检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2008年第11期48卷 1479-1485页

作者：蒋建东李荣郭新强陈凯李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

【目的】为了评价多功能农药降解基因工程菌株m-CDS-1的环境释放中间试验水平的安全性。【方法】通过农药检测、平板计数、Most probable number-PCR(MPN-PCR)和Denaturing Gradient Gel Electrophoresis(DGGE)等方法在江苏大丰进行了... 详细信息

【目的】为了评价多功能农药降解基因工程菌株m-CDS-1的环境释放中间试验水平的安全性。【方法】通过农药检测、平板计数、Most probable number-PCR(MPN-PCR)和Denaturing Gradient Gel Electrophoresis(DGGE)等方法在江苏大丰进行了工程菌株m-CDS-1田间降解农药效果、定殖动态和对土壤微生物群落结构影响的研究。【结果】投加1.01×107CFU/g干土的工程菌株m-CDS-1在30d时均能完全降解10.71mg/kg的甲基对硫磷和1.29mg/kg的呋喃丹。平板计数表明工程菌株m-CDS-1在土壤中快速下降;MPN-PCR检测结果显示,在4d,15d和30d时,0～10cm混合土壤中该工程菌株的数目分别为2.15±0.98×106CFU/g干土,3.70±4.66×104CFU/g干土和检测不出。工程菌株m-CDS-1的投加不会对土壤可培养三大微生物菌群数量产生显著影响;基于细菌16S rDNA V3区的DGGE分析结果表明,施加农药对细菌菌落结构有显著影响,4d,11d,30d时农药施用区与空白对照区的图谱相似性分别为17.16%,49.81%和75.01%,但到60d时的相似性为98.62%。工程菌株m-CDS-1释放在前期对细菌群落结构有一定影响,4d,11d和30d工程菌株释放区相对于空白的相似性分别为49.57%,38.30%和83.30%。在60d时,空白、施药和施菌小区的图谱相似性都在90%以上。【结论】工程菌株m-CDS-1不仅可同时高效降解甲基对硫磷和呋喃丹,仍保持了实验室内的原有特性,而且不会成为优势菌群长期在土壤环境中存在,也不会对土壤微生物群落结构造成长期影响。

关键词：基因工程菌株m—CDS-1 环境释放安全评价农药降解 Most probable number-PCR(MPN-PCR) Denaturing Gradient Gel Electrophoresis(DGGE)

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中华根瘤菌Sinorhizobium sp.1128自体诱导物合成酶基因的克隆及对生理功能的影响

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微生物学报 2008年第10期48卷 1314-1318页

作者：曲媛杨梦华郑会明钟增涛朱军南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

【目的】从中华根瘤菌Sinorhizobium sp.1128中克隆自体诱导物合成酶基因,从而研究该基因在Sinorhizobium sp.1128群体感应系统中的作用。【方法】利用基因序列同源性比对以及分子克隆的方法,从中华根瘤菌Sinorhizobium sp.1128中克隆... 详细信息

【目的】从中华根瘤菌Sinorhizobium sp.1128中克隆自体诱导物合成酶基因,从而研究该基因在Sinorhizobium sp.1128群体感应系统中的作用。【方法】利用基因序列同源性比对以及分子克隆的方法,从中华根瘤菌Sinorhizobium sp.1128中克隆自体诱导物合成酶基因;利用大肠杆菌异源表达、C18反相薄层层析(TLC)的方法研究该基因的特性;通过中间片段融合的方法缺失该基因,并通过结瘤实验研究该基因对Sinorhizobium sp.1128生理功能的影响。【结果】以草木樨中华根瘤菌Sinorhizobium medicae WSM419自体诱导物合成酶基因Smed_1560序列设计引物,通过PCR扩增在Sinorhizobium sp.1128中寻找到一新的自体诱导物合成基因,命名为traI2。该基因在大肠杆菌Escherichia coli DH5α中表达后能产生两种自体诱导物分子。在Sinorhizobium sp.1128中将该基因缺失,自体诱导物活性下降;回复突变后,自体诱导物活性得到恢复,结瘤实验结果表明该基因能影响根瘤菌的结瘤效率。【结论】中华根瘤菌Sinorhizobium sp.1128群体感应系统是一个复杂的交互系统,它对结瘤的生理功能具有一定的影响。

关键词： Sinorhizobium sp.1128 群体感应自体诱导物合成酶

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耐高温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的高效表达

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应用与环境生物学报 2008年第4期14卷 534-538页

作者：董晨曹娟张迹沈标南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

高温α-淀粉酶是发酵行业用量最大的酶类,为了实现高温α-淀粉酶基因的高效表达,本研究比较了不同启动子对地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中表达的影响.分别用强启动子P43和地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因自身启... 详细信息

高温α-淀粉酶是发酵行业用量最大的酶类,为了实现高温α-淀粉酶基因的高效表达,本研究比较了不同启动子对地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中表达的影响.分别用强启动子P43和地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因自身启动子构建了表达载体pP43NMK-amy和pUBC19-amy,并在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis1A752S中进行表达.结果表明,与地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因自身启动子相比,采用P43启动子的耐高温α-淀粉酶其表达水平提高了8.9倍.而且在枯草芽孢杆菌***1A752S中分泌表达的α-淀粉酶仍具有耐高温的特性,酶反应的最适温度为90℃,表明酶的热稳定性由蛋白质本身的氨基酸序列决定的.

关键词：耐高温α-淀粉酶基因启动子P43 amy启动子高效表达

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两株抗乙酰羟酸合酶类除草剂克雷伯氏菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

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应用与环境生物学报 2008年第5期14卷 663-667页

作者：沈晶晶黄星俞欣妍李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

乙酰羟酸合酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类和嘧啶水杨酸类等乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗此类除草剂的AHAS突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值.本文从长期使用磺酰脲类除草剂的农田土... 详细信息

乙酰羟酸合酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类和嘧啶水杨酸类等乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗此类除草剂的AHAS突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值.本文从长期使用磺酰脲类除草剂的农田土壤中分离到2株抗性细菌HR9和HR11,根据其表型特征、生理生化特性和16SrDNA序列系统发育分析,初步鉴定为克雷伯氏菌(Klebsiella sp.).菌株HR9和HR11对甲磺隆的最高耐受浓度分别达到9600μmol/L和8200μmol/L,且对各种乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性.利用PCR技术从HR9、HR11和实验室保存的一株除草剂敏感型克雷伯氏菌LB-2的总DNA中克隆到编码AHAS的基因ilvIH,其中ilvI编码大亚基即催化亚基,ilvH编码小亚基即调节亚基.比对结果表明,菌株HR11与菌株HR9的ilvI有6个位点的氨基酸存在差异,HR9、HR11与LB-2的ilvI各有20和16个位点的氨基酸存在差异.

关键词：乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂除草剂抗性细菌乙酰羟酸合酶 ilvIH

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氯嘧磺隆降解菌株LW-3的分离及生物学特性研究

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微生物学通报 2008年第12期35卷 1899-1904页

作者：王哲孙纪全马吉平黄星李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从长期受氯嘧磺隆污染的土壤中分离到一株氯嘧磺隆高效降解菌株,命名为LW-3,菌株LW-3可以氯嘧磺隆为唯一氮源生长,接种量为2%时,50mg/L氯嘧磺隆经过7d,降解率达70%~80%。生理生化实验和16SrDNA序列同源性分析,将菌株LW-3归属于假单胞菌... 详细信息

从长期受氯嘧磺隆污染的土壤中分离到一株氯嘧磺隆高效降解菌株,命名为LW-3,菌株LW-3可以氯嘧磺隆为唯一氮源生长,接种量为2%时,50mg/L氯嘧磺隆经过7d,降解率达70%~80%。生理生化实验和16SrDNA序列同源性分析,将菌株LW-3归属于假单胞菌属(Pseudomonas sp.);菌株的适宜降解条件为;温度30°C^35°C,pH6.5~7.2,pH对菌株LW-3降解氯嘧磺隆有明显地影响。

关键词：氯嘧磺隆微生物降解假单胞菌属生物学特性

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具菲降解特性植物内生细菌的分离筛选及其生物学特性

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环境科学学报 2008年第7期28卷 1308-1313页

作者：陈小兵盛下放何琳燕江春玉孙乐妮马海燕南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从长期受石油污染的植物体内分离到内生细菌36株,通过平皿促生和定殖试验筛选出1株能高效降解菲并明显促进小麦生长、能在小麦体内良好定殖的内生细菌7J2菌株.同时,对菌株7J2的生物学特性进行了研究.结果表明,菌株7J2在菲含量为30mg... 详细信息

从长期受石油污染的植物体内分离到内生细菌36株,通过平皿促生和定殖试验筛选出1株能高效降解菲并明显促进小麦生长、能在小麦体内良好定殖的内生细菌7J2菌株.同时,对菌株7J2的生物学特性进行了研究.结果表明,菌株7J2在菲含量为30mg·L-1的条件下,28℃振荡培养6d,菲的降解率达到99.81%.菌株7J2能够产生吲哚乙酸(IAA)(3.4±0.2)mg·L-1)和铁载体(2,3-二羟基苯甲酸)(4.3±1.6)mg·L-1).振荡培养3d,接活菌的培养基中有效磷浓度比接灭活菌的处理增加了32.5%.另外,菌株7J2对重金属Pb2+、Cr2+、Cu2+、Ni2+、Zn2+、Cd2+均有较强的抗性.通过16SrDNA序列测定,菌株7J2属于肠杆菌属.

关键词：内生细菌分离菲降解特性

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产多糖溶磷细菌对难溶性Ca-P的活化特性

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南京农业大学学报 2008年第2期31卷 49-54页

作者：易艳梅黄为一南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室/生命科学学院江苏南京210095

以肠杆菌EnHy-401、节杆菌ArHy-505、固氮菌AzHy-510和巨大芽孢杆菌P17为材料,比较了4种溶磷细菌在摇瓶培养条件下对不同难溶性Ca-P中的磷活化能力。结果表明,4种溶磷细菌均能促使难溶性Ca-P中的磷活化,但3种产多糖的溶磷细菌(EnHy-401... 详细信息

以肠杆菌EnHy-401、节杆菌ArHy-505、固氮菌AzHy-510和巨大芽孢杆菌P17为材料,比较了4种溶磷细菌在摇瓶培养条件下对不同难溶性Ca-P中的磷活化能力。结果表明,4种溶磷细菌均能促使难溶性Ca-P中的磷活化,但3种产多糖的溶磷细菌(EnHy-401、ArHy-505、AzHy-510)对难溶性Ca-P的活化能力普遍强于不产多糖的溶磷细菌(P17),肠杆菌EnHy-401对Ca3-P、Ca8-P和Ca10-P中的磷活化率分别达61.53%、63.40%和4.32%。在产多糖的溶磷细菌中,有机酸和多糖均高的菌株活化磷的能力最高,3种产多糖的溶磷细菌活化难溶磷酸钙能力的大小顺序依次为肠杆菌EnHy-401、节杆菌ArHy-505、固氮菌AzHy-510。结果还表明,产多糖的溶磷细菌对难溶磷的活化作用是由分泌有机酸和多糖的协同作用实现的,多糖对磷的吸持推动了磷的溶解平衡向溶解方向移动,且该协同作用受胞外多糖持磷能力和环境中C/N的影响,单位体积发酵液中多糖持磷量与菌株的磷活化能力呈正相关。在本试验条件下,C/N值高时,多糖产量高,有机酸分泌多,活化磷的能力就强。同一菌株只有在最适于产有机酸和产多糖的C/N值下,才能表现出最佳的溶磷效果。

关键词：溶磷细菌难溶性磷酸钙多糖磷活化

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降解菌S113对甲磺隆污染土壤生物修复作用的研究

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土壤学报 2008年第1期45卷 150-154页

作者：黄星潘继杰孙纪全孙笑非李顺鹏南京农业大学生命科学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

在室内条件下,研究了降解菌S113(Methylopila sp.)对甲磺隆污染土壤的修复作用。S113能够以甲磺隆为唯一碳源生长,72h对50mgL-1甲磺隆的降解率达98.38%。投加降解菌S113可显著提高土壤中甲磺隆的降解速率。当甲磺隆浓度为10mgkg-1干土,S... 详细信息

在室内条件下,研究了降解菌S113(Methylopila sp.)对甲磺隆污染土壤的修复作用。S113能够以甲磺隆为唯一碳源生长,72h对50mgL-1甲磺隆的降解率达98.38%。投加降解菌S113可显著提高土壤中甲磺隆的降解速率。当甲磺隆浓度为10mgkg-1干土,S113接种量为108个g-1土时,第30天土壤中甲磺隆降解率为76.9%,对照土壤中甲磺隆降解率仅为11.9%。S113降解甲磺隆的速率和接种量呈正相关,当接种量减少为105个g-1干土时,降解菌对甲磺隆的降解作用微弱。在土壤中甲磺隆浓度较低的条件下,S113的降解效果显著,而当土壤中甲磺隆浓度达到50mgkg-1时,甲磺隆降解率仅为39.6%。S113降解土壤中甲磺隆的最适温度为30℃,第30天的降解率可达75.9%。当温度为25℃、20℃时,第30天甲磺隆降解率仅为53.5%和23.9%。S113菌剂灌根,能不同程度地缓解土壤中浓度为40、80μgkg-1的甲磺隆对玉米生长的抑制作用,但当甲磺隆浓度增加到120μgkg-1时,接种S113对药害解除作用不显著。结果表明,人工接种降解菌S113,能有效去除土壤中甲磺隆残留。

关键词： S113 甲磺隆生物修复

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整合猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的重组鼠白血病病毒特性

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生物工程学报 2008年第5期24卷 780-785页

作者：党占国夏平安周斌尹彦涛王建举柴春霞崔保安陈溥言河南农业大学牧医工程学院微生物实验室郑州450002 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了猪繁殖与呼吸综合征病毒完整的GP5基因并进行了克隆与鉴定。序列测定结果与已经登陆GenBank的EF488048高致病性江西株比对分析表明碱基同源性达98.7%。构建含GP5基因的真核表达载体pcDNA-GP5,... 详细信息

通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了猪繁殖与呼吸综合征病毒完整的GP5基因并进行了克隆与鉴定。序列测定结果与已经登陆GenBank的EF488048高致病性江西株比对分析表明碱基同源性达98.7%。构建含GP5基因的真核表达载体pcDNA-GP5,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111共转染人胚肾细胞293T,48h后收集假病毒上清,超离后通过Western-blot证明GP5蛋白在假型病毒颗粒表面存在,表明GP5蛋白被整合到此假型病毒粒子表面。通过感染293T、Mark-145不同的靶细胞,证实所构建的假型病毒粒子具有感染性。成功构建了具有感染性的MuLV-GP5假病毒体系,为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒侵入细胞的机理及其组织嗜性的变异提供一种新方法。

关键词：鼠白血病病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因假病毒

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中慢生型天山根瘤菌中MrtR蛋白的融合表达研究及鉴定

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土壤 2008年第4期40卷 658-661页

作者：戴俊郑会明杨梦华钟增涛朱军南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过PCR扩增出中慢生型天山根瘤菌中群体感应调控蛋白MrtR的基因片段,克隆至表达载体pALEX中,从而构建了原核表达质粒pALEX-mrtR。将pALEX-mrtR转化至大肠杆菌BL2/DE3菌株感受态细胞中,经IPTG诱导,表达出58kD的GST-MrtR融合蛋白。用纯... 详细信息

通过PCR扩增出中慢生型天山根瘤菌中群体感应调控蛋白MrtR的基因片段,克隆至表达载体pALEX中,从而构建了原核表达质粒pALEX-mrtR。将pALEX-mrtR转化至大肠杆菌BL2/DE3菌株感受态细胞中,经IPTG诱导,表达出58kD的GST-MrtR融合蛋白。用纯化好的GST-MrtR制备多克隆抗体,经Westernblot检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性。MrtR融合蛋白的成功表达及其多克隆抗体的制备为进一步研究MrtR蛋白的功能奠定了基础。

关键词：群体感应中慢生型天山根瘤菌 MrtR 融合表达多克隆抗体

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