损伤,通过采取输血、驱虫等治疗措施,患犬的临床症状消失,镜检外周血虫体消失,治疗后未见复发。说明临床上可通过血液学检测对犬的吉氏巴贝斯虫感染进行确诊,且输血结合驱虫治疗可有效治疗该病。

关键词：犬吉氏巴贝斯虫巴贝斯虫病诊断治疗

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基于网络药理学探究马齿苋缓解结肠炎的作用机制

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世界中医药 2020年第24期15卷 3748-3760页

作者：张子越殷斌连锐锐张璐刘译心李真孙传熙刘月月杨世发李桂明傅剑赵增成黄中利林树乾刘远飞万仁忠山东农业大学动物科技学院泰安271018 山东省农业科学院家禽研究所新兽药研发室济南250023

目的:利用网络药理学探究马齿苋活性成分缓解结肠炎的作用机制。方法:基于TCMSP数据库获得其活性成分和对应靶标,利用STRING进行靶标间互作分析并筛选核心靶标,经KEGG富集分析得到马齿苋治疗疾病的相关信号通路。基于Drugbank数据库获... 详细信息

目的:利用网络药理学探究马齿苋活性成分缓解结肠炎的作用机制。方法:基于TCMSP数据库获得其活性成分和对应靶标,利用STRING进行靶标间互作分析并筛选核心靶标,经KEGG富集分析得到马齿苋治疗疾病的相关信号通路。基于Drugbank数据库获取结肠炎的相关疾病靶标,与马齿苋成分靶标进行映射,得到马齿苋治疗结肠炎的作用机制。结果:共筛选获得马齿苋活性成分花生四烯酸、β-谷甾醇、山柰酚、木犀草素、异甜菜素、槲皮素等10个,其对应靶标共187个,核心靶标共62个,经KEGG富集分析发现核心靶标与癌症、病毒感染、炎症性肠炎和免疫调节相关通路密切相关,并通过ABCC4、ABCG2、ACAT1、ALB、ALOX5、CYP3A4、IFNG、IKKA、MPO、NOS2、NQO1、NR1I2、PPARG、PTGS1、PTGS2、TNF、XDH起到治疗结肠炎的作用。结论:马齿苋可通过抗炎、抗氧化和调节细胞增殖与凋亡发挥多靶点、多通路缓解结肠炎的作用。

关键词：马齿苋网络药理学结肠炎作用机制

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