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第二届全国食用菌中青年专家学术交流会

作者：欧阳翔吴婧丁一新李玉祥赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

本文以Cu为诱导物,检测灵芝漆酶同工酶基因的转录特性。研究发现:灵芝漆酶基因在Cu的作用下表达量出现明显差异,其中以发酵液中添加3.0 mmol·LCu、诱导时间为6天时,漆酶基因的mRNA表达量最高。根据GenBank中已报道的灵芝漆酶基因... 详细信息

本文以Cu为诱导物,检测灵芝漆酶同工酶基因的转录特性。研究发现:灵芝漆酶基因在Cu的作用下表达量出现明显差异,其中以发酵液中添加3.0 mmol·LCu、诱导时间为6天时,漆酶基因的mRNA表达量最高。根据GenBank中已报道的灵芝漆酶基因的序列信息,获得了韩国灵芝漆酶5′端的基因特异序列,进而通过self-formed adaptor PCR（简称SEFA-PCR）的方法,扩增得到灵芝漆酶基因起始密码子上游长802 bp的启动子序列。分析表明,该启动子区域上除分布有TATA-box、CAAT-box以及GC-Box等基本的转录起始元件外,还存在有多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括4个MRE元件、4个STRE元件、11个HSEs元件和5个氮因子结合位点等。这些结果表明,不同的外源诱导物可以调节灵芝漆酶基因的表达。

关键词：漆酶半定量RT-PCR self-formed adaptor PCR 转录调控

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农药面源污染的微生物修复

农药面源污染的微生物修复

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全国农业面源污染综合防治高层论坛

作者：李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环微生物工程重点开放实验室

本文介绍了农药面源污染的现状,介绍了农药微生物降解的机制,降解农药的微生物种类,农药面源污染微生物修复的研究现状,重点介绍了农药污染的原位和异位生物修复方法。

关键词：农药面源污染微生物修复

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农药面源污染的微生物修复

农药面源污染的微生物修复

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2008全国农业面源污染综合防治高层论坛

作者：李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环微生物工程重点开放实验室南京 210095

关键词：农药面源污染微生物修复微生物降解

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施肥对小麦纹枯病发生及根际微生物群落结构的影响

施肥对小麦纹枯病发生及根际微生物群落结构的影响

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中国植物病理学会2008年学术年会

作者：熊桂林陈怀谷李伟张爱香于汉寿江苏省农业科学院植物保护研究所南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

小麦纹枯病是我国长江中下游麦区的重要病害。影响小麦纹枯病发生流行的因素很多,包括品种抗性、气候因素、耕作制度及栽培技术等。目前,小麦纹枯病的防治通常采取育种、栽培及药剂防治相结合的综合措施。小麦品种对纹枯病的抗性与利用... 详细信息

小麦纹枯病是我国长江中下游麦区的重要病害。影响小麦纹枯病发生流行的因素很多,包括品种抗性、气候因素、耕作制度及栽培技术等。目前,小麦纹枯病的防治通常采取育种、栽培及药剂防治相结合的综合措施。小麦品种对纹枯病的抗性与利用研究虽有报道,但目前生产上推广的品种多为感

关键词：小麦纹枯病根际微生物群落纹枯病菌

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猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白介导的E蛋白假型鼠白血病病毒的构建

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白介导的E蛋白假型鼠白血病病毒的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：党占国夏平安周斌陈溥言崔保安邱璜卢高峰河南农业大学牧医工程学院兽医微生物实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

利用RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5和ORF6基因,分别构建pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6真核表达载体,磷酸钙共沉淀法瞬时转染293T细胞,48h后收集细胞,流式细胞仪检测,结果表明:PRRSV ORF5基因编码囊膜蛋... 详细信息

利用RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5和ORF6基因,分别构建pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6真核表达载体,磷酸钙共沉淀法瞬时转染293T细胞,48h后收集细胞,流式细胞仪检测,结果表明:PRRSV ORF5基因编码囊膜蛋白(E蛋白)能在在293T细胞表面表达,而由共表达M蛋白(ORF6基因编码的基质蛋白)介导的E蛋白的表达量比单独E蛋白表达量高,串联表达与单独E蛋白相比较低。将pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5,6和pcDNA-ORF5-ORF6分别与MuLV假病毒构建体系的两种骨架载体pHIT60(包括MuLV的结构蛋白基因,即gag和pol)和pHIT111(为MuLV的基因组,还包括一个报告基因LacZ)瞬时共转染293T细胞,48h后收集假病毒上清,超速离心后通过Western blot证实E蛋白能够在此假病毒颗粒表面表达,证明E蛋白已整合到此假病毒粒子表面。将整合PRRSVE蛋白的假病毒粒子分别感染Marc-145和PAM宿主靶细胞,均能检测到LacZ基因的表达,结果表明:所构建的假病毒柱子具有感染性,且由M蛋白介导的MuLV-E/M感染性比MuLV-E假病毒感染性高。

关键词：假病毒鼠白血病病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5/6基因

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采用ARDRA研究双孢蘑菇培养料后发酵过程中的细菌群落结构(Ⅰ)——细菌16S rDNA全长文库的建立

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食用菌学报 2008年第4期15卷 11-19页

作者：何丽鸿于荣利陈明杰潘迎捷中华人民共和国农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室上海市食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201106 南京农业大学生命科学院微生物系南京210095 上海海洋大学上海200090

采用化学裂解和酶解相结合的方法,以加入PVPP的高盐缓冲液作为细胞裂解反应体系,用PEG- 8000进行DNA沉淀.从双孢蘑菇堆肥后发酵的4个代表时期培养料样品中提取微生物总DNA,再以总DNA为模板,以专用引物F27和R1498进行PCR扩增,获得16S rDN... 详细信息

采用化学裂解和酶解相结合的方法,以加入PVPP的高盐缓冲液作为细胞裂解反应体系,用PEG- 8000进行DNA沉淀.从双孢蘑菇堆肥后发酵的4个代表时期培养料样品中提取微生物总DNA,再以总DNA为模板,以专用引物F27和R1498进行PCR扩增,获得16S rDNA片段,经纯化后构建4个时期样品的细菌16S rDNA文库。试验结果表明,本试验获得的总DNA质量较好。采用PCR扩增可获得多个细菌、放线菌和真菌特异片段;细菌16S rDNA文库的目的片段插入效率在90%以上。

关键词：双孢蘑菇培养料后发酵细菌16S rDNA文库

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3,5-二硝基苯甲酸降解菌A3的分离及降解特性

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中国环境科学 2007年第1期27卷 106-110页

作者：李蒙英张迹陆鹏许敬亮李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

从硝基苯类化合物废水处理系统中分离到一株3，5-二硝基苯甲酸降解菌株A3，经形态特征、生理生化以及16S rDNA序列分析，初步鉴定为睾丸酮丛毛单胞菌（Comamonas testosteroni）．该菌能以200mg/L3,5-二硝基苯甲酸为唯一碳源，12h的降... 详细信息

从硝基苯类化合物废水处理系统中分离到一株3，5-二硝基苯甲酸降解菌株A3，经形态特征、生理生化以及16S rDNA序列分析，初步鉴定为睾丸酮丛毛单胞菌（Comamonas testosteroni）．该菌能以200mg/L3,5-二硝基苯甲酸为唯一碳源，12h的降解率可达95％以上，24h可溶性有机碳（DOC）由72．5mg/L降至10．2mg／L。表明3，5-二硝基苯甲酸被降解矿化而不是被转化成其他有机物．当A3以200mg/L3,5-二硝基苯甲酸为唯一碳、氮源时，将底物转化为一种黄色代谢产物，该产物不易进一步降解．A3降解3，5-二硝基苯甲酸的适宜温度为20-30℃。最适pH值为5-9．

关键词： 3,5-硝基苯甲酸睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni) 生物降解矿化

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生物膜中群体感应因子细菌的分离及成膜能力

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中国环境科学 2007年第2期27卷 194-198页

作者：李蒙英陆鹏张迹许敬亮李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

从硝基苯甲酸废水处理系统的生物膜中分离到2株分泌酰基高丝氨酸内酯(AHL)群体感应信号分子的菌株M10和M22,测试表明M10产生4种AHL信号分子,M22产生3种AHL信号分子.以***5α为对照,测定了这2株菌的成膜能力及群游力,M10和M22均表现出一... 详细信息

从硝基苯甲酸废水处理系统的生物膜中分离到2株分泌酰基高丝氨酸内酯(AHL)群体感应信号分子的菌株M10和M22,测试表明M10产生4种AHL信号分子,M22产生3种AHL信号分子.以***5α为对照,测定了这2株菌的成膜能力及群游力,M10和M22均表现出一定的成膜力和群游力,对比而言,M22的成膜能力较强,而M10的群游能力较强,M10和M22经个体形态、生理生化反应及16SrDNA测序初步鉴定均属Aeromonassp..

关键词：生物膜废水处理群体感应 N-酰化高丝氨酸内酯

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甲氰菊酯降解菌Sphingomonas ***4-5对污染土壤的生物修复

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环境科学 2007年第5期28卷 1121-1125页

作者：洪源范洪青沈雨佳李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

JQL4-5(Sphingomonassp.)是1株从长期受农药污染土壤中分离的甲氰菊酯降解菌,考察了其在实验室模拟条件下对甲氰菊酯污染土壤的生物修复能力及其影响因素.结果表明,降解菌株在灭菌土壤中的降解效果要略好于未灭菌土壤,在土壤外源添加降... 详细信息

JQL4-5(Sphingomonassp.)是1株从长期受农药污染土壤中分离的甲氰菊酯降解菌,考察了其在实验室模拟条件下对甲氰菊酯污染土壤的生物修复能力及其影响因素.结果表明,降解菌株在灭菌土壤中的降解效果要略好于未灭菌土壤,在土壤外源添加降解菌106CFU.g-1,温度20-40℃,pH为6.5-7.5的条件下,该菌株能有效降解土壤中10-200 ***-1的甲氰菊酯.可以将其应用于甲氰菊酯污染土壤的生物修复.

关键词：甲氰菊酯降解菌JQIA-5 生物修复

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久效磷降解菌的分离及其酶促降解特性研究

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环境科学 2007年第4期28卷 908-912页

作者：贾开志李晓慧何健顾立锋马吉平李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从某农药厂废水处理池的污泥中分离到1株久效磷高效降解菌株M-1,经过对其形态特征、生理生化、以及16S rDNA序列分析,该菌株初步鉴定为Paracoccus sp..M-1能以久效磷作为唯一碳源生长,24 h对100 mg.L-1久效磷的降解效率为92.47%.久效磷... 详细信息

从某农药厂废水处理池的污泥中分离到1株久效磷高效降解菌株M-1,经过对其形态特征、生理生化、以及16S rDNA序列分析,该菌株初步鉴定为Paracoccus sp..M-1能以久效磷作为唯一碳源生长,24 h对100 mg.L-1久效磷的降解效率为92.47%.久效磷降解酶定域表达试验表明该酶为胞内酶,组成表达.久效磷酶促降解的最适反应pH为8.0,最适反应温度为25℃;其米氏常数(Km)为0.29μ***-1,最大降解速率(Vmax)为682.12μmol.(***)-1.久效磷降解酶热稳定性差,碱性条件下能够保持较高降解活性.

关键词：久效磷生物降解 Paracoccus sp. 酶促降解

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