检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2002年第3期10卷 250-254页

作者：应琦华李祥瑞陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

根据GenBank发表的山羊(Caprahircus)IL-2基因序列,设计了一对引物。以ConA刺激的外周血淋巴细胞为材料,用RT-PCR的方法,从总RNA中扩增出山羊IL-2基因。琼脂糖电泳显示扩增片段约为500bp。分离纯化片段,克隆入表达质粒pBV220,经酶切鉴定... 详细信息

根据GenBank发表的山羊(Caprahircus)IL-2基因序列,设计了一对引物。以ConA刺激的外周血淋巴细胞为材料,用RT-PCR的方法,从总RNA中扩增出山羊IL-2基因。琼脂糖电泳显示扩增片段约为500bp。分离纯化片段,克隆入表达质粒pBV220,经酶切鉴定,测序结果显示,克隆的山羊IL-2基因与GenBank上发表的序列一致。该序列与绵羊(Ovisaries )和牛(Bastaurus )的IL-2基因序列同源性最大,在96%以上;氨基酸和抗原性比较分析认为,山羊IL-2与绵羊及牛的IL-2在这两方面有较大的同源性。

关键词：山羊IL-2基因克隆序列分析

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猪链球菌2型纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白全基因的克隆及融合表达

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农业生物技术学报 2005年第6期13卷 743-746页

作者：孙理云范红结陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

采用发表的引物对,以猪链球菌2型(Streptococcussuistype2)江苏分离株HA9801的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白基因fbps(GenBank登录号为AY565303)克隆于pMD-T18载体构建成载体pMD-T-fbps。经内切酶酶切和... 详细信息

采用发表的引物对,以猪链球菌2型(Streptococcussuistype2)江苏分离株HA9801的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白基因fbps(GenBank登录号为AY565303)克隆于pMD-T18载体构建成载体pMD-T-fbps。经内切酶酶切和测序鉴定后,将由pMD-T-fbps内切酶切下的片段定向克隆于表达载体pET-32a(+),得到重组质粒pfbps。将重组质粒pfbps转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21株,经IPTG诱导,可高水平地表达相对分子量为83kD的融合蛋白。配体印迹结合试验表明,表达的融合蛋白可与人纤连蛋白结合。

关键词： fbps基因猪链球菌2型克隆融合表达

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嗜水气单胞菌转录调控蛋白基因(ahyR)突变株的构建及特性分析

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农业生物技术学报 2006年第1期14卷 55-59页

作者：毕志香刘永杰南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

根据GenBank公布的嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila,Ah)转录调控蛋白基因ahyR序列设计1对特异性引物,利用PCR方法扩增AhJ-1株ahyR的部分片段。PCR产物克隆入pMD18-T载体,经序列测定后定向连接入含有卡那霉素抗性(Kanr)基因的自杀性质... 详细信息

根据GenBank公布的嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila,Ah)转录调控蛋白基因ahyR序列设计1对特异性引物,利用PCR方法扩增AhJ-1株ahyR的部分片段。PCR产物克隆入pMD18-T载体,经序列测定后定向连接入含有卡那霉素抗性(Kanr)基因的自杀性质粒pJP5603中,构建重组质粒pJP-ahyR。将鉴定为阳性的重组质粒转化嗜水气单胞菌J-1株感受态细胞,获得1突变株细菌。PCR方法鉴定该突变株为J-1株ahyR基因同源突变株,命名为J-1△ahyR。与J-1株相比,突变株的外膜蛋白图谱和部分生化特性发生改变;胞外蛋白酶、淀粉酶、DNA酶、溶血素等几种主要毒力因子同时丧失;致病力明显降低,对小白鼠的半数致死量大于1.0×108CFU(colonyformingunits)。该研究为ahyR基因功能的探讨及嗜水气单胞菌弱毒疫苗的研制奠定了基础。

关键词：嗜水气单胞菌 ahyR基因同源重组突变株构建

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表达猪源链球菌类M-MRP融合蛋白基因工程菌的构建及免疫保护试验

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农业生物技术学报 2006年第1期14卷 22-26页

作者：范红结陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

利用PCR技术,分别扩增马链球菌兽疫亚种(***)ATCC35246株类Mszp基因583￣1063位碱基和猪链球菌(***)2型HA9801株mrp基因298￣827位碱基的片段。通过在类M基因片段的3!端和mrp基因片段的5!端引物添加共同的SacⅠ酶切位点,利用T4连接酶连... 详细信息

利用PCR技术,分别扩增马链球菌兽疫亚种(***)ATCC35246株类Mszp基因583￣1063位碱基和猪链球菌(***)2型HA9801株mrp基因298￣827位碱基的片段。通过在类M基因片段的3!端和mrp基因片段的5!端引物添加共同的SacⅠ酶切位点,利用T4连接酶连接,克隆至pET-32a(+)载体。将重组质粒转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21,经IPTG诱导,可获得分子量约为60kD的融合蛋白。通过MRP和类M蛋白的多克隆抗体进行ELISA反应和免疫印迹分析表明:表达的融合蛋白同时具有类M蛋白和MRP的抗原性。用组氨酸亲和层析柱纯化的重组融合蛋白,和链球菌的全菌二联灭活疫苗分别免疫两组仔猪,重组蛋白的免疫保护率达60"。

关键词：类M基因 mrp基因基因融合表达

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对虾白斑综合征病毒基因组片段的测序、亚克隆与表达

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农业生物技术学报 2002年第4期10卷 356-358页

作者：朱建中陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京 210095 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

取对虾(Penaeid shrimp)白斑综合征病毒(WSSV)基因组DNA随机文库中1个约8 kb的克隆片段进行测序。DNA序列用DNA star软件进行分析,共发现43个100bp以上阅读框(ORF),其中1条链31个,互补链12个。用BLAST软件将43个ORF及其推导的氨基酸序... 详细信息

取对虾(Penaeid shrimp)白斑综合征病毒(WSSV)基因组DNA随机文库中1个约8 kb的克隆片段进行测序。DNA序列用DNA star软件进行分析,共发现43个100bp以上阅读框(ORF),其中1条链31个,互补链12个。用BLAST软件将43个ORF及其推导的氨基酸序列分别与GenBank中核酸蛋白数据库序列进行相似性比较,结果无显著同源性。从白斑综合征病毒基因组的测序片段中,发现一个810bp阅读框,其编码氨基酸序列与海栖热袍菌(Thermotoga maritima)外膜蛋白具有24％的同源性,设计一对引物,扩增出该阅读框,用T载体克隆并按正确阅读框连接到***表达载体pGEX-6p-1上。重组菌经IPTG诱导后,菌体SDS-PAGE显示有1条大小为56kD的融合表达蛋白产生。

关键词：白斑综合征病毒对虾序列测定同源性克隆与表达

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一种新的猪α-干扰素基因克隆及其在大肠杆菌中表达

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农业生物技术学报 2004年第3期12卷 278-282页

作者：曹瑞兵张素芳蔡梅红王艳陈德胜陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

提取经新城疫病毒诱导培养的猪外周血白细胞总RNA,RT-PCR扩增出猪α-干扰素基因并克隆到T载体。测序结果表明,扩增片段含有信号肽的猪α-干扰素完整基因,与GenBank上登录的猪α1-干扰素基因同源性为97.2%。亚克隆猪α-干扰素成熟蛋白编... 详细信息

提取经新城疫病毒诱导培养的猪外周血白细胞总RNA,RT-PCR扩增出猪α-干扰素基因并克隆到T载体。测序结果表明,扩增片段含有信号肽的猪α-干扰素完整基因,与GenBank上登录的猪α1-干扰素基因同源性为97.2%。亚克隆猪α-干扰素成熟蛋白编码基因并对其5’段前1个稀有密码子进行大肠杆菌(Escherchiacoli)偏嗜性改造。构建了猪α-干扰素原核单纯表达载体pCIFNA,实现了猪α-干扰素在大肠杆菌中的表达,表达产物约占菌体总蛋白的15.6%。表达产物以包涵体形式存在,用含6mol/L盐酸胍的变性液溶解及含GSH-GSSG复性液复性处理,复性后的表达产物经凝胶层析纯化后,细胞病变抑制法测定结果表明,重组猪α-干扰素具有较高抗病毒活性,约为1.66×106U/mg。

关键词：猪α-干扰素基因克隆大肠杆菌表达

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猪繁殖与呼吸综合症病毒ORF5基因的融合表达

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农业生物技术学报 2006年第3期14卷 319-322页

作者：陈勇军苏鑫铭高晓飞郑其升于春梅曹瑞兵周斌陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)ORF5基因的核苷酸序列设计3对特异性引物,从重组质粒pMD-ORF5中扩增去除ORF5基因中包括全部信号肽在内的N端跨膜区(28residues)和中部跨膜区(60residues)。改造后的ORF5基因分别命名为ORF5-1和ORF5-2。将2个基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-ORF5-1和pET-ORF5-2,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达和SDS-PAGE电泳分析,ORF5-1和ORF5-2基因获得融合表达,表达量分别为12.2%和39%,证明删除双跨膜区能明显提高ORF5基因的表达量。经Westernblot分析,融合蛋白具有一定的免疫学活性,表明摘除跨膜区对该蛋白的抗原性影响不大。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 GP5蛋白 ORF5基因原核表达

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嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的纯化及特性分析

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中国兽医学报 2006年第1期26卷 54-56页

作者：刘永杰陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为阐明嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的性质及其在致病过程中的作用，试验以我国分离的嗜水气单胞菌J-1株为研究对象．纯化了其弹性蛋白酶．并对该酶进行热稳定性、蛋白酶抑制剂抑制作用、金属离子影响和致病性等特性分析。结果表明．嗜水气... 详细信息

为阐明嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的性质及其在致病过程中的作用，试验以我国分离的嗜水气单胞菌J-1株为研究对象．纯化了其弹性蛋白酶．并对该酶进行热稳定性、蛋白酶抑制剂抑制作用、金属离子影响和致病性等特性分析。结果表明．嗜水气单胞菌J-1株的培养上清经35％～60％硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析，可获得纯化的弹性蛋白酶．SDS-PAGE显示单条带．相对分子质量约38000。该酶对热稳定，EDTA可抑制其活性，PMSF对其无影响，金属离子铜、锌、钴等抑制其活性。说明此酶属于热稳定金属蛋白酶。腹腔注射纯化的弹性蛋白酶能致死小鼠．其对小鼠的LD50为6．4μg（0．2mL）．表明该酶是一种直接致病因子。

关键词：嗜水气单胞菌弹性蛋白酶纯化特性

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表达MDVgB基因的重组鸡痘病毒的免疫效果研究

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南京农业大学学报 2002年第4期25卷 77-80页

作者：丁巧玲陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

将马立克氏病病毒 (MDV)gB基因插入鸡痘病毒 (FPV)中 ,构建了含有MDVgB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV)。用rFPV、HVT冻干苗、rFPV +HVT疫苗分别免疫 1日龄AA肉用雏鸡 ,于 8日龄攻毒后观察疫苗免疫效果。实验结果表明 ,HVT、rFPV、HVT +rFPV... 详细信息

将马立克氏病病毒 (MDV)gB基因插入鸡痘病毒 (FPV)中 ,构建了含有MDVgB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV)。用rFPV、HVT冻干苗、rFPV +HVT疫苗分别免疫 1日龄AA肉用雏鸡 ,于 8日龄攻毒后观察疫苗免疫效果。实验结果表明 ,HVT、rFPV、HVT +rFPV疫苗免疫组比攻毒对照组病毒血症持续时间短 ;上述 3种疫苗免疫后用京 1株MDV(vMDV)攻毒 ,脾脏T淋巴细胞增殖反应处于较高水平 ,而攻毒对照组脾脏T淋巴细胞增殖反应减弱 ,两者差异显著(P <0 0 5 ) ;用HVT +rFPV二价疫苗免疫雏鸡 ,其抵抗vMDV攻击的免疫保护力高于HVT和rFPV单价苗 ,HVT +rFPV、rFPV、HVT免疫保护指数分别为 81 7% ,6 3 4 %和 6 4 1%。以上结果表明 ,表达MDVgB基因的重组鸡痘病毒疫苗在一定程度上能保护鸡体抵抗vMDV的攻击 ,并且HVT和rFPV具有免疫协同作用。

关键词： MDV gB基因重组鸡痘病毒免疫效果鸡马立克氏病病毒

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迟缓爱德华菌(Edwardasiella tarda)对小鼠和剑尾鱼的免疫保护试验

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中国兽医学报 2002年第3期22卷 251-253页

作者：熊清明陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为了评价迟缓爱德华菌 (Edwardasiella tarda)的免疫保护效果 ,用致病性 *** JEL4的全菌灭活物 (FKC)和胞外产物 (ECP)分别 2次免疫小鼠 15 0只和 1次免疫剑尾鱼 30 0尾 ,7周后用同源菌株和异源菌株进行攻击。结果显示 ,除 ECP组对某一... 详细信息

为了评价迟缓爱德华菌 (Edwardasiella tarda)的免疫保护效果 ,用致病性 *** JEL4的全菌灭活物 (FKC)和胞外产物 (ECP)分别 2次免疫小鼠 15 0只和 1次免疫剑尾鱼 30 0尾 ,7周后用同源菌株和异源菌株进行攻击。结果显示 ,除 ECP组对某一异源菌株为 4/ 5保护外 ,免疫小鼠 FKC组和 ECP组全部获得保护 (5 / 5 )。在免疫的剑尾鱼中 ,FKC和 ECP组对同源菌株保护率分别为 6 0 %和 10 0 % ;对异源菌株的攻击 ,均不能全部保护 ,但

关键词：爱德华菌免疫保护小鼠剑尾鱼保护迟缓迟验

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