检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2008年第1期39卷 66-71页

作者：王先炜姜平韦显凯李广明李军星董信田蒋文明南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

猪圆环病毒2型(PCv2)是引起PMWS的必需病原,与其他病原混合感染或受到外界刺激时表现PMWS临床症状.本试验将16头商品化断奶仔猪(32日龄)随机分为4组(每组4头),即对照组、钥匙孔血蓝蛋白刺激组、PCV2攻毒组和PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCv2)是引起PMWS的必需病原,与其他病原混合感染或受到外界刺激时表现PMWS临床症状.本试验将16头商品化断奶仔猪(32日龄)随机分为4组(每组4头),即对照组、钥匙孔血蓝蛋白刺激组、PCV2攻毒组和PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺激组,用上海某猪场分离株PCV2-SH、钥匙孔血蓝蛋白(KLH)反复刺激断奶仔猪以复制PMWS.其中对照组、钥匙孔血蓝蛋白刺激组未出现症状;PCV2攻毒组症状较轻,出现增重缓慢,伴有短暂的体温升高;而PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺激组出现明显的临床症状,2头猪在攻毒后第11天濒临死亡,其中1头在第12天死亡,攻毒猪宰杀后脏器出现明显的病理变化.PCV2攻毒组和PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺激组于攻毒后第4天出现病毒血症,宰杀后肺脏、淋巴结均检测到PCV2的DNA.以上结果说明,PCV2-SH感染结合免疫刺激可以引起商品化仔猪发生PMWS,为PCV2致病机理和免疫学研究提供了动物发病模型.

关键词： PCV2 免疫刺激断奶仔猪仔猪多系统衰竭综合征复制

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猪圆环病毒2型灭活疫苗的制备与免疫效力研究

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畜牧兽医学报 2008年第5期39卷 639-644页

作者：董信田李玉峰姜平王先炜冯志新俞俐莉南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

猪圆环病毒2型(PCV2)经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和二免后第14天进行ELISA抗体检测。同时为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,笔者进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果如下:①PCV2能被0.2%甲醛完全灭活,灭活时间为16 h。②PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答,并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。③猪体免疫效力试验表明,两种油苗均能产生较高水平的ELISA抗体。攻毒后,攻毒对照猪的体温高于免疫猪,空白对照猪体温正常。免疫猪及空白对照猪平均体重均升高,而攻毒对照猪平均体重有所降低,且两个免疫组和空白对照组之间平均日增重差异显著(P<0.05)。病毒血症检测及病毒DNA在组织中的分布检测表明两油苗均能够有效降低猪体的带毒。以上结果表明,PCV2灭活疫苗免疫小鼠和猪体后均能诱导机体产生免疫应答,并能够在一定程度上抵抗PCV2对猪体的感染。

关键词：猪圆环病毒2型油佐剂氢氧化铝佐剂灭活苗

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从伪狂犬病病毒中删除Cre/LoxP介导的报告基因

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病毒学报 2006年第6期22卷 456-461页

作者：苏鑫铭于春梅王敏秀陈勇军曹瑞兵周斌陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

根据pEGFP-C1序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出两端各含一个同向LoxP位点的GFP表达盒,克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-G-LoxP。通过经典同源重组方法,得到表达GFP的TK基因缺失伪狂犬病毒重组毒株S03109。该重组病毒在转染了pOG231... 详细信息

根据pEGFP-C1序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出两端各含一个同向LoxP位点的GFP表达盒,克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-G-LoxP。通过经典同源重组方法,得到表达GFP的TK基因缺失伪狂犬病毒重组毒株S03109。该重组病毒在转染了pOG231(表达Cre重组酶)的293T细胞上连续传代,筛选得到重组病毒株S0419。荧光显微镜观察、Western blot及PCR检测结果表明,S03109感染细胞后持续表达GFP,而S0419不表达GFP。PCR证实S0419为含单个LoxP位点的TK基因缺失病毒,并且在细胞培养上遗传稳定,测序结果(GenBank登录号AY822465)表明,在Cre重组酶的作用下,两个同向LoxP序列之间的GFP表达盒被正确除去。对BALB/c小鼠的半数致死量(LD50)及免疫保护实验结果表明,S03109和S0419对BALB/c小鼠的LD50值均大于3×105PFU,免疫BALB/c小鼠,攻毒后平均存活率分别为67.5%与70%。以上结果表明,利用Cre/LoxP位点特异性重组系统,成功去除了插入重组伪狂犬病病毒基因组中的GFP报告基因。

关键词：疱疹病毒科伪狂犬病病毒 TK基因 Cre重组酶 LoxP序列 GFP

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一种新的螯虾丝氨酸蛋白酶抑制物基因的克隆表达及其活性分析

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动物学报 2005年第6期51卷 1109-1114页

作者：康桦华陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

根据本课题组从克氏原螯虾中新发现的丝氨酸蛋白酶抑制物的基因序列(GenBank登录号CD644775)设计一对引物,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从螯虾血淋巴细胞中扩增出丝氨酸蛋白酶抑制物基因PCI188,将其连入原核表达载体pET-32a... 详细信息

根据本课题组从克氏原螯虾中新发现的丝氨酸蛋白酶抑制物的基因序列(GenBank登录号CD644775)设计一对引物,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从螯虾血淋巴细胞中扩增出丝氨酸蛋白酶抑制物基因PCI188,将其连入原核表达载体pET-32a,转化至大肠杆菌Rosetta株和BL21株中进行蛋白表达,结果该蛋白只在前者表达。表达产物用免疫转印检测,出现50kD的特异性条带,与螯虾PCI188基因编码的蛋白大小相符。将融合蛋白纯化后免疫新西兰兔,用免疫血清与螯虾血淋巴作用后测定酚氧化酶活力,结果显示,酚氧化酶活力有所升高,从而首次证实螯虾PCI188编码的蛋白对丝氨酸蛋白酶有抑制作用。

关键词：螯虾丝氨酸蛋白酶抑制物克隆表达免疫酚氧化酶

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绿色荧光蛋白标记的嗜水气单胞菌在温暖水体的存活及稳定性

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水生生物学报 2001年第3期25卷 251-256页

作者：张庆华陈营陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

用绿色荧光蛋白基因 (GFP)标记嗜水气单胞菌 4332株 (Ah4332 GFP) ,检测其在温暖水体中的存活及稳定性。在灭菌自然塘水中 ,Ah4332 GFP存活 47d之久 ,该菌浓度随时间而变化 ,呈现两个峰值 ;在非灭菌自然塘水中 ,Ah4332 GFP存活 1 8d ,... 详细信息

用绿色荧光蛋白基因 (GFP)标记嗜水气单胞菌 4332株 (Ah4332 GFP) ,检测其在温暖水体中的存活及稳定性。在灭菌自然塘水中 ,Ah4332 GFP存活 47d之久 ,该菌浓度随时间而变化 ,呈现两个峰值 ;在非灭菌自然塘水中 ,Ah4332 GFP存活 1 8d ,该菌浓度均随时间延长呈下降趋势。表明Ah4332 GFP 和天然细菌之间的相互作用影响其稳定性。用M 9培养基检测Ah4332 GFP质粒的稳定性 ,结果显示在传代培养 40、70代后 ,质粒稳定率分别保持在 47 3%和2 0 5%。可见 pGFP是一种相对稳定的质粒 ,Ah4332 GFP可用于微生物生态的研究。

关键词：绿色荧光蛋白嗜水气单胞菌稳定性温暖水体存活 GFP标记

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猪α干扰素对猪圆环病毒2型亚单位疫苗免疫效果的影响

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畜牧兽医学报 2009年第6期40卷 867-872页

作者：曹瑞兵周国栋陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

为了评估酵母表达的PCV2 Cap蛋白在猪体的免疫特性以及猪α干扰素对其的免疫佐剂效果,将酵母表达的PCV2 Cap蛋白配比适量的铝胶或重组猪α干扰素制成亚单位疫苗。30日龄仔猪分别接种铝胶佐剂亚单位疫苗和猪α干扰素佐剂亚单位疫苗,同时... 详细信息

为了评估酵母表达的PCV2 Cap蛋白在猪体的免疫特性以及猪α干扰素对其的免疫佐剂效果,将酵母表达的PCV2 Cap蛋白配比适量的铝胶或重组猪α干扰素制成亚单位疫苗。30日龄仔猪分别接种铝胶佐剂亚单位疫苗和猪α干扰素佐剂亚单位疫苗,同时设攻毒对照与空白对照,首免后21 d加强免疫,二免后14 d用PCV2 JS株攻毒。铝胶佐剂亚单位疫苗免疫猪体后产生了PCV2特异性中和抗体。猪α干扰素佐剂亚单位疫苗组仔猪免疫后产生的ELISA抗体和中和抗体都显著高于铝胶亚单位疫苗组仔猪。攻毒对照组的4只仔猪攻毒后全都产生了病毒血症,并有较长时间的发热;铝胶亚单位疫苗组4头仔猪中只有1头仔猪产生病毒血症,添加猪α干扰素亚单位疫苗组的仔猪攻毒后都没有产生病毒血症。综合分析试验猪的病毒感染、临床表现和生产性能等情况表明Cap蛋白亚单位疫苗具有免疫保护效果,猪α干扰素可显著增强Cap蛋白亚单位疫苗接种仔猪的体液免疫反应,提高PCV-2 Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护效果。

关键词：猪圆环病毒2型重组Cap蛋白免疫特性猪α干扰素免疫佐剂

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传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白基因及其表达产物免疫学试验

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南京农业大学学报 1998年第2期21卷 100-103页

作者：姜平陈溥言蔡宝祥黄兵南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２、ＶＰ３重组质粒ＤＮＡ及其大肠杆菌表达产物全菌裂解液油乳剂苗肌肉注射１４日龄仔鸡，免疫后１４和２１ｄ测定血清ＥＬＩＳＡ抗体效价，并于免疫后２１ｄ用ＩＢＤＶ南京野毒株攻击。结果显示... 详细信息

用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２、ＶＰ３重组质粒ＤＮＡ及其大肠杆菌表达产物全菌裂解液油乳剂苗肌肉注射１４日龄仔鸡，免疫后１４和２１ｄ测定血清ＥＬＩＳＡ抗体效价，并于免疫后２１ｄ用ＩＢＤＶ南京野毒株攻击。结果显示：（１）ＶＰ２基因重组质粒ＤＮＡ除可诱导产生较高的ＥＬＩＳＡ抗体外，还可明显降低仔鸡ＩＢＤＶ攻击所引起的急性发病率和死亡率；（２）ＶＰ３－ＧＳＴ融合蛋白表达产物全菌裂解液可较早地诱导产生ＥＬＩＳＡ抗体，但对ＩＢＤＶ野毒株攻击只提供部分保护；（３）ＶＰ２和ＶＰ３表达产物无明显协同作用。

关键词：结构蛋白基因表达产物免疫学试验鸡病 IBD

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鸡源和鸭源减蛋综合征病毒DNA酶切图谱分析

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南京农业大学学报 1999年第2期22卷 71-75页

作者：周锦萍李刚郑明球蔡宝祥南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

采用差速离心法纯化鸡源和鸭源减蛋综合征（ＥＤＳ）病毒，酚－氯仿抽提法提取两种毒株的核酸。选取ＥｃｏＲⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ和ＨｉｎｄⅢ７种限制性内切酶，对两种毒株进行酶切图谱比较。结果... 详细信息

采用差速离心法纯化鸡源和鸭源减蛋综合征（ＥＤＳ）病毒，酚－氯仿抽提法提取两种毒株的核酸。选取ＥｃｏＲⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ和ＨｉｎｄⅢ７种限制性内切酶，对两种毒株进行酶切图谱比较。结果显示，鸡源株酶切片段数分别为４，４，６，８，５，９，１０，共计４６个片段；鸭源株产生的酶切片段数分别为４，４，５，７，９，１０，８，共计４７个片段。两者的酶切结果除ＥｃｏＲⅠ完全相同外，其余均存在不同程度的差异。由此表明，鸡源和鸭源ＥＤＳ病毒虽然血清型相同，但在基因水平上存在较大的差异，属不同基因型。

关键词： EDS病毒病毒核酸酶切图谱 DNA 鸭鸡

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猪繁殖和呼吸综合征病毒基质膜蛋白和核衣壳蛋白基因的克隆与鉴定

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中国兽医学报 1999年第1期19卷 3-6页

作者：蔡家利姜平蔡宝祥马志勇南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）的基质膜（Ｍ）蛋白和核衣壳（Ｎ）蛋白是２种重要的结构蛋白。本试验根据ＰＲＲＳＶ美洲毒株的基因序列，设计了能够扩增Ｍ和Ｎ蛋白基因的１对引物，并在２个引物的两端分别加入ＥｃｏＲＩ和Ｂａ... 详细信息

猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）的基质膜（Ｍ）蛋白和核衣壳（Ｎ）蛋白是２种重要的结构蛋白。本试验根据ＰＲＲＳＶ美洲毒株的基因序列，设计了能够扩增Ｍ和Ｎ蛋白基因的１对引物，并在２个引物的两端分别加入ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶切位点，经ＲＴ－ＰＣＲ技术获得了一约９５０ｂｐ的目的基因片段，并将此基因克隆于ＰＢＶ２２０载体，构建了ＭＮ蛋白基因重组质粒ＰＢＶＭＮ，进一步由重组质粒回收ＭＮ基因片段亚克隆于ｐＳＫ＋（ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ＋）测序载体，构建了重组质粒ＰＢＳＭＮ，经部分序列分析鉴定，重组质粒含ＭＮ蛋白基因。此基因的克隆为进一步研究该病毒ＭＮ蛋白免疫学特性及其分子基础和基因诊断技术奠定了基础。

关键词：猪基因克隆 MN蛋白 PRRSV 病毒核衣壳膜蛋白

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鲍氏不动杆菌鳜鱼分离株具有4型菌毛

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南京农业大学学报 1997年第4期20卷 114-116页

作者：汤雅殊陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

鲍氏不动杆菌鳜鱼分离株具有４型菌毛汤雅殊陆承平（南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京２１００９５）ＡＮＡＣＩＮＥＴＯＢＡＣＴＥＲＢＡＵＭＡＮＮＩＩＳＴＲＡＩＮＩＳＯＬＡＴＥＤＦＲＯＭＭＡＮＤＡＲＩ... 详细信息

鲍氏不动杆菌鳜鱼分离株具有４型菌毛汤雅殊陆承平（南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京２１００９５）ＡＮＡＣＩＮＥＴＯＢＡＣＴＥＲＢＡＵＭＡＮＮＩＩＳＴＲＡＩＮＩＳＯＬＡＴＥＤＦＲＯＭＭＡＮＤＡＲＩＮＦＩＳＨＰＯＳＳＥＳＳＥＳＴＹＰ...

关键词：鲍氏不动杆菌鳜鱼分离株菌毛

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