检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2006年第10期26卷 36-40页

作者：王敏秀苏鑫铭于春梅曹瑞兵陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

根据GenBank已发表的pEGFP-C1序列,设计并合成两对引物,PCR扩增出两端各含一loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP。克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-GFP-loxP。基于同源重组原理,pSKLR-GFP-loxP与PRVSH株基因组DNA共转染293T细胞,在BrdU的筛选压力下,利用蚀斑法在TK-143细胞上筛选出表达GFP的TK基因缺失的重组毒株rPRV1。将表达Cre酶的质粒载体pPOG231与rPRV1基因组DNA共转染293T细胞,在Cre酶的作用下去除GFP表达盒以及一个loxP位点,筛选得到含单个loxP位点的重组病毒株rPRV2。PCR扩增证实所获得的重组病毒TK缺失270bp,只有一个34bp的loxP位点,并且能在RK-13细胞上稳定传代。LD50试验表明rPrV2的毒力下降。

关键词：伪狂犬病痛毒 TK基因 Cre loxP GFP重组病毒

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鲍氏不动杆菌MF1株的粘附特性

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南京农业大学学报 1999年第3期22卷 65-68页

作者：顾天钊陆承平陈怀青南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

取从患病鳜鱼体内分离到的鲍氏不动杆菌ＭＦ１株和３株ＡＴＣＣ不动杆菌参考株做血凝试验（ＨＡ），１３种不同动物的红细胞对４株不动杆菌的血凝特性分析结果表明，鲍氏不动杆菌（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｂａｕｍａｎ... 详细信息

取从患病鳜鱼体内分离到的鲍氏不动杆菌ＭＦ１株和３株ＡＴＣＣ不动杆菌参考株做血凝试验（ＨＡ），１３种不同动物的红细胞对４株不动杆菌的血凝特性分析结果表明，鲍氏不动杆菌（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｂａｕｍａｎｎｉｉ）ＭＦ１株能凝集人Ｏ型血以及鸡、鼠、绵羊、鲢、黄鳝等５种动物的红细胞，不凝集鳜、罗非鱼、鲫、团头舫、鲤、欧洲鳗、鳙的红细胞，且该种血凝不能被甘露糖抑制；其它３株ＡＴＣＣ参考菌株对１３种红细胞均不能发生凝集。４株不动杆菌的粘附实验表明，ＭＦ１株可以粘附ＨＥｐ２细胞，每细胞粘附菌在２０个以上，菌体粘附于细胞四周；３株ＡＴＣＣ不动杆菌参考株对ＨＥｐ２细胞不具粘附特性。以上４株不动杆菌对ＥＰＣ细胞（鲤鱼乳头状上皮瘤细胞系）均无粘附性。

关键词：鲍氏不动杆菌血凝性细胞粘附鱼类

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嗜水气单胞菌菌种的限定代次及保存条件研究

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南京农业大学学报 2000年第4期23卷 89-92页

作者：范红结陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

将嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila ,Ah)J 1菌株第 5代菌种通过鲫鱼体内复壮后 ,制备基础种子。将基础种子在普通营养琼脂培养基上连续传至 10代 ,分别测第 1代和第 10代的培养特性、免疫原性以及其毒力 ;同时 ,对Ah菌种的保存条件进... 详细信息

将嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila ,Ah)J 1菌株第 5代菌种通过鲫鱼体内复壮后 ,制备基础种子。将基础种子在普通营养琼脂培养基上连续传至 10代 ,分别测第 1代和第 10代的培养特性、免疫原性以及其毒力 ;同时 ,对Ah菌种的保存条件进行了优化。结果嗜水气单胞菌菌种在 1～ 10代之内 ,其培养特性、免疫原性以及毒力完全相同 ,表明嗜水气单胞菌基础种子的使用限定代次至少可达 10代。Ah菌种以 15 %甘油肉汤、 - 2 0℃保存为佳 ,保存期可达两年。

关键词：嗜水气单胞菌保存期限定代次菌种保存

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检测猪链球菌2型毒力相关蛋白的ELISA法的建立

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南京农业大学学报 2001年第2期24卷 94-97页

作者：欧瑜陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

提纯猪链球菌 2型分离株HA980 1的毒力相关蛋白溶菌酶释放蛋白 (MRP)和胞外因子 (EF) ,制备其抗体。用此抗体建立了Dot ELISA和间接ELISA检测法。分别以菌株ATCC35 2 46和HA980 1为阴性与阳性对照 ,检测 17株猪源链球菌和 1株猪链球菌 ... 详细信息

提纯猪链球菌 2型分离株HA980 1的毒力相关蛋白溶菌酶释放蛋白 (MRP)和胞外因子 (EF) ,制备其抗体。用此抗体建立了Dot ELISA和间接ELISA检测法。分别以菌株ATCC35 2 46和HA980 1为阴性与阳性对照 ,检测 17株猪源链球菌和 1株猪链球菌 2型人分离株。结果显示 ,两种ELISA的检测结果一致 ,MRP和EF的阳性率均为 61% (11/18)。

关键词：猪链球菌溶菌酶释放蛋白胞外因子酶联免疫吸附测定

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PRRSV M蛋白细胞系的培育及其在细胞毒性T淋巴细胞检测方法中的应用

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免疫学杂志 2007年第2期23卷 222-224,228页

作者：蒋文明姜平李玉峰南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

目的探讨PRRSV M基因在哺乳动物细胞NIH/3T3细胞中的表达,建立一种非放射性、简便易行的检测特异性细胞毒T淋巴细胞的方法。方法应用RT-PCR扩增得到M基因并克隆入真核表达载体pcDNA3,构建成重组表达载体pcD-NA3-M;将重组质粒转染至NIH/... 详细信息

目的探讨PRRSV M基因在哺乳动物细胞NIH/3T3细胞中的表达,建立一种非放射性、简便易行的检测特异性细胞毒T淋巴细胞的方法。方法应用RT-PCR扩增得到M基因并克隆入真核表达载体pcDNA3,构建成重组表达载体pcD-NA3-M;将重组质粒转染至NIH/3T3细胞,G418筛选克隆;IFA检测M蛋白在转基因NIH/3T3细胞中的表达。用表达M蛋白的重组腺病毒rAd-M免疫小鼠,用表达M蛋白的NIH/3T3细胞和乳酸脱氢酶法检测PRRSV特异性细胞毒T淋巴细胞的杀伤效应。结果获得有G418抗性的NIH/3T3/M细胞克隆;IFA检测到有PRRSV M蛋白表达。重组腺病毒rAd-M免疫组可以诱发CTL应答,并明显高于wtAd和PBS对照组。结论培育成功一株能表达PRRSV M蛋白的细胞株NIH/3T3/M,可作为PRRSV CTL检测方法中的靶细胞,证明PRRSV M基因能够诱发特异性的细胞免疫。

关键词： PRRSV M 真核表达 CTL 细胞免疫

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猪链球菌2型溶血毒素的产生条件及其特性分析

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南京农业大学学报 2000年第3期23卷 71-75页

作者：陈国强姚火春陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1产生一种溶血毒素 ,培养条件影响其产量。最佳培养条件为Todd Hewitt肉汤(pH 7 5 )中接种 V(种子液 )∶V(肉汤 ) =1∶10 0的种子液 ,37℃静置培养 12h。培养基中的胰蛋白胨对该溶血素的产生起决定性作用... 详细信息

猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1产生一种溶血毒素 ,培养条件影响其产量。最佳培养条件为Todd Hewitt肉汤(pH 7 5 )中接种 V(种子液 )∶V(肉汤 ) =1∶10 0的种子液 ,37℃静置培养 12h。培养基中的胰蛋白胨对该溶血素的产生起决定性作用。该溶血素可被还原剂活化 ,被氧化剂和胆固醇及蛋白酶K抑制 ,亦被抗链球菌溶血素O阳性血清和抗猪链球菌 2型全菌阳性血清抑制。该溶血素在 - 2 0℃较稳定 ,在 4,2 5和 37℃下均易失活 ,但在还原剂作用下可恢复活性。猪红细胞对其最敏感 ,豚鼠、家兔、人、绵羊、牛、鸡及鲫等红细胞次之。

关键词：猪链球菌溶血素培养条件特性分析

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中华绒螯蟹颤抖病的人工复制试验

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南京农业大学学报 2000年第1期23卷 74-76页

作者：孙学强郭爱珍陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

用在江苏采集的发生“颤抖病”的中华绒螯蟹 (BY0 )组织匀浆 ,经除菌处理 ,人工接种健康绒螯蟹 ,约 10d发病 ,出现典型症状 ,继而死亡。将人工复制发病的绒螯蟹 (BY1)除菌后 ,接种健康绒螯蟹 ,同样使其发病并死亡(BY2 )。电镜观察BY0、... 详细信息

用在江苏采集的发生“颤抖病”的中华绒螯蟹 (BY0 )组织匀浆 ,经除菌处理 ,人工接种健康绒螯蟹 ,约 10d发病 ,出现典型症状 ,继而死亡。将人工复制发病的绒螯蟹 (BY1)除菌后 ,接种健康绒螯蟹 ,同样使其发病并死亡(BY2 )。电镜观察BY0、BY1、BY2的超薄切片 ,其神经组织和肝胰脏等的细胞质中发现圆形病毒颗粒 ,大小约 5 5～ 6 5nm ,具有外膜样结构。因此 ,可以认为中华绒螯蟹颤抖病的病原为病毒。

关键词：中华绒螯蟹颤抖病人工复制病毒

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嗜水气单胞菌S蛋白的生化特性

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南京农业大学学报 1999年第4期22卷 69-72页

作者：许冬青陆承平陈怀青南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

致病性嗜水气单胞菌(Aerom onashydrophila, Ah) J-1 株具有S层结构。用甘氨酸缓冲液处理AhJ-1 株菌体细胞,离心, 上清即为粗提的S蛋白。用自制兔抗AhJ-1 株S蛋白抗体建立间接ELISA法, 检测结果显示, 20～30 h S蛋白表达量较高。粗提的... 详细信息

致病性嗜水气单胞菌(Aerom onashydrophila, Ah) J-1 株具有S层结构。用甘氨酸缓冲液处理AhJ-1 株菌体细胞,离心, 上清即为粗提的S蛋白。用自制兔抗AhJ-1 株S蛋白抗体建立间接ELISA法, 检测结果显示, 20～30 h S蛋白表达量较高。粗提的S蛋白经离心、Sephadex G100 凝胶层析获纯化的S蛋白。经SDS-PAGE电泳分析为单一多肽, 相对分子质量51 500。等电聚焦分析为单一条带, 等电点 (pI) 为5.01。氨基酸组分分析表明, S蛋白由天门冬氨酸等16种氨基酸组成, 其中疏水性氨基酸占42.1% , 不含半胱氨酸。N端序列分析结果为ADFQLNEKSA。

关键词：嗜水气单胞菌 S蛋白 N端测序生化特性

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细菌亚单位疫苗免疫小鼠的细胞免疫指标检测

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南京农业大学学报 1999年第4期22卷 73-76页

作者：秦磊陆承平陈怀青南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

将嗜水气单胞菌的胞外毒素(HEC) 和胞外蛋白酶(ECPase) 与迟缓爱德华氏菌脂多糖(LPS)、脱毒多糖(PS) 偶联, 制成3 种亚单位偶联疫苗 (HEC-PS、HEC-LPS、ECPase-PS), 分别免疫小鼠。另设这两种细菌的全菌灭活苗免疫及注射生理盐水对照组,... 详细信息

将嗜水气单胞菌的胞外毒素(HEC) 和胞外蛋白酶(ECPase) 与迟缓爱德华氏菌脂多糖(LPS)、脱毒多糖(PS) 偶联, 制成3 种亚单位偶联疫苗 (HEC-PS、HEC-LPS、ECPase-PS), 分别免疫小鼠。另设这两种细菌的全菌灭活苗免疫及注射生理盐水对照组, 每组8 只。在第2 次免疫后第7 天用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT), 检测脾淋巴细胞转化率与腹腔巨噬细胞吞噬活性, 并检测各组小鼠的全菌凝集抗体。结果表明, 亚单位疫苗的这两项细胞免疫指标明显高于对照组,但略低于全菌灭活苗免疫组, 而细胞免疫指标与抗体水平无对应的平行关系。

关键词：亚单位偶联疫苗淋巴细胞转化率吞噬活性 MTT

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雷氏普罗威登菌引致中华鳖脏器脓肿

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南京农业大学学报 2001年第4期24卷 71-74页

作者：范红结黄国庆郭爱珍陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

江苏省某养殖场饲养的中华鳖发生败血症 ,特征为肺脏、脾脏等内脏广泛形成干酪样结节。从病鳖内脏分离到一种革兰氏阴性杆菌 ,兼性厌氧 ,丙氨酸脱羧酶阳性 ,利用柠檬酸盐、吲哚和甲基红反应均为阳性 ,发酵甘露醇、肌醇、甘露糖 ,产酸。... 详细信息

江苏省某养殖场饲养的中华鳖发生败血症 ,特征为肺脏、脾脏等内脏广泛形成干酪样结节。从病鳖内脏分离到一种革兰氏阴性杆菌 ,兼性厌氧 ,丙氨酸脱羧酶阳性 ,利用柠檬酸盐、吲哚和甲基红反应均为阳性 ,发酵甘露醇、肌醇、甘露糖 ,产酸。经鉴定为雷氏普罗威登菌 (Providenciarettgeri)。药敏试验表明 ,该菌对羧苄青霉素、先锋霉素、SMZ +TMP、氟哌酸、恩诺沙星敏感。以分离菌腹腔注射感染健康中华鳖 ,接种鳖 1周后陆续发病死亡 ,并从其体内分离到同种细菌。

关键词：雷氏普罗威登菌中华鳖脏器脓肿致病性

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