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第八次全国环境微生物学术研讨会

作者：徐剑宏洪青张忠辉张国顺李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从受呋喃丹长期污染的土壤中分离筛选获得一株能够高效降解呋喃丹的菌株CFDS-1.该菌能在48h内100％降解100mg/kg的呋喃丹,经形态、生理生化、16SrDNA(***702969)同源性及系统发育地位等指标分析,初步鉴定该菌为Sphingomonassp..CFDS-1... 详细信息

从受呋喃丹长期污染的土壤中分离筛选获得一株能够高效降解呋喃丹的菌株CFDS-1.该菌能在48h内100％降解100mg/kg的呋喃丹,经形态、生理生化、16SrDNA(***702969)同源性及系统发育地位等指标分析,初步鉴定该菌为Sphingomonassp..CFDS-1的最适生长温度是30℃,最适生长初始pH值为7.0,改变通气量对CFDS-1的生长影响不大.土壤实验表明该菌株同样能很好的降解土壤中的呋喃丹残留.

关键词：呋哺丹降解菌分离鉴定生物修复污染土壤

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蒽醌废水生化处理的活性污泥驯化

蒽醌废水生化处理的活性污泥驯化

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第八次全国环境微生物学术研讨会

作者：洪青邵劲松沈标李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过比较不同的污泥驯化方法研究了活性污泥法处理蒽醌废水的可行性.结果表明,常规的CODCr负荷提升法需要50天才可以驯化出活性污泥.在进水中添加1g/L葡萄糖的方法可以快速提高污泥浓度,但是驯化出的污泥活性很低,不能满足废水的处理要... 详细信息

通过比较不同的污泥驯化方法研究了活性污泥法处理蒽醌废水的可行性.结果表明,常规的CODCr负荷提升法需要50天才可以驯化出活性污泥.在进水中添加1g/L葡萄糖的方法可以快速提高污泥浓度,但是驯化出的污泥活性很低,不能满足废水的处理要求.而采用添加1g/L葡萄糖和CODCr负荷提升交叉驯化的方法可以明显缩短驯化时间,到第28天就可以驯化出高活性的污泥,在平均进水CODCr为1050mg/L、HRT为24h,去除率达到95.6％.

关键词：活性污泥驯化蒽醌废水处理交叉驯化法生化处理

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太湖地区菜地土壤微生物群落的遗传多样性分析

太湖地区菜地土壤微生物群落的遗传多样性分析

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第八次全国环境微生物学术研讨会

作者：滕齐辉曹慧崔中利王英孙波郝红涛李顺鹏南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 中国科学院南京土壤研究所南京210008 中国科学院南京土壤研究所南京210008

土壤微生物多样性是土壤生态功能的基础.采用间接法提取太湖地区菜地土壤微生物的总DNA,以细菌的特异性引物扩增16SrDNA片段,扩增产物与T-载体酶连,转化大肠杆菌,建立土壤微生物16SrDNA基因文库.PCR扩增基因文库中插入的16SrDNA外源片段... 详细信息

土壤微生物多样性是土壤生态功能的基础.采用间接法提取太湖地区菜地土壤微生物的总DNA,以细菌的特异性引物扩增16SrDNA片段,扩增产物与T-载体酶连,转化大肠杆菌,建立土壤微生物16SrDNA基因文库.PCR扩增基因文库中插入的16SrDNA外源片段,用两种限制性内切酶HhaⅠ和RasⅠ分别酶切,获得该土壤173个克隆的酶切指纹图谱.结果表明,HhaⅠ和RasⅠ联合酶切产生63个基因分型,文库的覆盖度达76.3％,单一酶切产生的基因分型少,但文库的覆盖度高;克隆文库中存在两种优势类群,分别占总克隆的16％和12％;16SrDNA测序结果表明,太湖地区菜地土壤微生物在分类方面主要属于α-和γ-变形杆菌亚门,未培养的微生物类群占有较大的比例.

关键词：土壤微生物菌体细胞回收 16S rDNA基因文库遗传多样性未培养微生物变形杆菌

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牛粪沼气发酵过程中产甲烷菌群落结构的RFLP分析

牛粪沼气发酵过程中产甲烷菌群落结构的RFLP分析

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中国沼气学会第七次全国代表大会暨沼气产业化发展研讨会

作者：何健汪婷梅琴李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京 210095

本文进行了牛粪沼气发酵过程中产甲烷菌群落结构的RFLP分析。我国奶牛养殖近年来得到了极大的发展，但与之俱来的是产生了大量的奶牛粪便，据统计每头奶牛日产鲜牛粪约30公斤，牛尿和冲洗废水150公斤，奶牛粪便已成为我国农村环境主要... 详细信息

本文进行了牛粪沼气发酵过程中产甲烷菌群落结构的RFLP分析。我国奶牛养殖近年来得到了极大的发展，但与之俱来的是产生了大量的奶牛粪便，据统计每头奶牛日产鲜牛粪约30公斤，牛尿和冲洗废水150公斤，奶牛粪便已成为我国农村环境主要污染源之一。沼气发酵是奶牛粪便最有应用前景的处理工艺之一，在使奶牛粪便无害化的同时，产生的沼液沼渣可作为有机肥料，沼气可作为能源。但是由于奶牛粪便有机质浓度和难降解的纤维素含量高，作为原料进行沼气发酵时，普遍存在调试启动慢，运行过程不稳定，易出现酸化和不产气或产气率低等问题，这已经在很大程度上制约了沼气发酵在奶牛粪便处理中的应用。由于产甲烷菌是专性严格厌氧菌，培养条件苛刻，生长缓慢，依靠分离纯化的方法分析沼气发酵过程中产甲烷菌的种群演替，不仅耗时长，而且还无法反映一些未可培养的产甲烷菌种群，因此无法全面、快速、准确的反映沼气发酵过程中产甲烷菌的演替情况。随着分子生物学的发展，建立在微生物核糖体小亚基(16S rRNA)序列分析基础上的分子系统发育分析方法快速、方便，不依赖于培养，可以突破传统培养方法的局限性，直接在基因水平上进行分析。

关键词：农村能源沼气工程牛粪发酵微生物群落

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牛粪沼气发酵过程中物质转化、微生物生理群变化及产甲烷菌多样性研究

牛粪沼气发酵过程中物质转化、微生物生理群变化及产甲烷菌多样性...

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中国沼气学会第七次全国代表大会暨沼气产业化发展研讨会

作者：汪婷何健赵子如李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京 210095

我国奶牛养殖近年来得到了极大的发展，但与之俱来的是产生了大量的奶牛粪便，据统计每头奶牛日产鲜牛粪约30公斤，牛尿和冲洗废水150公斤，奶牛粪便已成为我国农村环境主要污染源之一。沼气发酵是奶牛粪便最有应用前景的处理工艺之一... 详细信息

我国奶牛养殖近年来得到了极大的发展，但与之俱来的是产生了大量的奶牛粪便，据统计每头奶牛日产鲜牛粪约30公斤，牛尿和冲洗废水150公斤，奶牛粪便已成为我国农村环境主要污染源之一。沼气发酵是奶牛粪便最有应用前景的处理工艺之一，在使奶牛粪便无害化的同时，产生的沼液沼渣可作为有机肥料，沼气可作为能源。但是由于奶牛粪便有机质浓度和难降解的纤维素含量高，作为原料进行沼气发酵时，普遍存在凋试启动慢，运行过程不稳定，易出现酸化和不产气或产气率低等问题，这已经在很大程度上制约了沼气发酵在奶牛粪便处理中的应用。对奶牛粪便沼气发酵物质转化及其微生物种群变化过程进行研究，对奶牛粪便沼气发酵的快速启动、产气率提高和稳定运行具有非常重要的意义。本文介绍了牛粪沼气发酵过程中物质转化、微生物生理群变化及产甲烷菌多样性研究的材料方法与结果，在实际的研究工作中，应该考虑，将分子生物学手段与传统的微生物学培养技术相结合，做到尽可能全面、准确地反映实际情况。用分子生物学的方法指导传统的分离培养技术，与此同时，以传统的分离培养技术验证分子生物学的分析结果。

关键词：农村能源沼气工程牛粪发酵微生物种群

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多功能降解菌Pseudomonas putida KT2440-DOP的构建与降解特性研究

多功能降解菌Pseudomonas putida KT2440-DOP的构建与降解特性研究

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第八次全国环境微生物学术研讨会

作者：顾立锋何健黄星贾开志李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

三唑磷水解酶基因为本实验室发现的一个新的广谱有机磷水解酶基因,通过PCR从有机磷降解菌株***-4总DNA扩增了tpd,将tpd定向克隆到pBBRMCS-5载体上,构建重组质粒pTPD,在辅助质粒pRK2013的帮助下,通过三亲接合将pTPD转移到Pseudomonasputi... 详细信息

三唑磷水解酶基因为本实验室发现的一个新的广谱有机磷水解酶基因,通过PCR从有机磷降解菌株***-4总DNA扩增了tpd,将tpd定向克隆到pBBRMCS-5载体上,构建重组质粒pTPD,在辅助质粒pRK2013的帮助下,通过三亲接合将pTPD转移到PseudomonasputidaKT2440中,获得的工程菌PseudomonasputidaKT2440-DOP可以降解多种有机磷农药及芳香烃化合物;KT2440-DOP的有机磷水解酶活较出发菌株mp4提高了一倍左右.

关键词：有机磷农药有机磷降解菌 KT2440 工程菌构建芳香烃化合物三唑磷水解酶基因

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奶牛粪便沼气发酵前后发酵液中产甲烷菌多样性分析

奶牛粪便沼气发酵前后发酵液中产甲烷菌多样性分析

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第八次全国环境微生物学术研讨会

作者：汪婷何健徐剑宏李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

采用产甲烷菌16SrDNA特异性引物和PCR扩增的方法,构建了以牛粪为发酵基质模拟产沼气前后的发酵液16SrDNA文库,并通过RFLP酶切分析和序列分析.结果表明沼气发酵前后存在着产甲烷菌的演替过程,在发酵前后各自存在着占优势地位的种群.发酵... 详细信息

采用产甲烷菌16SrDNA特异性引物和PCR扩增的方法,构建了以牛粪为发酵基质模拟产沼气前后的发酵液16SrDNA文库,并通过RFLP酶切分析和序列分析.结果表明沼气发酵前后存在着产甲烷菌的演替过程,在发酵前后各自存在着占优势地位的种群.发酵前的发酵基质中,109个克隆子被划分为29个不同的RFLP型,其中,最大的六大RFLP型分别含有22、14、12、11、7、7个转化子,而其余的23个RFLP类型中分别含有1～4个转化子,测序后表明这六种RFLP型的克隆子分别与甲烷粒球菌(Methanocorpusculumlabreanum,AF095267)、瘤胃甲烷短杆菌(Methanobre-vibacterruminantium,AY196666)以及甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)的产甲烷菌高度同源;而发酵盛产期发酵液中所挑取的109个转化子被分为14种酶切类型,其中占优势地位的四大RFLP型分别含有28、23、23、15个转化子,经测序后均与小甲烷粒菌(Methanocorpusculumbavaricum,AY260435.1)具有高度同源性.实验表明:随着沼气发酵的进行,沼液中的产甲烷菌的群落结构发生了很大的变化,存在着明显的演替过程.

关键词：沼气发酵产甲烷菌多样性 16S rDNA文库 RFLP酶切分析群落结构

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五种农药对真姬菇菌丝生长影响的初步研究

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中国食用菌 2005年第1期24卷 8-10页

作者：李军辉冯志勇赵明文汤兆宙李玉祥程继红高君晖南京农业大学农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 上海市农业科学院食用菌研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

研究了乙草胺等 5种常用农药对真姬菇菌丝生长速率的影响。通过将供试农药按一定浓度梯度加入到PDA培养基中 ,接种真姬菇菌块 ,测量菌落的直径 ,计算出菌丝平均生长速度。并借助统计软件SPSS分析了五种常用农药对真姬菇菌丝生长速度的影... 详细信息

研究了乙草胺等 5种常用农药对真姬菇菌丝生长速率的影响。通过将供试农药按一定浓度梯度加入到PDA培养基中 ,接种真姬菇菌块 ,测量菌落的直径 ,计算出菌丝平均生长速度。并借助统计软件SPSS分析了五种常用农药对真姬菇菌丝生长速度的影响。

关键词：真姬菇茵丝平均生长速度农药抑制作用

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七株有机磷农药降解菌的降解特性比较

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中国环境科学 2004年第5期24卷 584-587页

作者：张瑞福戴青华何健代先祝李顺鹏南京农业大学生命科学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

对分离自同一有机磷农药污染土壤的7株有机磷农药降解菌的降解特性进行了比较,7株降解菌都能利用甲基对硫磷为唯一碳源生长,并生成中间代谢产物对硝基苯酚.对硝基苯酚的降解经过一段延滞期,不同菌株降解对硝基苯酚的能力和延滞期有很大... 详细信息

对分离自同一有机磷农药污染土壤的7株有机磷农药降解菌的降解特性进行了比较,7株降解菌都能利用甲基对硫磷为唯一碳源生长,并生成中间代谢产物对硝基苯酚.对硝基苯酚的降解经过一段延滞期,不同菌株降解对硝基苯酚的能力和延滞期有很大差异.降解菌株对多种有机磷类农药和芳香族化合物具有降解能力,其降解谱表现了一定的差异.用PCR方法从7株降解菌中克隆了有机磷农药水解酶基因.

关键词：有机磷农药降解菌降解特性水解酶基因

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土壤微生物群落结构研究方法进展

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土壤 2004年第5期36卷 476-480,515页

作者：张瑞福崔中利李顺鹏南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

分离培养技术在土壤微生物的研究中有很大的局限性,因为土壤中的微生物大部分还处于不能被分离培养状态。随着微生物研究技术的发展尤其是分子生物学技术的发展,一系列不依赖于培养的技术在土壤微生物研究中得到广泛应用。本文介绍了生... 详细信息

分离培养技术在土壤微生物的研究中有很大的局限性,因为土壤中的微生物大部分还处于不能被分离培养状态。随着微生物研究技术的发展尤其是分子生物学技术的发展,一系列不依赖于培养的技术在土壤微生物研究中得到广泛应用。本文介绍了生物标志物法、SCSU、DNA复性分析、DGGE、TGGE、ARDRA、T-RFLP、SSCP、PAPD和ERIC-PCR 图谱分析等方法在土壤微生物群落结构研究中的应用。

关键词：微生物群落结构不依赖培养研究方法

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