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赤霉病菌拮抗菌Bacillus subtilis AF0907抗菌物质研究

中国生物防治学报 2015年第3期31卷 378-385页

作者：胡晓丹王建伟李孝敬祭芳史建荣徐剑宏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室/江苏省转基因安全评价公共服务中心南京210014 江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心南京210014

菌株AF0907是从土壤中分离到的1株对小麦赤霉病菌具有显著拮抗作用的枯草芽孢杆菌,该菌株不仅对小麦赤霉病菌具有很好的拮抗活性,对其他多种植物病原菌都具有很好的拮抗效果。为了明确菌株AF0907对赤霉病菌的抑菌机理,本研究首先使用平... 详细信息

菌株AF0907是从土壤中分离到的1株对小麦赤霉病菌具有显著拮抗作用的枯草芽孢杆菌,该菌株不仅对小麦赤霉病菌具有很好的拮抗活性,对其他多种植物病原菌都具有很好的拮抗效果。为了明确菌株AF0907对赤霉病菌的抑菌机理,本研究首先使用平板对持法对拮抗物质进行定位,结果表明该菌分泌的拮抗物质主要位于细胞上清液中。采用不同饱和度的硫酸铵沉淀细胞上清液,确定了60%的硫酸铵饱和度是沉淀该拮抗物质的最佳条件;分别研究了温度、p H值、蛋白酶K、氯仿对该拮抗物质活性的影响,结果表明该拮抗物质在低温下比较稳定,在60℃以上的高温下,活性迅速降低;在酸性或碱性条件下不稳定;该拮抗物质分别加入蛋白酶K和氯仿作用后拮抗活性分别下降了60.68%、80.07%,因此,初步判断该拮抗物质为蛋白质。利用DEAE-52离子交换柱层析法分离纯化了该拮抗蛋白并进行了SDS-PAGE电泳,结果显示该拮抗蛋白的分子量为48 k Da;利用PPSQ-31A蛋白自动测序仪测定拮抗蛋白N-末端15个氨基酸序列为:His-Glu-Phe-Pro-Thr-Tyr-Lys-His-Met-Tyr-Gln-Val-Met-His-Leu。

关键词：小麦赤霉病菌枯草芽孢杆菌拮抗菌拮抗蛋白

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Rhizobium sp.W33对不同植物吸收铜和根际分泌物的影响

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环境科学学报 2014年第8期34卷 2077-2084页

作者：陈生涛何琳燕李娅袁彤彤盛下放黄智农业部农业环境微生物重点开放实验室南京农业大学生命科学学院南京210095

通过盆栽试验,采用1株植物促生细菌Rhizobium sp.W33接种黑麦草、狼尾草、高羊茅、紫花苜蓿、猪屎豆、油菜和印度芥菜等7种不同植物,考察了Cu胁迫下菌株对植物生物量、Cu含量和根际土壤中分泌物的影响,并筛选根瘤菌-植物联合修复重金属... 详细信息

通过盆栽试验,采用1株植物促生细菌Rhizobium sp.W33接种黑麦草、狼尾草、高羊茅、紫花苜蓿、猪屎豆、油菜和印度芥菜等7种不同植物,考察了Cu胁迫下菌株对植物生物量、Cu含量和根际土壤中分泌物的影响,并筛选根瘤菌-植物联合修复重金属污染土壤的组合体系,以期初步探明细菌-植物联合修复重金属污染土壤的机制.结果表明,接种Rhizobium sp.W33后,有5种植物的干重增加了11%~56%,增加幅度为印度芥菜>黑麦草>高羊茅>狼尾草>油菜,紫花苜蓿和猪屎豆的干重下降.黑麦草、狼尾草、高羊茅和猪屎豆根内Cu含量接近或超过1000mg·kg-1,Cu大量积累在植物根部.Rhizobium sp.W33能够显著促进黑麦草吸收Cu(p<0.05),并提高其对Cu的富集系数和转移系数,增加根部和地上部的Cu总量.苹果酸是供试植物-细菌联合修复Cu污染土壤的主要有机酸种类,接种根瘤菌W33后黑麦草、狼尾草根际的苹果酸和水溶性糖含量降低,过氧化氢酶活性增加,其中,苹果酸、水溶性糖含量与黑麦草中Cu含量呈显著相关性(p<0.05).因此,根瘤菌W33-黑麦草联合体系修复重金属Cu污染土壤的效果最好,具有应用于重金属Cu污染土壤稳定修复的潜力.

关键词：根瘤菌联合修复铜根际分泌物

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一个四氢叶酸依赖型的麦草畏脱甲基新机制

一个四氢叶酸依赖型的麦草畏脱甲基新机制

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第十八次全国环境微生物学学术研讨会

作者：姚利贾兴军陶青丁德荣于林鹭张俊杰谢香庭闫新洪青何健南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 大北农生物技术中心北京100193

生物技术的兴起带来了一个全新的农田杂草控制时代：以孟山都公司的草甘膦和抗草甘膦转基因作物(转cp4-EPSPS基因)组合为代表,两者配套使用可以在保证农作物安全前提下极有效地控制农田杂草.2013年全球种植了26.3亿亩转基因作物,其中抗...

生物技术的兴起带来了一个全新的农田杂草控制时代：以孟山都公司的草甘膦和抗草甘膦转基因作物(转cp4-EPSPS基因)组合为代表,两者配套使用可以在保证农作物安全前提下极有效地控制农田杂草.2013年全球种植了26.3亿亩转基因作物,其中抗除草剂性状占比超过80％,且绝大多数是抗草甘膦性状.但长期使用草甘膦带来一个严重问题：杂草产生抗性.全世界迄今已报道牛筋草、黑麦草、小飞蓬和豚草等多种重要杂草对草甘膦产生了抗药性,而且有愈演愈烈之势.麦草畏(Dicamba 3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸,又名百草敌)能防除200多种杂草,因广谱高效、低毒和杂草抗性产生慢,可以很好地弥补草甘膦的不足.美国生物技术巨头孟山都利用麦草畏脱甲基酶基因DMO成功构建抗麦草畏和草甘膦复合性状的转基因大豆(商标为Roundup Ready 2 XtendTM)和抗麦草畏、草甘膦和草铵膦的棉花(Bollgard Ⅱ(R)XtendFlexTM),已经通过相关安全性评估,计划2015年进入商业化应用.

关键词：

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乙草胺降解菌Novosphingobium ***-9的分离及N-脱烷氧乙基酶基因的克隆

乙草胺降解菌Novosphingobium ***-9的分离及N-脱烷氧乙基酶基因...

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第十八次全国环境微生物学学术研讨会

作者：陈青庄文倪海燕姚利王红妹何健李顺鹏枣庄学院生命科学学院山东枣庄271600 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 枣庄学院城市与建筑工程学院山东枣庄271600 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 枣庄学院生命科学学院山东枣庄271600

[目的]从生产除草剂乙草胺的工厂活性污泥中筛选新的乙草胺降解菌,了解降解基因及降解特性.[方法]以乙草胺作为唯一碳源碳源从生产除草剂乙草胺的工厂活性污泥中富集筛选出乙草胺降解菌.采用16S rRNA基因序列同源性分析、生理生化指标... 详细信息

[目的]从生产除草剂乙草胺的工厂活性污泥中筛选新的乙草胺降解菌,了解降解基因及降解特性.[方法]以乙草胺作为唯一碳源碳源从生产除草剂乙草胺的工厂活性污泥中富集筛选出乙草胺降解菌.采用16S rRNA基因序列同源性分析、生理生化指标测定及碳源利用实验等多种方法对该菌株进行鉴定,并根据已报道乙草胺脱N-烷基酶基因设计引物进行扩增.[结果]获得一株能够高效降解乙草胺的菌株DC-9,经过16S rRNA系统发育分析表明它属于新鞘氨醇杆菌属(Novosphingobium),与Novosphingobium chloroacetimidivorans BUT-14T相似性达98.13％;接触酶阴性,氧化酶阳性.菌株可以利用多种糖和有机酸的碳源生长.从该菌株中扩增获得一条N烷基酶基因片段,在NCBI上Blastn分析表明均与菌株Sphingomonas ***-6乙草胺N-烷基酶基因(Genbank登录号：KJ461679)的同源性为100％.[结论]菌株Novosphingobium ***-9可能是新鞘酯属内新种,在环境中乙草胺的污染修复中将会有一定的应用潜力.

关键词：乙草胺新鞘酯属 N-脱烷氧乙基酶基因生物修复

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一株高效解钾菌的筛选、鉴定及发酵条件的优化

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土壤学报 2014年第2期51卷 381-388页

作者：李新新高新新陈星卢维浩董彩霞崔中利曹慧南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 北京师范大学地理学与遥感科学学院北京100875 南京农业大学资源与环境科学学院南京210095

为了寻求钾肥替代技术,从江西红壤中筛选到一株解钾效率为27.62%的高效解钾菌株G4,结合菌落形态特征、生理生化特性、16S rDNA序列分析,初步鉴定为类芽孢杆菌属(Paenibacillus sp.);通过单因素试验与正交试验对G4的发酵条件进行优化,结... 详细信息

为了寻求钾肥替代技术,从江西红壤中筛选到一株解钾效率为27.62%的高效解钾菌株G4,结合菌落形态特征、生理生化特性、16S rDNA序列分析,初步鉴定为类芽孢杆菌属(Paenibacillus sp.);通过单因素试验与正交试验对G4的发酵条件进行优化,结果表明G4的最佳发酵条件为:麦芽糖1%(w/v)、蛋白胨0.2%(w/v)、磷酸氢二钾0.05%(w/v)、培养温度25℃、初始pH7.5、装液量80 ml/250 ml(250 ml三角瓶装液量为80 ml)、培养时间48 h、接种量7%。G4有较强的解钾能力,有望用于微生物肥料的开发。

关键词：解钾菌红壤筛选鉴定类芽孢杆菌发酵条件

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Delftia sp.T3-6菌株及其粗酶液对2',6'-甲乙基-2-氯乙酰苯胺的降解

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环境科学学报 2014年第6期34卷 1396-1402页

作者：侯颖王飞李静泉董维亮崔中利南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物重点开放实验室南京210095 河南科技大学食品与生物工程学院洛阳471003 江西农业大学生物科学与工程学院南昌330045

研究了Delftia sp.T3-6菌株对2’,6’-甲乙基-2-氯乙酰苯胺(CMEPA)的降解特性,以及该菌株胞内酶对CMEPA的酶促特性.结果表明,菌株T3-6对CMEPA有很好的降解性能.反应12 h内,随着CMEPA浓度的增加,反应速度加快;当CMEPA浓度达到500 mg·... 详细信息

研究了Delftia sp.T3-6菌株对2’,6’-甲乙基-2-氯乙酰苯胺(CMEPA)的降解特性,以及该菌株胞内酶对CMEPA的酶促特性.结果表明,菌株T3-6对CMEPA有很好的降解性能.反应12 h内,随着CMEPA浓度的增加,反应速度加快;当CMEPA浓度达到500 mg·L-1时,菌体的降解活性受到一定程度的抑制;在菌体接种量为0.5%~5%的范围内,接种量越大,CMEPA的降解转化速率越快.菌株T3-6降解CMEPA的最适温度为30℃,且其在pH 7~10的范围内对500 mg·L-1CMEPA的降解率均可达50%以上.T3-6菌株对CMEPA降解起催化作用的活性酶为胞内酶,该酶的最适反应温度和pH分别为25℃和8.0;该酶的温度稳定性较差,需在20℃以下贮存;但其在4℃下,pH 6~9的缓冲液中均可保持很好的稳定性.

关键词：乙草胺 2’,6’-甲乙基-2-氯乙酰苯胺代尔伏特菌降解特性

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百合非淀粉多糖的除蛋白工艺与抗氧化性研究

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食品工业 2014年第7期35卷 15-20页

作者：游雪娇顾振新广东省微生物研究所广东省华南应用微生物重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地广州510070 南京农业大学农业部农畜产品加工与质量控制重点开放实验室南京210095

以宜兴百合鳞茎为原料,利用水提法与酵母发酵法提取分离非淀粉多糖,并将所得多糖经Sevag法除蛋白后,比较2种方法提得的非淀粉多糖的抗氧化性。结果表明:利用Sevag法除蛋白时,随着多糖浓缩倍数和除蛋白次数的增加,蛋白去除率先上升后趋... 详细信息

以宜兴百合鳞茎为原料,利用水提法与酵母发酵法提取分离非淀粉多糖,并将所得多糖经Sevag法除蛋白后,比较2种方法提得的非淀粉多糖的抗氧化性。结果表明:利用Sevag法除蛋白时,随着多糖浓缩倍数和除蛋白次数的增加,蛋白去除率先上升后趋于平缓,多糖回收率则先下降后趋于平缓,综合考虑蛋白去除率和多糖回收率,水提法与发酵法多糖提取液浓缩倍数分别选用3和0,除蛋白次数分别选用3和4;除蛋白后的水提百合非淀粉多糖的还原能力及清除DPPH与超氧阴离子的能力均显著高于发酵法;2种方法得到的非淀粉多糖均具有较强的羟自由基清除能力,当多糖质量浓度为1 mg/mL时,多糖的羟自由基抑制率均超过90%,且二者无显著差异。

关键词：百合非淀粉多糖除蛋白抗氧化性

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1株饲用木聚糖酶产生菌的分离、鉴定、发酵、酶学性质及应用

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江苏农业科学 2014年第10期42卷 196-200页

作者：郄卫那张兰英何健贺芹南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 江西省南康市第一小学江西南康341400

以木聚糖为唯一碳源,从长期堆放枯枝败叶的土壤中筛选能够高效降解木聚糖的菌株,并对该菌的产酶条件和酶学性质进行研究。分离得到1株酶活性较高且产酶相对稳定的菌株,鉴定为尖孢镰刀菌,命名为Fusarium oxysporum MJ23。研究表明,木聚... 详细信息

以木聚糖为唯一碳源,从长期堆放枯枝败叶的土壤中筛选能够高效降解木聚糖的菌株,并对该菌的产酶条件和酶学性质进行研究。分离得到1株酶活性较高且产酶相对稳定的菌株,鉴定为尖孢镰刀菌,命名为Fusarium oxysporum MJ23。研究表明,木聚糖、酵母粉是该菌的最适培养底物,在最适培养条件下,该菌株所产木聚糖酶活力可达186 U/mL;木聚糖酶的最适作用温度、pH值分别为55℃、6,55℃保温3 h,酶活力仍可维持90%以上;Ca2+、Fe2+、Mn2+、Tween 80和聚乙二醇对木聚糖酶活力有较强促进作用,Cu2+、Zn2+、EDTA、尿素和SDS则会抑制酶活,其中SDS的抑制作用最强。模拟动物体内对饲料中半纤维素组分的消化,木聚糖酶的添加可使猪饲料中木糖生成量提高28%,鸡饲料中木糖生成量提高16%,表明该菌株所产木聚糖酶具有用作饲料添加剂的可能性。

关键词：木聚糖酶酶学性质产酶条件饲料尖孢镰刀菌

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微生物产木聚糖酶研究进展

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江苏农业科学 2014年第7期42卷 387-391页

木聚糖酶是生物技术领域的研究热点。介绍了木聚糖酶的分类、作用机理、高产菌株的种类及获得、工业应用等,以期为指导木聚糖酶工业化生产与应用建立基础。

关键词：木聚糖酶功能分类作用机理高产菌株工业化应用

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三种不同分子标记技术对灵芝单核体多态性的研究

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食品工业科技 2014年第15期35卷 175-179页

作者：徐凯唐传红张劲松杨焱唐庆九刘艳芳赵明文南京农业大学生命科学学院/农业部农业微生物环境工程重点开放实验室江苏南京210095 国家食用菌工程技术研究中心/农业部南方食用菌资源利用重点实验室/上海市农业科学院食用菌研究所上海201403

为了探讨灵芝***原生质体单核体间遗传多态性,为育种材料的筛选提供分子水平依据。运用ISSR、SRAP、RAPD3种分子标记技术对制得的34株灵芝单核体进行了遗传多样性分析和聚类分析。结果显示,三种分子标记技术共扩增出347条条带,多态性条... 详细信息

为了探讨灵芝***原生质体单核体间遗传多态性,为育种材料的筛选提供分子水平依据。运用ISSR、SRAP、RAPD3种分子标记技术对制得的34株灵芝单核体进行了遗传多样性分析和聚类分析。结果显示,三种分子标记技术共扩增出347条条带,多态性条带为308条,多态比率为88.76%,其中ISSR-PCR扩增效果较好,多态性条带和多态比率最高;119-123与其余菌株相异系数最大,或已发生基因突变。根据综合分析结果,在相异系数为0.67时,可以把剩余33株菌株分为两大类群,Ⅱ类含5株菌株,分别为119-180、119-210、119-212、G0119和119-214,剩余的28株菌株为Ⅰ类。研究表明,ISSR、SRAP和RAPD分子标记可用于灵芝单核体多态性研究,这将为育种材料的筛选提供帮助,减少育种工作量和风险。

关键词：灵芝分子标记遗传多态性

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