检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2023年第3期55卷 110-118页

作者：王远王先炜南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

猪流行性腹泻病(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种高度传染性的猪胃肠道疾病,可导致哺乳仔猪产生急性水样腹泻,造成严重的经济损失。为调查抗菌肽Dermcidin(DCD)对PEDV复制的影响,本研究利用Western blot、荧光定量PCR(RT-qPCR... 详细信息

猪流行性腹泻病(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种高度传染性的猪胃肠道疾病,可导致哺乳仔猪产生急性水样腹泻,造成严重的经济损失。为调查抗菌肽Dermcidin(DCD)对PEDV复制的影响,本研究利用Western blot、荧光定量PCR(RT-qPCR)以及测定病毒半数组织细胞感染量TCID_(50)等方法,通过检测在DCD的作用下PEDV在细胞中的基因转录、蛋白表达和病毒滴度的水平,并利用Western blot检测信号通路中蛋白表达水平,探究其作用的分子机制。研究表明,DCD能够参与PEDV感染;DCD过表达促进了PEDV在Vero细胞和LLC-PK1细胞中的复制,而敲低DCD抑制了PEDV复制;DCD通过诱导PTEN表达来抑制Akt-mTOR-p70S6K通路相关蛋白位点的磷酸化,从而介导自噬促进PEDV复制。研究DCD对PEDV复制的作用机制,对今后PEDV防治工作有重要参考意义。

关键词：猪流行性腹泻病毒 Dermcidin(DCD) 病毒复制自噬

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伪狂犬病病毒TK/gE/gI基因缺失株ZJ01R对仔猪毒力稳定性检测

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畜牧与兽医 2023年第8期55卷 51-56页

作者：姜辰龙马梓承吕林刘星白娟孙杨杨姜平南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京京210095

旨在明确伪狂犬病病毒(PRV)TK/gE/gI基因缺失株ZJ01R对仔猪的安全性。试验选择21~28日龄PRV阴性健康仔猪,通过病毒接种感染试验,观察ZJ01R在仔猪体内的分布规律及不同代次病毒对仔猪致病性。试验结果显示,仔猪肌肉注射ZJ01R后无明显临... 详细信息

旨在明确伪狂犬病病毒(PRV)TK/gE/gI基因缺失株ZJ01R对仔猪的安全性。试验选择21~28日龄PRV阴性健康仔猪,通过病毒接种感染试验,观察ZJ01R在仔猪体内的分布规律及不同代次病毒对仔猪致病性。试验结果显示,仔猪肌肉注射ZJ01R后无明显临床症状,鼻腔排毒3~6 d,免疫后7、14、21 d,猪脑组织检测到PRV,其他组织均无病毒。仔猪滴鼻和肌肉注射F5、F30和F35代次ZJ01R病毒液,体温正常,无明显临床症状和病理变化,无病毒血症,鼻腔排毒时间仅为6 d;仔猪接种后7和14 d,肝脏和肺脏组织病毒检测均阴性,脑组织病毒核酸阳性;感染仔猪血清PRV gB ELISA抗体阳性,gE ELISA抗体阴性,表明ZJ01R毒株35代内对仔猪无临床致病作用,病毒毒力稳定性较好。

关键词：伪狂犬病毒 TK/gE/gI基因缺失毒力稳定性

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纤维二糖利用基因簇对巴氏链球菌生长及毒力的影响

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南京农业大学学报 2024年第5期47卷 923-931页

作者：李鑫椿王硕玥吴宗福南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室/世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室江苏南京210095 广东省养猪与猪病防控技术研究企业重点实验室广东广州511400

[目的]本研究旨在明确纤维二糖利用基因簇对巴氏链球菌生长及毒力的影响。[方法]以肺炎链球菌基因组中纤维二糖利用基因簇为参考,同源性比对分析猪源巴氏链球菌WUSP067中纤维二糖利用基因簇,通过荧光定量PCR(RT-qPCR)、RT-PCR、缺失株... 详细信息

[目的]本研究旨在明确纤维二糖利用基因簇对巴氏链球菌生长及毒力的影响。[方法]以肺炎链球菌基因组中纤维二糖利用基因簇为参考,同源性比对分析猪源巴氏链球菌WUSP067中纤维二糖利用基因簇,通过荧光定量PCR(RT-qPCR)、RT-PCR、缺失株构建、不同条件下的生长曲线测定、小鼠毒力试验等评价其对巴氏链球菌生长及毒力的影响。[结果]巴氏链球菌WUSP067基因组中存在2个潜在的纤维二糖利用相关基因簇(cellobiose locus, CL),将其分别命名为CL1和CL2,它们均包括编码磷酸转移酶系统和β-葡萄糖苷酶的基因。RT-qPCR结果显示,与添加10 g·L^(-1)葡萄糖的DMEM培养基相比,在添加10 g·L^(-1)纤维二糖的DMEM培养基中,CL1中的BglP1_(wp)和BglA_(wp)基因表达量无显著差异,而CL2中celA_(wp)和celB_(wp)基因表达极显著上调(P<0.000 1),分别上调49倍和33倍,提示其参与利用纤维二糖。选择CL2深入研究,RT-PCR结果显示,该基因簇由2个操纵子组成。构建编码β-葡萄糖苷酶的celA_(wp)基因缺失株,生长曲线分析表明,野生株和celA_(wp)基因缺失(ΔcelA_(wp))株在THB、DMEM+10 g·L^(-1)葡萄糖条件下生长情况无明显差异,但在DMEM+10 g·L^(-1)纤维二糖条件下,野生株能以纤维二糖为唯一碳源生长,而ΔcelA_(wp)表现出明显的生长缺陷,生长12 h时D_(600)仍低于0.5。以断奶仔鼠为感染模型,比较野生株和ΔcelA_(wp)株的毒力,每鼠攻毒剂量为3×10^(8) CFU,野生株攻毒组小鼠3日内全部死亡,而ΔcelA株攻毒组的小鼠死亡趋势较缓,14 d后存活率为20%(P<0.05)。[结论]猪源巴氏链球菌WUSP067能以纤维二糖为唯一碳源生长,CL2是纤维二糖利用相关基因簇,其中celA_(wp)基因不仅促进该菌利用纤维二糖,而且还影响该菌的毒力,在巴氏链球菌致病过程中发挥作用。

关键词：巴氏链球菌纤维二糖生长毒力

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依福地平对猪流行性腹泻病毒的抑制作用研究

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畜牧与兽医 2024年第3期56卷 62-68页

作者：张财盛陈欢司安琪赵普齐传翔钱莺娟郑龙三戴建君南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是猪流行性腹泻(PED)的病原。本研究通过CCK-8、细胞ELISA、Western blot、时间过程分析、药物抑制病毒吸附和入胞试验,探究了依福地平对PEDV的抑制作用。结果表明,依福地平在2... 详细信息

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是猪流行性腹泻(PED)的病原。本研究通过CCK-8、细胞ELISA、Western blot、时间过程分析、药物抑制病毒吸附和入胞试验,探究了依福地平对PEDV的抑制作用。结果表明,依福地平在20μmol/L浓度范围内,对Vero-E6和Marc-145细胞毒性较低;Western blot结果表明,依福地平能够显著降低宿主细胞中PEDV-N蛋白水平,主要抑制PEDV感染的入胞阶段。研究还发现,依福地平能抑制Ⅰ型单纯疱疹病毒和猪伪狂犬病毒感染宿主细胞,是一类潜在的广谱抗病毒药物。

关键词：猪流行性腹泻病毒依福地平病毒入胞广谱抗病毒效应

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源于屠宰场健康猪的猪链球菌分离菌株致病与耐药特征

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微生物学报 2024年

作者：许杨王瑞光彭泽仁吴宗福南京农业大学动物医学院农业农村部动物细菌学重点实验室世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室广东省养猪与猪病防控技术研究企业重点实验室

【目的】猪链球菌（Streptococcus suis， SS）是猪的常见致病菌，也是一种人畜共患病原。江苏曾于1998年暴发猪链球菌疫情，大量生猪死亡的同时，也导致14人感染死亡。因此，对江苏地区屠宰场健康猪进行猪链球菌感染调查，有重大的公... 详细信息

【目的】猪链球菌（Streptococcus suis， SS）是猪的常见致病菌，也是一种人畜共患病原。江苏曾于1998年暴发猪链球菌疫情，大量生猪死亡的同时，也导致14人感染死亡。因此，对江苏地区屠宰场健康猪进行猪链球菌感染调查，有重大的公共卫生意义。【方法】于2023年采集江苏两地屠宰场猪扁桃体，进行猪链球菌分离鉴定和血清分型，通过所分离菌株对斑马鱼和小鼠毒力测定、药敏试验及耐药基因检测，探究猪链球菌分离菌株的致病和耐药特征。【结果】2023年7月采集江苏昆山地区扁桃体样本阳性率为50.85% （30/59），分离鉴定出62株猪链球菌，其中分离率最高为31型（12.90%，8/62），其次为19型（11.29%，7/62）、NCL2型（8.06%，5/62）等；2023年7月、11月采集江苏丹阳地区扁桃体样本阳性率为60.71% （34/56），分离鉴定出77株猪链球菌，其中分离率最高为16型（11.69%，9/77），其次为9型（10.39%，8/77）、21型（10.39%，8/77）、31型（10.39%，8/77）等。两地分离株对林可酰胺类（98.56%，137/139）、大环内酯类（95.68%，133/139）、四环素类（96.40%，134/139）抗生素耐药率较高；97.84% （136/139）的菌株属于多重耐药菌株。所有菌株对头孢噻肟、万古霉素敏感。根据分离株来源及血清型选择42株（昆山市18株，丹阳市24株）代表菌株进行斑马鱼毒力测定，攻毒剂量为3×106CFU/尾时，有7株菌对斑马鱼致病力强，致死率≥80%。选择致死率≥80%且死亡趋势与强度对照无显著差异的3株代表菌株（分别为血清1型、3型、23型）进行小鼠试验，致死率均≥80%。【结论】江苏地区健康猪扁桃体的猪链球菌携带率较高（55.65%，64/115），97.84% （136/139）的分离株为多重耐药菌株，血清1型、3型、23型分离株致病力强，值得关注。

关键词：猪链球菌屠宰场江苏耐药特征致病特征

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2023年江苏地区屠宰场健康猪源猪链球菌致病与耐药特征

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微生物学报 2025年第1期65卷 211-224页

作者：许杨王瑞光彭泽仁吴宗福南京农业大学动物医学院江苏南京210014 农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210014 世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室江苏南京210014 广东省养猪与猪病防控技术研究企业重点实验室广东海大畜牧兽医研究院广东广州511400

【目的】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是猪的常见致病菌,也是一种人畜共患病原。江苏曾于1998年暴发猪链球菌疫情,大量生猪死亡的同时,也导致14人感染死亡。因此,对江苏地区屠宰场健康猪进行猪链球菌感染调查,具有公共卫生意义。【... 详细信息

【目的】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是猪的常见致病菌,也是一种人畜共患病原。江苏曾于1998年暴发猪链球菌疫情,大量生猪死亡的同时,也导致14人感染死亡。因此,对江苏地区屠宰场健康猪进行猪链球菌感染调查,具有公共卫生意义。【方法】于2023年采集江苏两地屠宰场健康猪扁桃体,进行猪链球菌分离鉴定和血清分型,通过所分离菌株对斑马鱼和小鼠毒力测定、药敏试验及耐药基因检测,探究猪链球菌分离菌株的致病和耐药特征。【结果】2023年7月采集江苏昆山地区扁桃体样本,阳性率为50.85%(30/59),分离鉴定出62株猪链球菌,其中分离率最高为31型(12.90%,8/62),其次为19型(11.29%,7/62)、NCL2型(8.06%,5/62)等;2023年7月、11月采集江苏丹阳地区扁桃体样本,阳性率为60.71%(34/56),分离鉴定出77株猪链球菌,其中分离率最高为16型(11.69%,9/77),其次为9型(10.39%,8/77)、21型(10.39%,8/77)、31型(10.39%,8/77)等。两地分离株对林可酰胺类(98.56%,137/139)、大环内酯类(95.68%,133/139)、四环素类(96.40%,134/139)抗生素耐药率较高;97.84%(136/139)的菌株属于多重耐药菌株。所有菌株对头孢噻肟、万古霉素敏感。根据分离株来源及血清型选择42株(昆山市18株,丹阳市24株)代表菌株进行斑马鱼毒力测定,攻毒剂量为3×106 CFU/尾时,有7株菌对斑马鱼致病力强,致死率≥80.00%。选择致死率≥80.00%且死亡趋势与强度对照无显著差异的3株代表菌株(分别为血清1型、3型、23型)进行小鼠试验,致死率均≥80.00%。【结论】江苏地区健康猪扁桃体的猪链球菌携带率较高(55.65%,64/115),97.84%(136/139)的分离株为多重耐药菌株,血清1型、3型、23型分离株致病力强,值得关注。

关键词：猪链球菌屠宰场江苏耐药特征致病特征

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猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体的构建及功能研究

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畜牧与兽医 2025年第6期57卷 98-104页

作者：张金霞曹莹张昊文刘德鹏李铎王晓冉田似报吴香菊齐静周萌王先炜杜以军南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 山东省农业科学院畜牧兽医研究所/农业农村部畜禽生物组学重点实验室山东济南250100 济南市企业服务中心山东济南250001

旨在构建猪三基序蛋白(TRIM)56 E3泛素连接酶活性突变体并验证其在干扰素刺激蛋白(STING)介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。对猪源、人源TRIM56进行同源性比对、氨基酸序列分析,确定猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点;设计猪TRIM56 E3泛... 详细信息

旨在构建猪三基序蛋白(TRIM)56 E3泛素连接酶活性突变体并验证其在干扰素刺激蛋白(STING)介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。对猪源、人源TRIM56进行同源性比对、氨基酸序列分析,确定猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点;设计猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体引物,定点突变猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点,构建猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体质粒并通过蛋白质免疫印迹(Western blot)验证表达;通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)试验、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)试验及免疫共沉淀(Co-IP)试验研究猪TRIM56及其E3泛素连接酶活性突变体在STING介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。结果:猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体构建成功;猪TRIM56促进STING介导的干扰素β(IFN-β)mRNA水平和启动子活性,促进STING K63连接的多聚泛素化修饰,而猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体没有显著促进作用。本研究为后续开展猪TRIM56在抗病毒天然免疫中的作用提供了有效工具。

关键词：猪TRIM56 E3泛素连接酶定点突变 STING

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猪伪狂犬病病毒ZJ01ΔgI/gE/TK株种子批的免疫原性鉴定

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中国兽医科学 2022年第7期52卷 861-866页

作者：姜辰龙马梓承吕林刘星白娟孙杨杨姜平南京农业大学动物医学院农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

本研究选用30头28~30日龄猪伪狂犬病病毒(PRV)阴性仔猪,随机分为6组,每组5头,第1~5组分别接种F1、F5、F20、F30、F35代次PRV TK/gE/gI基因缺失毒株ZJ01R病毒液,接种剂量为每头106.0 TCID50,第6组为非免疫对照组。接种后第28天用PRV ZJ0... 详细信息

本研究选用30头28~30日龄猪伪狂犬病病毒(PRV)阴性仔猪,随机分为6组,每组5头,第1~5组分别接种F1、F5、F20、F30、F35代次PRV TK/gE/gI基因缺失毒株ZJ01R病毒液,接种剂量为每头106.0 TCID50,第6组为非免疫对照组。接种后第28天用PRV ZJ01株攻击,结果显示,5个代次疫苗病毒免疫组猪PRV gB血清抗体均为阳性,gE抗体均为阴性,PRV ZJ01特异性中和抗体效价可达1∶32以上。用PRV ZJ01株强毒滴鼻攻击后,非免疫攻毒对照组猪出现严重的临床症状,表现明显的呼吸道症状与神经症状,3/5头猪死亡。5个代次ZJ01R免疫组猪攻毒后均无明显临床症状,脑组织PRV载量均明显低于攻毒对照组(P<0.05),免疫保护效力达100%。证明该疫苗毒株免疫原性稳定,可用于疫苗研制。

关键词：伪狂犬病病毒三基因缺失免疫原性稳定性

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HEK-293T细胞敲除TRIM25基因促进脑心肌炎病毒复制的研究

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畜牧与兽医 2022年第6期54卷 78-84页

作者：刘文文吕林朱慧欣延君芳姜平白娟南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

为了探究三方基序蛋白25(TRIM25)对脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)增殖的影响,在HEK-293T细胞上使用簇状规则间隔的短回文重复序列(CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除TRIM25基因,并通过PCR测序和Western blot确认敲除效果,然后观察敲除细胞形态并利用试剂盒测定TRIM25缺失后细胞增殖速度的变化,确认敲除细胞与野生细胞无明显差异,用EMCV感染敲除细胞后,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、病毒滴定测定和Western blot等方法测定病毒基因转录水平、蛋白表达情况。结果显示:感染EMCV后,敲除细胞与野生细胞相比,显著促进了病毒的转录水平、病毒蛋白的翻译水平和子代病毒的毒力(P<0.05)。综上,在HEK-293T细胞上,成功构建TRIM25缺失细胞系,且试验表明TRIM25的缺失有助于EMCV的复制。研究结果为后续TRIM25抗病毒机制研究提供了理论依据。

关键词： TRIM25基因基因敲除 HEK-293T细胞脑心肌炎病毒

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乙酰基转移酶毒素SsGNAT影响猪链球菌的黏附能力

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微生物学报 2023年第9期63卷 3574-3590页

作者：朱夏雨古其兵杨雪梅姚火春潘子豪南京农业大学动物医学院江苏南京210014 农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210014 世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室江苏南京210014 南靖县农业农村局福建南靖363600

【目的】猪链球菌(Streptococcus suis)是一种重要的人畜共患病病原,本研究旨在鉴定猪链球菌乙酰基转移酶毒素类毒素-抗毒素系统,并对其毒素功能进行分析,探讨猪链球菌毒素-抗毒素系统在细菌感染过程中发挥的作用。【方法】前期预测猪... 详细信息

【目的】猪链球菌(Streptococcus suis)是一种重要的人畜共患病病原,本研究旨在鉴定猪链球菌乙酰基转移酶毒素类毒素-抗毒素系统,并对其毒素功能进行分析,探讨猪链球菌毒素-抗毒素系统在细菌感染过程中发挥的作用。【方法】前期预测猪链球菌血清型5型菌株HN105基因组中假定的Ⅱ型毒素-抗毒素系统。进一步鉴定毒素-抗毒素系统的活性并分析该毒素-抗毒素系统的遗传进化关系;运用Western blotting揭示毒素在猪链球菌内的表达情况。同时以HN105为亲本株,构建毒素缺失株、抗毒素缺失株以及毒素-抗毒素缺失株,研究该系统对猪链球菌黏附能力、生物被膜形成能力、抗吞噬与胞内存活能力的影响。【结果】预测并鉴定出猪链球菌血清型5型菌株HN105基因组中DF184_RS00980-DF184_RS00985编码的乙酰基转移酶(Gcn5-related N-acetyltransferase,GNAT)毒素类毒素-抗毒素系统,根据保守结构域将该系统命名为SsMarR-SsGNAT。SsGNAT毒素在大肠杆菌(Escherichia coli)的周质间隙发挥毒性作用,且抗毒素可以中和毒素的毒性;猪链球菌SsGNAT毒素与目前已鉴定的乙酰基转移酶毒素氨基酸序列一致性较低且亲缘关系较远;SsGNAT毒素在猪链球菌内存在被切割的现象,且抗毒素表达量降低可上调SsGNAT毒素的表达量;SsGNAT毒素对猪链球菌的生物被膜形成能力、抗吞噬与胞内存活能力无影响,但可影响猪链球菌对人喉癌上皮细胞(human laryngeal cancer epithelial cells,Hep-2)和人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC)的黏附能力。【结论】发现并鉴定了猪链球菌中新的Ⅱ型毒素-抗毒素系统SsMarR-SsGNAT,SsGNAT毒素在大肠杆菌周质间隙发挥毒性作用,缺失后导致细菌对细胞的黏附水平显著上升,该发现为进一步揭示猪链球菌的致病机制提供参考。

关键词： 5型猪链球菌毒素-抗毒素系统毒素乙酰基转移酶黏附

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