检索结果-内蒙古大学图书馆

南京农业大学学报 2000年第1期23卷 71-73页

作者：郭爱珍陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

利用犬瘟热病毒 (caninedistempervirus,CDV)弱毒标准株OP CDV感染敏感细胞系非洲绿猴肾细胞 (Vero) ,应用缺口末端标记法 (TdT mediateddUTPnickendlabeling ,TUNEL)分析感染细胞的凋亡。结果在感染后 48h的Vero细胞中检出了凋亡阳性细... 详细信息

利用犬瘟热病毒 (caninedistempervirus,CDV)弱毒标准株OP CDV感染敏感细胞系非洲绿猴肾细胞 (Vero) ,应用缺口末端标记法 (TdT mediateddUTPnickendlabeling ,TUNEL)分析感染细胞的凋亡。结果在感染后 48h的Vero细胞中检出了凋亡阳性细胞 ,而对照细胞内未检测到凋亡细胞。感染后 2 4h的细胞尚未出现细胞病变 ,这一时期的细胞内也未检测到凋亡细胞。表明CDV能诱导细胞调亡 ,且凋亡细胞的检出时间与细胞病变的出现时间呈正向相关。

关键词：犬瘟热病毒细胞凋亡缺口末端标记法细胞病变

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ELISA双抗体夹心法检测河蟹“颤抖病”病毒

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南京农业大学学报 2001年第4期24卷 67-70页

作者：孙学强金业陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

用纯化的河蟹“颤抖病” (暂定名 )病毒分别免疫家兔和山羊 ,制备高效价的抗血清。羊抗血清经硫酸铵盐析纯化。经方阵滴定 ,选择P/N =2 95时作 1∶10 0稀释的抗血清为工作浓度 ,建立ELISA双抗体夹心法检测样本 14 4份 ,包括来自长江水... 详细信息

用纯化的河蟹“颤抖病” (暂定名 )病毒分别免疫家兔和山羊 ,制备高效价的抗血清。羊抗血清经硫酸铵盐析纯化。经方阵滴定 ,选择P/N =2 95时作 1∶10 0稀释的抗血清为工作浓度 ,建立ELISA双抗体夹心法检测样本 14 4份 ,包括来自长江水域的野生河蟹、人工感染发病的河蟹、 1999年和 2 0 0 0年从江苏采集的自然发病的病蟹及市场购买河蟹。结果显示 ,病蟹和市场购买河蟹的阳性率为 6 6 7%～ 10 0 % ,人工感染的病蟹和人工感染石蟹致病组阳性率均为 10 0 % ,来自长江水域的健康河蟹及未接种病毒的对照石蟹阳性率均为 0 ,表明建立的方法可以用于检测河蟹“颤抖病”

关键词：河蟹 ELISA双抗体夹心法 “颤抖病”病毒检测

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抗猪IgM单克隆抗体的研制

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中国免疫学杂志 2005年第10期21卷 784-785页

作者：吴胜昔姜平李玉峰南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

随着规模化养猪业的发展，我国已相继出现多种新的猪传染病，包括猪繁殖与呼吸综合征、副猪嗜血杆菌和猪圆环病毒Ⅱ型感染等，并已引起严重的经济损失。研制抗猪IgM单抗来检测这些疫病特异性IgM型抗体，将为该疾病早期诊断提供新且简便... 详细信息

随着规模化养猪业的发展，我国已相继出现多种新的猪传染病，包括猪繁殖与呼吸综合征、副猪嗜血杆菌和猪圆环病毒Ⅱ型感染等，并已引起严重的经济损失。研制抗猪IgM单抗来检测这些疫病特异性IgM型抗体，将为该疾病早期诊断提供新且简便的途径。近年来研究发现抗原特异性B细胞有高效抗原递呈作用，其膜表面抗原受体对抗原的摄取、浓缩和处理起着重要作用。用抗猪IgMμ链McAbs和抗体．抗原的McAbs组成的双特异性抗体，既能与抗原特异性结合，又能与B细胞膜表面抗原结合，从而能进一步在体内外从分子水平上研究B细胞抗原递呈特点，并且为显著降低疫苗接种剂量，提高机体免疫能力的探索提供新的实验手段。鉴此，本实验室用PEG融合技术，研制出分泌抗猪IgM μ链McAbs杂交瘤细胞株。[第一段]

关键词：抗IgM单克隆抗体疫苗接种猪圆环病毒病毒感染生物学鉴定

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含口蹄疫病毒VP1基因与结核杆菌HSP70基因的重组腺病毒转移载体的构建

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中国生物工程杂志 2005年第B04期25卷 268-272页

作者：王海震陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

根据GenBank已发表的结核杆菌HSP70的基因序列及O型口蹄疫病毒VP1基因序列,应甩Primer5．0软件设计了2对引物,其中一对引物用于扩增结核杆菌基因组中的HSP70完整基因,另一对引物用于以pMD-D为模板,扩增其中的VP1完整基因序列。将所扩... 详细信息

根据GenBank已发表的结核杆菌HSP70的基因序列及O型口蹄疫病毒VP1基因序列,应甩Primer5．0软件设计了2对引物,其中一对引物用于扩增结核杆菌基因组中的HSP70完整基因,另一对引物用于以pMD-D为模板,扩增其中的VP1完整基因序列。将所扩增的2段基因串联插入腺病毒转移载体pAdenovator-CMV5-IRES-GFP的BglⅡ位点,经PCR方法和限制性酶切方法鉴定2基因已成功插入了转移载体并且插入方向正确,获得了重组腺病毒转移载体pAdenovator- CMV5-IRES-GFP-VP1-HSP,此转移载体可与腺病毒骨架载体进行细菌内同源重组,以产生重组腺病毒载体。

关键词：口蹄疫病毒VP1 结核杆菌HSP70 腺病毒转移载体

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猪瘟病毒E2蛋白主要抗原域的高效表达及间接ELISA方法的初步建立

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中国生物工程杂志 2005年第1期25卷 81-85页

作者：王海震李学仁冯秀丽陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

重组质粒pET-2e转化宿主菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导表达,比较不同诱导条件下目的蛋白的表达量,确定其最佳表达条件,使外源基因获得了较高水平的表达,可达菌体蛋白总量的36.6％。Western-blot检测表明表达产物具有良好的免疫反应原性。... 详细信息

重组质粒pET-2e转化宿主菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导表达,比较不同诱导条件下目的蛋白的表达量,确定其最佳表达条件,使外源基因获得了较高水平的表达,可达菌体蛋白总量的36.6％。Western-blot检测表明表达产物具有良好的免疫反应原性。将收集的纯培养物进行超声波裂解后以镍亲和层析柱纯化回收目的蛋白,再以纯化后的目的蛋白作为包被抗原进行方阵滴定试验,确定了目的蛋白作为包被抗原的最佳稀释度,初步建立了检测CSF血清抗体水平的间接ELISA方法。以此方法建立的间接ELISA方法对收集的约120头份血清样品进行检测,结果显示:使用囊素与疫苗共同免疫猪的血清抗体水平明显高于未加囊素组猪的血清抗体水平,与以往的报道一致,为以CSFV重组蛋白作为抗原建立的间接ELISA方法的标准化奠定基础。

关键词：猪瘟病毒 E2蛋白抗原域基因表达间接ELISA 猪瘟抗体检测诊断试剂盒

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塞内卡病毒A(SVA) VP1间接ELISA抗体检测方法的建立及应用

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中国兽医学报 2019年第10期39卷 1907-1912页

作者：范慧曾洁李亮李仕海张盼盼延君芳姜平白娟南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

为建立快速检测塞内卡病毒A (Senecavirus A,SVA)血清学方法,以纯化的重组VP1蛋白作为包被抗原,建立了SVA VP1间接ELISA抗体检测方法。结果表明,VP1蛋白以包涵体形式表达,纯化后的蛋白经Western blot鉴定具有较好的反应原性。该ELISA检... 详细信息

为建立快速检测塞内卡病毒A (Senecavirus A,SVA)血清学方法,以纯化的重组VP1蛋白作为包被抗原,建立了SVA VP1间接ELISA抗体检测方法。结果表明,VP1蛋白以包涵体形式表达,纯化后的蛋白经Western blot鉴定具有较好的反应原性。该ELISA检测方法阴、阳性临界值为0.278,与口蹄疫病毒(FMDV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等猪常见病原阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性。批内和批间重复性试验的变异系数均小于13%,表明该方法重复性和稳定性均较好。相比于血清中和试验(SN),该方法的相对敏感性为98.0%,两种方法的符合率为84%。用该方法对来自山东、广东省的8个猪场的276份血清进行检测,阳性率为22.1%。SVA VP1间接ELISA抗体检测法可作为一种快速、简便的血清学诊断方法,用于猪群SVA感染监测和流行病学初步调查。

关键词：塞内卡病毒A VP1 间接ELISA

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A/J小鼠感染猪链球菌2型后脾脏消减cDNA文库的构建及相关差异基因表达分析

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南京农业大学学报 2012年第3期35卷 94-100页

作者：谢正露沈学怀殷复建刘琳马海田范红结南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为了分离与猪链球菌2型感染密切相关的基因,利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建了8周龄A/J小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库,并对其中169个阳性克隆进行测序,去除冗余的cDNA序列载体并聚类拼接后共获得110条差异表达序列标签(EST... 详细信息

为了分离与猪链球菌2型感染密切相关的基因,利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建了8周龄A/J小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库,并对其中169个阳性克隆进行测序,去除冗余的cDNA序列载体并聚类拼接后共获得110条差异表达序列标签(EST)。利用GenBank的BLAST软件分析比较核酸和蛋白质同源性,发现共有36个基因与这些EST具有高度的同源性,它们分别参与细胞成分、免疫、信号转导、凋亡、转录等重要功能。这些差异表达基因主要有ATP/GTP结合蛋白1(Agtpbp1)、天冬氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬氨酸盒多肽5、核蛋白p68、ATP-依赖RNA解旋酶、真核生物转录因子2亚基(Eif2s2)、Na+/K+-ATP酶转运β3多肽、溶菌酶1、溶菌酶2等基因。结论:这些差异表达基因在猪链球菌2型感染过程中可能发挥重要功能。

关键词： A/J小鼠抑制性消减杂交差异表达基因消减cDNA文库

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奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌临床分离株生化特性与菌体蛋白免疫原性分析

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农业生物技术学报 2006年第6期14卷 970-975页

作者：钟辉姚火春南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是奶牛乳腺炎的最主要致病菌之一。从53株金黄色葡萄球菌乳样分离株中挑选了培养特性和形态典型的6株进行生化和传代稳定性试验,研究了6株菌的凝固酶、溶血素等致病性因子和耐药性。对菌体裂解产... 详细信息

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是奶牛乳腺炎的最主要致病菌之一。从53株金黄色葡萄球菌乳样分离株中挑选了培养特性和形态典型的6株进行生化和传代稳定性试验,研究了6株菌的凝固酶、溶血素等致病性因子和耐药性。对菌体裂解产物进行蛋白凝胶电泳分析发现,6株菌体蛋白电泳条带具有很高的相似性,其中TQ-1株电泳蛋白条带密度较其它几株高。用其中4株生化特性典型、传代稳定和致病因子较多的菌株免疫兔,制备高免血清,分析全菌抗原的蛋白转印图谱,发现XG-2株在52kD处有特异蛋白条带。综合以上结果,确定以TQ-1和XG-2株为疫苗候选株。以TQ-1和XG-2株为疫苗株,按常规方法制备金黄色葡萄球菌灭活疫苗,在鼠关节炎模型中进行攻毒保护试验,证实了以这两株菌制备的疫苗接种小鼠可有效地抵抗同源和异源金黄色葡萄球菌的攻击。

关键词：金黄色葡萄球菌致病因子牛乳腺炎

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猪圆环病毒2型感染的检测与流行病学调查

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中国兽医学报 2008年第3期28卷 227-231页

作者：张治涛李玉峰姜平王先炜邓雨修南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

根据GenBank上发表的PCV2 ORF2和PRRSV ORF7序列设计合成引物,建立分别用于检测PCV2和PRRSV的PER和RT-PCR方法,并对2003年9月至2005年5月采自189个可疑发病猪场的389份病料进行了PCV2和PRRSV的检测.结果显示.来自33个猪场的35份样品为P... 详细信息

根据GenBank上发表的PCV2 ORF2和PRRSV ORF7序列设计合成引物,建立分别用于检测PCV2和PRRSV的PER和RT-PCR方法,并对2003年9月至2005年5月采自189个可疑发病猪场的389份病料进行了PCV2和PRRSV的检测.结果显示.来自33个猪场的35份样品为PCV2阳性,猪场PCV2阳性率为17.1%;PCV2与PRRSV混合感染率为5.1%,PCV2阳性猪场中PRRSV感染率为57.6%.流行病学统计结果表明,安徽省猪场PCV2阳性率最高;安徽省和广西壮族自治区猪场PCV2和PRRSV的混合感染最严重;春夏季节PCV2阳性率明显高于秋冬;消瘦、被毛粗乱是PCV2感染的主要特征;淋巴结水肿或出血,肾脏肿大、出血或呈灰白色以及脾脏病变是PCV2感染的主要病理变化;仔猪7～8周龄发病率最高.

关键词：猪圆环病毒2型流行病学混合感染猪繁殖与呼吸综合征病毒

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2014—2015年我国华东部分地区猪流行性腹泻病毒的检测及S基因的序列分析

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中国兽医科学 2016年第6期46卷 702-709页

作者：王广操陆倩倩张梦岩许长萌王志建王先炜南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

采用RT-PCR方法对2014年至2015年送至实验室的104份腹泻仔猪小肠组织病料进行检测,结果显示42份为猪流行性腹泻病毒（PEDV）阳性,选择不同地区的7份阳性病料进行S基因克隆和测序,并与Gen Bank中已发布的PEDV S基因比对分析。核苷酸和氨... 详细信息

采用RT-PCR方法对2014年至2015年送至实验室的104份腹泻仔猪小肠组织病料进行检测,结果显示42份为猪流行性腹泻病毒（PEDV）阳性,选择不同地区的7份阳性病料进行S基因克隆和测序,并与Gen Bank中已发布的PEDV S基因比对分析。核苷酸和氨基酸比对结果显示,7株流行毒株S基因核苷酸和氨基酸序列的同源性分别是98.1%～99.2%和97.6%～99.1%。该7株流行毒株与经典毒株CV777和DR13核苷酸序列的同源性分别为94.0%～94.2%和93.9%～94.1%,氨基酸序列的同源性分别为93.1%～93.6%和92.5%～93.1%。S基因进化树分析结果表明,根据S基因的变异情况PEDV可以分为3个型,本试验分析的7株PEDV流行毒株均属于Ⅲ型,与2012年以来中国流行毒株的亲缘关系较近,与国外传统毒株和中国较早分离到的毒株的亲缘关系较远。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S基因遗传变异分析

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