检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2016年第5期46卷 573-578页

作者：游术梅张乔亚孙涛朱雪蛟王先炜姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京210095

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV2)多以混合感染的形式,广泛存在于世界各地的猪群。本研究选取35日龄的阴性健康猪,随机分为4组:PCV2感染组(n=5)、PCV2+PRRSV共感染组(n=5)、PRRSV感染组(n=5)和空白对照组(n=4)。攻... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV2)多以混合感染的形式,广泛存在于世界各地的猪群。本研究选取35日龄的阴性健康猪,随机分为4组:PCV2感染组(n=5)、PCV2+PRRSV共感染组(n=5)、PRRSV感染组(n=5)和空白对照组(n=4)。攻毒后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重并于不同时间采血,攻毒后第21天剖杀所有猪,荧光定量PCR检测血清中病毒血症和组织中病毒载量。结果表明,PCV2+PRRSV共感染组猪的临床症状最严重,并死亡2头。病理变化主要表现为肺出血、明显的间质性肺炎,淋巴组织及淋巴细胞缺失严重,淋巴滤泡中出现大量核浓缩深染的淋巴细胞;PCV2单独感染组与PRRSV单独感染组猪的临床症状轻微,仅出现短暂性体温升高;空白对照组未出现症状。病毒血症检测结果显示,两种病毒共感染组猪的血清中PCV2与PRRSV含量均高于单独感染组。本研究成功建立了PRRSV与PCV2猪体人工共感染发病模型,为PRRSV与PCV2协同致病机理研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型混合感染断奶仔猪多系统衰竭综合征

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Stx2噬菌体溶原对大肠杆菌运动性及其相关基因表达的影响

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微生物学报 2014年第7期54卷 737-745页

作者：曹冬梅吉文汇严亚贤王恒安孙建和陆承平上海交通大学农业与生物学院、上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 南京农业大学动物医学院、农业部动物疫病诊断与免疫开放重点实验室江苏南京210095

【目的】通过基因缺失和噬菌体溶原转换研究大肠杆菌运动相关基因flhDC、fliA、fliD和fliE对Stx2噬菌体ΦMin27溶原菌的影响。【方法】本实验利用Red重组酶系统,构建了大肠杆菌MG1655的缺失株MG1655△flhDC、MG1655△fliA、MG1655△fliD... 详细信息

【目的】通过基因缺失和噬菌体溶原转换研究大肠杆菌运动相关基因flhDC、fliA、fliD和fliE对Stx2噬菌体ΦMin27溶原菌的影响。【方法】本实验利用Red重组酶系统,构建了大肠杆菌MG1655的缺失株MG1655△flhDC、MG1655△fliA、MG1655△fliD及MG1655△fliE,并将flhDC片段、fliA片段、fliD片段和fliE片段连接pUC18后分别转化相应的突变株,得到相应的互补菌株。通过Stx2噬菌体ΦMin27的感染获得各缺失株的溶原株MG1655△flhDCФMin27、MG1655△fliAФMin27、MG1655△fliDФMin27及MG1655△fliEФMin27。随后测定了野生株、缺失株、互补株和溶原株的运动能力,并通过荧光定量PCR分析了flhDC缺失前后野生株和溶原株其他运动相关基因表达量的变化。【结果】Stx2噬菌体ФMin27溶原感染可促进MG1655的fliA和fliD基因的表达,增强宿主菌MG1655的运动特性;MG1655在flhDC基因缺失的状态下,fliA和fliD基因的表达同步出现上调,但运动性未发生变化,而MG1655△flhDC溶原菌丧失了运动特性,基因转录水平检测发现MG1655△flhDCФMin27与MG1655△flhDC相比,fliA和fliD基因的表达同步出现显著下调,而对fliE基因的表达几乎没有影响。fliA、fliD和fliE单个基因的缺失对大肠杆菌MG1655和Stx2噬菌体ΦMin27溶原菌的运动性几乎没有影响。【结论】提示fliA和fliD基因共同参与了鞭毛运动的调控,flhDC基因可影响噬菌体溶原菌株的运动性,为进一步研究噬菌体溶原与宿主基因之间的相互调节作用提供理论依据。

关键词：大肠杆菌 Stx2噬菌体溶原菌 flhDC 运动性

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ST129,an epidemic strain of Pasteurella multocida from fowl cholera in Jiangsu,China by multi-locus sequence typing(MLST)

ST129,an epidemic strain of Pasteurella multocida from fowl ...

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江苏省畜牧兽医学会成立60周年庆典暨2015年学术年会

作者：王彦红朱杰陆承平吴白刘丹丹杭伟刘慧谋刘秀梵南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫国家重点开放实验室南京210095 扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州 225009 扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州 225009 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫国家重点开放实验室南京210095

Pasteurella multocida,the causative agent of fowl cholera,is a serious threat to poutry *** this study,we isolated and identified 40 Pasteurella multocida strains in fowl cholera outbreaks in Jiangsu province,*** identified *** was further characterized using multi-locus sequence typing(MLST).All of the 40 *** strains studied are genetically identical and belong to the ST129 sequence type based on seven MLST *** study provides evidence of a circulating epidemic strain of *** in Jiangsu,China.

关键词： Pasteurella multocida Multi-locus sequence typing Outbreak fowl cholera

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脑心肌炎病毒3C蛋白抑制IFN-β信号通路的研究

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南京农业大学学报 2014年第3期37卷 88-92页

作者：闭璟珊杜以军白娟姜平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省动物疫病控制与繁育重点实验室山东济南250100

为了探讨脑心肌炎病毒(EMCV)非结构蛋白3C对IFN-β信号通路的影响,采用RT-PCR方法构建EMCV 3C蛋白的重组真核表达质粒pVAX1-3C,将其转染至HeLa细胞,采用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot验证其在真核细胞内的表达和分布定位情况;利用R... 详细信息

为了探讨脑心肌炎病毒(EMCV)非结构蛋白3C对IFN-β信号通路的影响,采用RT-PCR方法构建EMCV 3C蛋白的重组真核表达质粒pVAX1-3C,将其转染至HeLa细胞,采用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot验证其在真核细胞内的表达和分布定位情况;利用Real-time PCR方法检测HeLa细胞表达EMCV 3C蛋白后Ⅰ型干扰素(IFN)效应因子的相对表达量,并用含有双荧光素酶(Luc)报告基因的重组载体检测分析3C蛋白在Ⅰ型IFN信号通路中的作用。结果表明:成功构建pVAX1-3C真核表达质粒,该重组质粒能在HeLa细胞内表达,并分布在细胞核中;pVAX1-3C重组质粒转染组细胞中Ⅰ型IFN效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS、PKR的相对表达量明显低于阴性对照;在双荧光素酶试验中,用poly(I:C)刺激各处理组后进行检测,转染了pVAX1-3C的细胞中IFN-β、IRF3及PRDⅡ启动子驱动的荧光素酶的表达量明显低于阴性对照;ISRE启动子驱动的荧光素酶结果显示,用IFN-β刺激后,与阴性对照组相比,转染pVAX1-3C的细胞中ISRE启动子的活性受到抑制。结论:EMCV 3C蛋白能够下调细胞Ⅰ型IFN效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS、PKR的mRNA水平,并能下调IFN-β、IRF3、PRDⅡ及ISRE启动子的活性,首次证明EMCV 3C蛋白能够抑制IFN-β信号通路。

关键词：脑心肌炎病毒(EMCV) 3C蛋白 Ⅰ型干扰素

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单增李斯特菌溶源性噬菌体的诱导及鉴定

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上海交通大学学报（农业科学版） 2014年第5期32卷 39-43页

作者：安慧婷刘瑾王娟姚火春王恒安上海市兽医生物技术重点实验室上海交通大学农业与生物学院上海200240 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院南京210095

利用丝裂霉素C诱导获得单增李斯特菌溶源性噬菌体,并确定其核酸类型。PCR及其扩增产物的序列测定检测原噬菌体,透射电子显微镜观察丝裂霉素C诱导获得的溶源性噬菌体颗粒,DNase I、RNase A和绿豆核酸酶分别消化噬菌体基因组,确定噬菌体... 详细信息

利用丝裂霉素C诱导获得单增李斯特菌溶源性噬菌体,并确定其核酸类型。PCR及其扩增产物的序列测定检测原噬菌体,透射电子显微镜观察丝裂霉素C诱导获得的溶源性噬菌体颗粒,DNase I、RNase A和绿豆核酸酶分别消化噬菌体基因组,确定噬菌体的核酸类型。结果显示,38株单增李斯特菌分离株中的16株在tRNAArg位点携有原噬菌体,其中1株可诱导出噬菌体颗粒,该噬菌体为长尾噬菌体,核酸为dsDNA。噬菌体的成功诱导为噬菌体及其功能基因的开发利用奠定了基础。

关键词：单增李斯特菌噬菌体核酸类型

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Dot-ELISA法检测致病性嗜水气单胞菌

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畜牧兽医学报 2011年第10期42卷 1409-1415页

作者：任燕潘子豪陆承平姚火春吴淑勤中国水产科学研究院珠江水产研究所广州510380 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095

在鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的基础上,用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)胞外蛋白酶ECPase54,同时用脱脂奶平板、PCR特异性扩增气溶素基因aer和16SrRNA基因检测72株气单胞菌分离... 详细信息

在鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的基础上,用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)胞外蛋白酶ECPase54,同时用脱脂奶平板、PCR特异性扩增气溶素基因aer和16SrRNA基因检测72株气单胞菌分离株。结果显示致病性嗜水气单胞菌检测阳性率分别如下:Dot-ELISA法90.3%(65/72)、脱脂奶平板法75%(54/72)、aer基因PCR法94.4%(68/72)、16SrRNA PCR法81.9%(59/72),Dot-ELISA与其他3种方法的符合率分别为79.2%(57/72)、91.6%(66/72)、81.9%(59/72)。在ECPase54兔抗血清制备后的2、4、6、12、18个月,用Dot-ELISA检测72株分离株,检测结果重复性好。结果表明Dot-ELISA法敏感、特异、实用,可用于鱼类致病性Ah的临床诊断。

关键词：嗜水气单胞菌胞外蛋白酶斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA) 检测

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EDTA对鸭疫里氏杆菌外膜蛋白表达及免疫原性的影响

EDTA对鸭疫里氏杆菌外膜蛋白表达及免疫原性的影响

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第五届南京农业大学畜牧兽医学术年会----家禽高效养殖与重大疫病防控研讨会

作者：张炜汤芳刘广锦鲁岩邵靓范红结陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京 210095

用加入金属离子螯合剂EDTA的TSB(胰酪胨大豆肉汤)培养基,培养鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)Ⅰ型。将未加入EDTA的TSB培养的RA Ⅰ型菌株作对照。比较后发现,加入EDTA组的外膜蛋白(OMPs)的SDS—PAGE图谱发生改变,从34 ku～10... 详细信息

用加入金属离子螯合剂EDTA的TSB(胰酪胨大豆肉汤)培养基,培养鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)Ⅰ型。将未加入EDTA的TSB培养的RA Ⅰ型菌株作对照。比较后发现,加入EDTA组的外膜蛋白(OMPs)的SDS—PAGE图谱发生改变,从34 ku～100 ku增加了多条蛋白条带,特别是39 ku。60 ku和110 ku蛋白浓度较大。电泳胶经Western—blot(康复血清作为一抗。自制酶标兔抗鸭为二抗),与对照组相比,实验组增加了39 ku条带。实验证明,加入金属离子螯合剂EDTA对外膜蛋白的表达和免疫原性均有影响。

关键词：鸭里氏杆菌外膜蛋白表达 EDTA 金属离子螯合剂免疫原性

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基因组步移技术扩增嗜水气单胞菌J-1株脂酶基因全长及原核表达

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动物医学进展 2010年第9期31卷 1-6页

作者：巢伟刘永杰陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京210095

根据已发表的引物序列合成一对引物,以嗜水气单胞菌J-1株基因组为模板扩增脂酶基因,得到一个保守的383 bp基因片段。进一步应用基因组步移技术扩增其两侧未知序列,分别以DraⅠ,EcoRⅤ,PvuⅡ,ScaⅠ,StuⅠ,SmaⅠ6个内切酶酶切的基因组构建... 详细信息

根据已发表的引物序列合成一对引物,以嗜水气单胞菌J-1株基因组为模板扩增脂酶基因,得到一个保守的383 bp基因片段。进一步应用基因组步移技术扩增其两侧未知序列,分别以DraⅠ,EcoRⅤ,PvuⅡ,ScaⅠ,StuⅠ,SmaⅠ6个内切酶酶切的基因组构建6个不同的基因组步移文库,再以基因组步移文库为模板,设计引物向已获得的保守片段两侧进行PCR扩增,将扩增到的两侧序列与保守片段拼接后得到一个3 476 bp的片段,通过DNA Star软件分析,找到一个2 415 bp的开放阅读框,经Blast软件分析,其与嗜水气单胞菌ATCC 7966脂酶、嗜水气单胞菌AH-3磷脂酶A1、嗜水气单胞菌H3脂酶、嗜水气单胞菌Mcc-2脂酶、嗜水气单胞菌J MP636磷脂酶C的序列同源性分别为97%、97%、88%、83%和82%。将DNA序列翻译成氨基酸序列后,发现其包含一个多肽序列(VHFLGHSLGA),这个序列在脂酶中高度保守。

关键词：嗜水气单胞菌基因组步移脂酶

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EDTA对鸭疫里氏杆菌外膜蛋白表达及免疫原性的影响

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畜牧与兽医 2010年第3期42卷 62-65页

作者：张炜汤芳刘广锦鲁岩邵靓范红结陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京210095

用加入金属离子螯合剂EDTA的TSB(胰酪胨大豆肉汤)培养基,培养鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)Ⅰ型,将未加入EDTA的TSB培养的RAⅠ型菌株作对照。比较后发现,加入EDTA组的外膜蛋白(OMPs)的SDS-PAGE图谱发生改变,从34 ku^100 k... 详细信息

用加入金属离子螯合剂EDTA的TSB(胰酪胨大豆肉汤)培养基,培养鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)Ⅰ型,将未加入EDTA的TSB培养的RAⅠ型菌株作对照。比较后发现,加入EDTA组的外膜蛋白(OMPs)的SDS-PAGE图谱发生改变,从34 ku^100 ku增加了多条蛋白条带,特别是39 ku,60 ku和110 ku蛋白浓度较大。电泳胶经Western-blot(康复血清作为一抗,自制酶标兔抗鸭为二抗),与对照组相比,实验组增加了39 ku条带。实验证明,加入金属离子螯合剂EDTA对外膜蛋白的表达和免疫原性均有影响。

关键词：鸭里氏杆菌外膜蛋白 EDTA

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猪链球菌2型转运载体结合蛋白基因克隆、表达及重组蛋白免疫反应原性分析

猪链球菌2型转运载体结合蛋白基因克隆、表达及重组蛋白免疫反应...

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第四届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：胡弘历刘广锦包银莉邵靓汤芳鲁岩陆承平张炜南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室，江苏南京 210095

目的：克隆表达猪链球菌2型转运载体结合蛋白(transportersubstrate-binding protein，TSBP)，分析表达产物的免疫反应原性。方法：以猪链球菌HA9801的基因组为模板，扩增蛋白基因序列，构建重组表达质粒pET28a-TSBP，并转入大肠杆菌BL2... 详细信息

目的：克隆表达猪链球菌2型转运载体结合蛋白(transportersubstrate-binding protein，TSBP)，分析表达产物的免疫反应原性。方法：以猪链球菌HA9801的基因组为模板，扩增蛋白基因序列，构建重组表达质粒pET28a-TSBP，并转入大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中。筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达，产物通过SDS-PAGE鉴定，并用Western-blot检测其免疫反应原性。结论：成功构建重组质粒并表达出TSBP蛋白。West-em-blot结果显示，该蛋白可与兔抗9801全菌血清反应，具有免疫反应原性。提示可以做为该菌的亚单位疫苗候选物。

关键词：猪链球菌2型转运载体结合蛋白基因克隆免疫反应原性

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